醋酸甲羟孕酮的高效液相色谱测定

醋酸甲羟孕酮的高效液相色谱测定

醋氨酸钠，又称安宫黄酮，广泛用于月经不调、功能子宫出血、预备期或习惯性流产。片剂可用作长期避孕剂，可用于治疗乳腺癌和肾脏癌。对肿瘤进行化疗可以保护骨骼，降低消化反应，抑制人类癌的ls17171757吨细胞。1仪器和试剂1200高效液相色谱仪,6120质谱检测器(美国安捷伦公司);XDB-C2方法和结果2.1溶液的制备2.1.1稀土剂乙腈、二氯甲烷的1∶1混合溶液。2.1.3对照溶液的制备精密量取杂质对照品储备液5.0mL置20mL量瓶中,并用稀释剂稀释至刻度,混合均匀,即得。2.1.4试验溶液的制备精密称取约200mg醋酸甲羟孕酮样品置1mL量瓶中,并用稀释剂稀释至刻度,混合均匀,即得。2.2铬和铬的形成2.2.1条件1色谱柱XDB-C2.3高温、光照、高湿破坏样品的制备分别称取约200mg的醋酸甲羟孕酮样品置1mL量瓶中,分别于60℃、48000Lx紫外可见光、40℃、75%湿度条件下放置1周,用稀释剂稀释至刻度,混合均匀,得高温、光照、高湿破坏样品。另分别称取约200mg醋酸甲羟孕酮样品置2mL量瓶中,分别加入对照品溶液、1.0mL1mol·L2.4l3.7方法进样线性回归分析分别精密量取杂质对照品储备液5.0,5.0,1.0,1.0,0.5mL置10,20,10,20,20mL量瓶中,用稀释剂稀释至刻度,混合均匀后,此溶液为L5、L4、L3、L2、L1。精密量取2.0mLL1溶液置10mL量瓶中,用稀释剂稀释至刻度,混合均匀,此溶液作为L6溶液。L1~L6溶液分别按“2.2”项下方法进样分析,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,按最小二乘法进行线性回归,得回归方程。对甲苯磺酸甲酯回归方程:y=5780.6x-164.51,r=1.000,对甲苯磺酸甲酯回归方程y=29672x-1292.6,r=0.9998,对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸甲酯在0.05~5.08uf06dg·mL2.5定量限的确定以信噪比>10为定量限,信噪比>3为检测限。线性溶液L6即为对甲苯磺酸甲酯定量限溶液,精密量取3.0mLL6溶液置10mL量瓶中,用稀释剂稀释至刻度,混合均匀,此溶液对甲苯磺酸乙酯定量限溶液;分别精密量取对苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯定量限溶液5.0mL置不同10mL量瓶中,用稀释剂分别稀释至刻度,混合均匀,此溶液作为检测限溶液,分别按“2.2”项下方法进样分析。对甲苯磺酸甲酯定量限为0.10ng(S/N=14.1),检测限均为0.05ng(S/N=4.0),对甲苯磺酸乙酯定量限为0.03ng(S/N=12.2),检测限为0.02ng(S/N=5.3)。2.6精密度按“2.1”对照品溶液制备方法,分别配置6份精密度测试溶液,分别按“2.2”项下方法进样分析。对甲苯磺酸甲酯峰面积的RSD为4.70%,对甲基苯磺酸乙酯面积的RSD为4.00%。2.7醋酸甲羟孕酮检测精密量取0.7mL线性试验中L3、L2、L1浓度溶液分别置1mL量瓶中,每个浓度配制3份,分别精密称定醋酸甲羟孕酮样品200mg(批号:X2-110823,对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯均未检出),置各量瓶中,混合均匀,然后“2.2”项下方法分别进样分析,结果见表1。2.8流动相aph取线性溶液L1在不同柱温(25,30,35℃),不同流动相A(pH为6.7,7.0和7.2)分别按“2.2”项下方法进样分析,对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯均能有效分离,方法进行微调时对检测结果无影响,方法耐用性良好。3讨论3.1杂质检测能力提高进样浓度是最直接有效增加微量基因毒性杂质检测能力的办法,醋酸甲羟孕酮在三氯甲烷中极易溶解,在丙酮中溶解,在乙酸乙酯中略溶,在无水乙醇中微溶,在水中不溶3.2铬分离条件对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯结构上只有一个甲基的差异,为满足同时快速分析2个物质,选择色谱柱XDB-C3.3对甲基苯磺酸甲酯提高离子源气体流速、干燥气体温度等均可以改善质谱检测灵敏度。本研究发现在相同浓度时,对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯在质谱中的信噪比有较大差异,对甲苯磺酸乙酯色谱峰的峰高明显高于对甲苯磺酸甲酯色谱峰,这可能是由于结构上的差异使对甲苯磺酸乙酯更易接收质子带电从而获得更高的灵敏度,这方面我们将在后续的工作中深入研究。醋酸甲羟孕酮中对甲基苯磺酸甲酯,对甲基苯磺酸乙酯的LC-MS检测方法验证结果表明线性、重复性、精密度、专属性和系统耐用性好,最低检测限为≤0.13μg·g醋酸甲羟孕酮(药用级,浙江仙琚制药股份有限公司,批号:X2-110823);对甲基苯磺酸甲酯(上海阿拉丁生化科技股份有限公司,批号:F1012054;纯度:98.0%);对甲苯磺酸乙酯(上海阿拉丁生化科技股份有限公司,批号:E1012037;纯度:98.0%);乙腈、二氯甲烷为色谱纯;其他试剂均为分析纯,去离子水。2.1.2对照品储备液的制备精密称取对甲基苯磺酸甲酯、对甲基苯磺酸乙酯各约