12种苯甲醛类化合物的结构与其寒热食性的关系

12种苯甲醛类化合物的结构与其寒热食性的关系

中医药效因素是中医理论体系的重要组成部分。中医热效应理论是中医药效应理论的核心，对指导中医的临床应用具有重要意义。除极少数单一成分为主的中药外,大部分中药都是由多种成分组成的混合物。它们的药性很可能是由这些混合物中每个成分的药性叠加而成。为了研究寒热药性与成分结构之间的关系,则需要分离中药中的每个成分,并测定其含量。这样将使成分结构与寒热药性之间的研究变得特别复杂。如果从同类结构化合物着手,则研究工作便于开展,而且构效关系也容易获取。传统上中药寒热药性是通过人体对临床用药的反应总结获得的。在中医证本质研究中用热药造热证动物模型或寒药造寒证模型的方法也可以用来评价药物的寒热属性药物、试剂和仪器CO苯甲醛、对羟基苯甲醛、2,4-二羟基苯甲醛、3,4-二羟基苯甲醛、3,4,5-三甲氧基苯甲醛、2,4,6-三甲氧基苯甲醛、间硝基苯甲醛、2-硝基苯甲醛、对氯苯甲醛、香草醛、邻香草醛、异香草醛,均购自阿拉丁试剂公司,为分析纯。HyClone改良型RPMI-1640培养液(赛默飞世尔生物化学制品北京有限公司),四季青无支原体胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司),二甲基亚砜(DMSO),磷酸缓冲液(PBS),MTT(Simga),0.25%胰蛋白酶(西安舟鼎国生物技术有限公司)。人肝癌细胞株HepG2,人乳腺癌细胞株MCF-7均由空军军医大学(第四军医大学)提供。方法1.体外细胞密度检测将HepG2细胞及MCF-7细胞消化于含有10%胎牛血清的RPMI-1640培养液(pH=7.0~7.4)中,在恒温培养箱中37℃、5%CO分别取对数生长期HepG2细胞及MCF-7细胞,胰酶消化后调整细胞密度为5×104.统计方法化合物的寒性用MTT法分别考察了12种苯甲醛类化合物在一定浓度范围内对HepG2与MCF-7两种细胞体外增殖的影响,结果见表1-表6。苯甲醛、对氯苯甲醛、2-硝基苯甲醛、间硝基苯甲醛在0.1~50μg/mL的浓度范围内对HepG2细胞和MCF-7细胞的增殖都表现为抑制作用,对羟基苯甲醛、2,4-二羟基苯甲醛、3,4-二羟基苯甲醛、3,4,5-三甲氧基苯甲醛、2,4,6-三甲氧基苯甲醛、香草醛、邻香草醛、异香草醛在0.1~50μg/mL的浓度范围内对HepG2细胞和MCF-7细胞体外增殖的影响表现为低浓度促进,高浓度抑制,以抑制率对浓度作图,所得曲线见图1-图2。从图1-图2中可以直观地看到苯甲醛、对氯苯甲醛、2-硝基苯甲醛、间硝基苯甲醛对HepG2和MCF-7细胞体外增殖的抑制率在整个浓度范围内均为正值,说明这4种化合物在该浓度范围内均表现为抑制细胞生长,其抑制率与浓度变化趋势大致相同,即随着浓度的增大,抑制率逐渐增大,抑制作用增强,因此说明这4种化合物为寒性。而对羟基苯甲醛、2,4-二羟基苯甲醛、3,4-二羟基苯甲醛、3,4,5-三甲氧基苯甲醛、2,4,6-三甲氧基苯甲醛、香草醛、邻香草醛、异香草醛对HepG2和MCF-7细胞体外增殖的影响表现为在低浓度时抑制率为负值,随着浓度的增大,抑制率转为正值,且有浓度依赖关系,说明这8种化合物在低浓度时促进细胞的生长增殖,而在高浓度时则抑制细胞的生长,故认为它们为热性。取代热性和热性本研究用此前本课题组建立的细胞学方法评估了12种苯甲醛类化合物的寒热药性,总结了它们结构与寒热药性之间的关系。结果显示寒热药性是由化合物的结构决定的。以苯甲醛为基本结构,它抑制细胞生长显示寒性。吸电子的硝基和氯取代使其抑制作用更强,寒性增强。取代位置对其寒性也有影响,间硝基取代比邻硝基取代抑制作用强,寒性更强。苯甲醛上羟基和甲氧基取代苯甲醛促进细胞生长显示热性。羟基和甲氧基取代的位置和个数对于寒热性影响很大。例如,3,4-二羟基苯甲醛比2,4-二羟基苯甲醛对细胞的促进作用强,热性更强;3,4,5-三甲氧基苯甲醛比2,4,6-三甲氧基苯甲醛热性强;异香草醛,香草醛和邻香草醛热性依次减弱。苯甲醛邻位取代羟基或甲氧基,比非邻位相应的取代热性弱。对于羟基和甲氧基取代的苯甲醛来说取代的位置比取代基的个数更重要。综上所述,化合物的寒热药性取决于其结构。1.仪器2.药物和试剂3.dmso溶液的配制分别准确称取12种苯甲醛类化合物各5mg,溶于1mLDMSO中,超声15min,使之充分溶解。逐级稀释使药物浓度分别为0