腌菜中亚硝酸盐含量测定方法的比较

腌菜中亚硝酸盐含量测定方法的比较

亚硝酸盐通常被用作工业盐。它是一种白色或黄色的结晶或颗粒粉末。它没有味道，味道有点咸，有点涩，容易潮解，易溶于水和土壤中。它可能会很难溶于甲醇和其他有机溶剂。亚硝酸盐广泛存在于自然环境中,特别是存在于食物中,比如蔬菜、粮食、肉类、鱼类、蛋类都含有一定量的亚硝酸盐长期以来,由于腌菜能够长时间贮存,并且具有独特的风味而广受市民的喜爱,腌菜在市场上随处可见。研究表明:蔬菜是一种极易富集硝酸盐的食品,蔬菜在腌制过程中,由于微生物以及硝酸还原酶的作用,使得硝酸盐还原成亚硝酸盐目前测定亚硝酸盐含量的方法有很多种,常用的方法是盐酸萘乙二胺分光光度法本次课题采用的是在弱酸的情况下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生反应产生重氮化合物,再与α-萘胺耦合,形成紫红色的偶氮化合物,测定其吸光度。本次测定广西贺州市八步区部分腌菜的亚硝酸盐含量,旨在给当地市民提供有价值的参考依据。1材料和方法1.1药品、试剂及仪器大头菜、榨菜、梅菜、腌萝卜:购于阳光市场;凉拌菜:购于泰兴超市。亚硝酸钠、对氨基苯磺酸、α-萘胺、四硼酸钠、亚铁氰化钾、乙酸锌、盐酸、无水乙醇、氢氧化钠:以上药品均为分析纯;实验用水为超纯水。TU-1901双光束紫外可见分光光度计北京普析通用仪器有限责任公司;722可见分光光度计上海光谱仪器有限公司;FA1004电子天平上海舜宇恒平科学仪器有限公司;SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵郑州长城科工贸有限公司;101-1电热恒温鼓风干燥箱上海跃进医疗器械厂;HHS电热恒温水浴锅上海博迅实业有限公司医疗设备厂。1.2分光光度法20%盐酸溶液:量取54.8mL36.5%盐酸至100mL烧杯中,加水至100mL刻度线。1mg/mL亚硝酸钠标准储备溶液:准确称取0.5000g亚硝酸钠于100mL烧杯中,先加入少量水溶解,转入500mL容量瓶中,加水定容,摇匀,做储备液。5μg/mL亚硝酸钠标准工作溶液:量取5.00mL1mg/mL亚硝酸钠标准溶液于1000mL容量瓶中,加水定容,摇匀。4g/L对氨基苯磺酸溶液:称取2.000g对氨基苯磺酸固体溶于500mL20%盐酸中,混匀,置于棕色瓶中,避光保存。2g/Lα-萘胺溶液:准确称取0.5000gα-萘胺固体,先用少量95%酒精溶解,转入250mL容量瓶中,再用95%酒精定容,摇匀。硼砂饱和溶液:称取25g四硼酸钠固体溶于500mL温水中,冷却至室温。0.25mol/L亚铁氰化钾溶液:准确称取10.6190g亚铁氰化钾固体,溶于水中并转入100mL容量瓶中,加水定容,摇匀。1mol/L乙酸锌溶液:准确称取21.9000g乙酸锌固体,加入3mL冰醋酸,加水溶解,转入100mL容量瓶中,加水定容,摇匀。0.01mol/L氢氧化钠溶液:称取0.04g氢氧化钠固体于100mL烧杯中,加水至100mL刻度线,搅拌溶解。准确称取2.5000g经粉碎均匀的腌菜样品,置于250mL烧杯中,加入12.5mL硼砂饱和溶液,搅拌均匀,加入约100mL70℃左右的水,并在沸水浴中加热15min,取出冷却到室温,转入250mL容量瓶中,再加入5mL亚铁氰化钾溶液和5mL乙酸锌溶液以沉淀蛋白质,加水定容,加入1g活性炭1.4实验方法1.4.1标准曲线的绘制样品经蛋白质沉淀、除去脂肪后,在弱酸的情况下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应生成重氮盐,重氮盐再与α-萘胺试剂发生耦合反应,生成紫红色偶氮化合物,亚硝酸盐特效试剂α-萘胺溶液作显色剂,能够成功地避免实验中其他阴阳离子的影响反应1:反应2:分别吸取一定量的5μg/mL亚硝酸钠标准溶液,置于50mL容量瓶中,分别加入一定量的4g/L对氨基苯磺酸溶液,在一定的温度下,调节溶液的pH为5,摇匀,静置,再加入一定量的2g/Lα-萘胺溶液,加水至刻度,摇匀,静置,于1cm比色皿中,在最大吸收波长处测定吸光度,以亚硝酸钠标准溶液浓度C为横坐标,吸光度A为纵坐标,绘制标准曲线。1.4.3测定波长的确定吸取40mL滤液置于50mL容量瓶中,加入一定量的4g/L对氨基苯磺酸溶液,在一定的温度下,调节溶液的pH,摇匀,静置,再加入一定量的2g/Lα-萘胺溶液,加水至刻度,摇匀,静置,于1cm比色皿中,在最大吸收波长处测定吸光度。2结果与讨论2.1检测波长的测定反应1:吸取5.00mL5μg/mL亚硝酸钠标准溶液,置于50mL容量瓶中,加入2.00mL4g/L对氨基苯磺酸溶液,摇匀,静置3~5min,加水至刻度,摇匀,于1cm比色皿中,做光谱扫描,结果见图1。反应2:吸取5.00mL5μg/mL亚硝酸钠标准溶液,置于50mL容量瓶中,加入2.00mL4g/L对氨基苯磺酸溶液,摇匀,静置3~5min,再加入2.00mL2g/Lα-萘胺溶液,加水至刻度,摇匀,静置15min,于1cm比色皿中,做光谱扫描,结果见图1。由图1可知,反应1在紫外区267nm处吸光度达到最大,而在可见区无吸收。反应2在可见区520nm处吸光度达到最大,故选择267nm和520nm分别为反应1和反应2的最适宜测定波长,为了更好考察反应条件对反应体系的影响。2.2反应的温度对吸光度的影响吸取5.00mL5μg/mL亚硝酸钠标准溶液,置于50mL容量瓶中,加入2.00mL4g/L对氨基苯磺酸溶液,摇匀,静置时间分别是1,2,3,4,5,6min,加水至刻度线,混匀,于1cm比色皿中,在267nm处测量吸光度。以反应时间t为横坐标,吸光度A为纵坐标绘制曲线,见图2。由图2可知,随着反应时间的延长,体系的吸光度逐渐增大,当反应时间为4min时,吸光度急剧增大;当反应到5min时,吸光度达到最大值;当反应时间大于5min后,吸光度急剧下降。表明在5min时,反应已充分完成。因此,选择5min为反应1的最佳反应时间。吸取5.00mL5μg/mL亚硝酸钠标准溶液,置于50mL容量瓶中,加入2.00mL4g/L对氨基苯磺酸溶液,摇匀,温度分别控制在10,15,20,25,30,35℃,静置5min,加水至刻度线,混匀,于1cm比色皿中,在267nm处测量吸光度。以反应温度T为横坐标,吸光度A为纵坐标绘制曲线,见图3。由图3可知,体系的吸光度随着温度的升高而增大,当温度升到25℃时,体系的吸光度达到最大,随后再升高温度,吸光度反而缓慢下降,而20~35℃之间的吸光度相差不大,较稳定。故选择25℃为反应1的最佳温度。吸取5.00mL5μg/mL亚硝酸钠标准溶液,置于50mL容量瓶中,加入2.00mL4g/L对氨基苯磺酸溶液,调节pH为1,2,3,4,5,6,7,摇匀,温度控制在25℃,静置5min,加水至刻度线,混匀,于1cm比色皿中,在267nm处测量吸光度。以溶液pH为横坐标,吸光度A为纵坐标绘制曲线,见图4。由图4可知,随着pH的增大,吸光度逐渐增大,当pH达到4时,吸光度急剧增大;当pH为5时,吸光度达到最大值;当反应pH>5时,吸光度急剧下降。表明pH为5时,反应已充分完成。因此,选择pH5为反应1的最佳反应pH值。2.2.1.吸光度测定吸取5.00mL5μg/mL亚硝酸钠标准溶液,置于50mL容量瓶中,加入2mL4g/L对氨基苯磺酸溶液的量分别为0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0mL,调节pH为5,温度控制在25℃,摇匀,静置时间为5min,加水至刻度线,混匀,于1cm比色皿中,在267nm处测量吸光度。以显色剂用量V为横坐标,吸光度A为纵坐标绘制曲线,见图5。由图5可知,随着显色剂用量的增加,吸光度逐渐增大,当显色剂用量为2.0mL时,吸光度达到最大值,反应能够充分完成;当显色剂用量大于2.0mL后,吸光度没有上升反而下降。因此,选择显色剂用量2.0mL为反应1的最佳显色剂用量。2.2.2反应2的反应体系吸取5.00mL5μg/mL亚硝酸钠标准溶液,置于50mL容量瓶中,加入2.00mL4g/L对氨基苯磺酸溶液,调节pH为5,摇匀,温度控制在25℃,静置时间为5min,再加入2.00mL2g/Lα-萘胺溶液,加水至刻度,摇匀,静置时间分别为5,10,15,20,25,30min,于1cm比色皿中,在520nm处测量吸光度。以反应时间t为横坐标,吸光度A为纵坐标绘制曲线,见图6。由图6可知,随着反应时间的延长,吸光度缓慢增大,当反应时间为30min时,吸光度达到最大值,反应能够充分完成;当反应时间继续延长时,吸光度没有上升反而下降。因此,选择30min为反应2的最佳反应时间。吸取5.00mL5μg/mL亚硝酸钠标准溶液,置于50mL容量瓶中,加入2.00mL4g/L对氨基苯磺酸溶液,调节pH为5,摇匀,温度控制在25℃,静置5min,加水至刻度,混匀,再加入2.00mL2g/Lα-萘胺溶液,加水至刻度,温度控制在10,15,20,25,30,35,40℃,摇匀,静置30min,于1cm比色皿中,在520nm处测量吸光度。以温度T为横坐标,吸光度A为纵坐标绘制曲线,见图7。由图7可知,吸光度随着温度的上升而增大,当温度达到20℃时,吸光度达到最大值,再升高温度,体系的吸光度反而下降,且25℃后的吸光度趋于稳定。故选择20℃为反应2的最佳温度。2.2.2.,5,6,7-四氢-3-硫基苯磺酸钠sdps-2,3,4,5,6,5,6,7--4-5,5,6,7-7--4-5,5,6-7-----3-5,5,6-7---4,5,5,6-5,5,7-4-5,5,6-7--4-10-甲基苯磺酸酯ld-b对原溶液ph的影响吸取5.00mL5μg/mL亚硝酸钠标准溶液,置于50mL容量瓶中,加入2.00mL4g/L对氨基苯磺酸溶液,调节pH为5,摇匀,温度控制在25℃,静置5min,再加入2.00mL2g/Lα-萘胺溶液,加水至刻度,控制pH为1,2,3,4,5,6,7,温度控制在20℃,静置30min,于1cm比色皿中,在520nm处测量吸光度。以反应pH为横坐标,吸光度A为纵坐标绘制曲线,见图8。由图8可知,溶液的吸光度随pH的变化影响不大,且原溶液的pH值为4。因此,选择pH4为反应2的最佳反应pH值。2.2.2.-n-l-4-甲基--胺分光光度法吸取5.00mL5μg/mL亚硝酸钠标准溶液,置于50mL容量瓶中,加入2mL4g/L对氨基苯磺酸溶液,调节pH为5,温度控制在25℃,摇匀,静置时间为5min,再加入2g/Lα-萘胺溶液,用量分别为0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0mL,加水至刻度,控制pH为4,温度控制在20℃,摇匀,静置30min,于1cm比色皿中,在520nm处测量吸光度。以显色剂用量V为横坐标,吸光度A为纵坐标绘制曲线,见图9。由图9可知,随着显色剂用量的增大,吸光度缓慢增大,显色剂用量为2.0mL时,吸光度达到最大值,反应能够充分完成;当显色剂用量大于2.0mL后,吸光度没有上升而是缓慢下降。因此,选择显色剂用量2.0mL为反应2的最佳显色剂用量。2.3对氨基苯磺酸溶液4g/l分别吸取0,0.50,1.00,1.50,2.00,2.50,3.00mL5μg/mL亚硝酸钠标准溶液,置于50mL容量瓶中,分别加入2.0mL4g/L对氨基苯磺酸溶液,调节pH为5,温度控制在25℃,摇匀,静置时间为5min,再加入2.0mL2g/Lα-萘胺溶液,加水至刻度,温度控制在20℃,摇匀,静置30min,于1cm比色皿中,在520nm处测定吸光度。以亚硝酸钠标准溶液浓度C为横坐标,吸光度A为纵坐标,绘制标准曲线,见图10。由标准曲线可知回归方程为A=1.4307C+0.0037,相关系数2.4亚硝酸盐含量的测定吸取40mL滤液置于50mL容量瓶中,加入2.0mL4g/L对氨基苯磺酸溶液,调节pH为5,温度控制在25℃,摇匀,静置时间为5min,再加入2.0mL2g/Lα-萘胺溶液,加水至刻度,控制pH为4,温度控制在20℃,摇匀,静置30min,于1cm比色皿中,在520nm处测定吸光度,平行5次。不同类型腌菜样品中亚硝酸盐含量测定的结果见表1。由表1可知,不同的腌菜中亚硝酸盐的含量存在着较大的差异。在所测的5种腌菜中,亚硝酸盐含量最高的大头菜为4.9529mg/kg,其次的榨菜、凉拌菜分别为4.4295,4.3082mg/kg,含量最低的梅菜为0.6378mg/kg。其中亚硝酸盐含量最低的梅菜和含量最高的大头菜,其含量相差8倍。腌制食品中的亚硝酸盐含量的国家标准为20mg/kg2.5检测限制的确定用水代替样品滤液在相同条件下测定吸光度,平行20次。以20次测定的试剂空白标准差的3倍表示该方法的检测限,为1.5μg/L。2.6精密度的测定吸取5.0mL5μg/mL亚硝酸钠标准溶液,置于50mL容量瓶中,分别加入2.0mL4g/L对氨基苯磺酸溶液,调节pH为5,温度控制在25℃,摇匀,静置时间为5min,再加入2.0mL2g/Lα