必欧瀚生物技术合肥

BIOHITOYJ工程名称编写人 批准人

必欧瀚生物技术〔合肥〕II〔PGII〕检测日期 文件号.工程信息工程名称检测目的检测方法工程原理检测原理反 第一步应 其次步过第三步程第四步第五步

胃蛋白酶原II〔PGII〕检测标准操作程序PepsinogenII，英文英文缩写：PGII中文 胃蛋白酶原IIII〔PGII〕检测试剂盒承受酶联免疫法〔ELISA〕，定量PGII酶联免疫法〔Elisa〕Biohit的PGII〔ELISA〕检测试剂盒承受双抗体〔吸附于微孔板上的PGII特异性捕获抗体和辣根过氧化物酶〔HRP〕标记的抗体〕夹心法的酶学免疫分析技术PGII特异性的单克隆抗体，与样本中的PGII分子结合。洗板，除去残留样本。HRPPGII〔抗原抗体结合物〕结合。TMB底物溶液，被酶氧化后显蓝色。参加终止液终止酶反响后显黄色。其颜色的深度与PGII浓度呈正相关。样本采集与处理病人预备事项预备事项禁食/特种饮食病人的预备事项样本采集特别要求样本类型及处理方法推举类型

具体内容测试前饮食清淡10小时应保持空腹。避开溶血。待测血液必需完全凝固后再分别血清，杜绝混入红细胞，纤维蛋白等，以防止堵塞仪器管道。血清类型样本量收集容器运输容器运输要求

可承受类型最正确量最少量

血浆〔EDTA〕1.0ml0.5ml含促凝胶试管、一般试管〔不含其它物质〕或相应抗凝管带塑胶盖试管在室温条件下运送，可承受冷冻及冷藏取样。稳定性及贮存要求时间要求

室温〔18-28˚C〕冷藏温度〔2-8˚C〕冷冻温度〔-20˚C〕无

8小时7天个月LOM-4-02-01-01BIOHITOYJ工程名称编写人 批准人

必欧瀚生物技术〔合肥〕II〔PGII〕检测日期 文件号样本拒收及实行措施影响／干扰因素其它条件

拒收严峻溶血及被微生物污染的标本纤维蛋白、严峻溶血、脂浊及其它颗粒性物质应避开反复冻融标本试剂盒组成、试剂的预备及所供给物质的稳定性全部试剂用量足够于96次测试。不同批号试剂盒中的试剂不行混合使用。微孔板组成：12×8条，共96PGIIIgG1。预备：直接使用。稳定性：效期内稳定，板条使用后应废弃。浓缩洗涤液〔10倍〕组成：120ml〔10倍稀释后使用〕20和0.1%ProCline300为防腐剂。预备：用蒸馏水将洗涤液稀释10倍〔如100ml洗涤液＋900ml蒸馏水〕后混匀使用。稳定性：稀释后在〔2～8℃〕2周。稀释液组成：100ml磷酸盐缓冲液，含有酪蛋白、吐温20、0.1%ProCline300为防腐剂和红色染剂。预备：直接使用。稳定性：效期内稳定。空白液组成：1.5ml人类血清基质的磷酸盐缓冲液，含有0.1%ProCline300为防腐剂。预备：直接使用。稳定性：效期内稳定。标准液组成：3瓶1.5ml人类血清基质的标准液，含有0.1%ProCline300为防腐剂。每批试剂盒中PGII标准液的浓度约为6.3µg/l、12.5µg/l、50µg/l，其具体浓度值见瓶签。预备：直接使用。稳定性：效期内稳定。比照液组成：1.5ml人类血清基质的PGII比照液，含有0.1%ProCline300为防腐剂。PGII期望值见瓶签。预备：直接使用。稳定性：效期内稳定。酶标液组成：15ml辣根过氧化物〔HRP〕标记单克隆抗人类PGII抗体，保存在稳定剂及0.1%ProCline300预备：直接使用。稳定性：效期内稳定。底物液组成：15ml四甲基联苯胺〔TMB〕溶液，含有防腐剂。预备：直接使用。LOM-4-02-01-01BIOHITOYJ工程名称编写人 批准人

必欧瀚生物技术〔合肥〕II〔PGII〕检测日期 文件号稳定性：效期内稳定，避开阳光直射。终止液组成：15ml硫酸溶液〔0.1mol/l〕。预备：直接使用。稳定性：效期内稳定。封孔膜3张孵育用塑料封孔膜。使用说明书需要的仪器设备及其他试验用品·蒸馏水或去离子水·20～1000µl移液器及一次性吸头·1～10ml移液器·可吸取100µl的8通道移液器·1000ml量筒·稀释样本用涡流混匀器·稀释样本用试管·洗板机·纸巾或吸水纸·计时器·恒温箱，37℃·酶标仪，测定波长450nm·采集血浆或血清的塑料管·盛冰用容器试验操作流程试验前预备将全部试剂和微孔板恢复至室温〔20-25℃〕，平衡30min10倍稀释〔100ml浓缩洗涤液+900ml蒸馏水〕，冰冻样本快速溶解于室温水槽中摇匀让其溶解，试验前应认真阅读说明书，推举全部空白，标准液、比照液和样品均做复孔测试。每次试验均应设置空白液、标准液及比照液孔。测试前所有的试剂盒样本应充分混匀试验步骤全自动酶标仪具体操作参见例如：BIOBASE2023全自动酶免工作站标准操作文件。手工操作流程如下：第一步样本稀释5〔孔外稀释：100ul+400ul20ul+80ul液〕，充分混匀。其次步标本充分混匀试剂及已稀释好的样本，向反响孔中分别参加100ul空白液、标准液、比照液和样本，封孔膜封板3760加样例如图示见说明书LOM-4-02-01-01BIOHITOYJ工程名称编写人 批准人

必欧瀚生物技术〔合肥〕II〔PGII〕检测日期 文件号第三步洗涤350ul〔400ul45〕10置微孔板于干净的吸水纸上叩击数次。洗板机洗板流程：预洗——选择对应的洗板程序〔3×350μl〕——运行——完毕后吸水纸上叩击1-2次即可洗板机留意事项：a.请依据试验室规程定期对洗板机进展校准;b.洗板机清洗程序设置请参阅设备商供给的洗板机标准操作sop文件；c.微孔板置于洗板机板槽时确保放置稳当；建议第四步、第六步、第七步操作使用8通道移液器。第四步酶标液100ul已混匀的酶标液，用封孔膜封上微孔板，在室温3730分钟。第五步洗涤参照第三步。第六步底物液100ul〔20-25℃〕30封孔膜。第七步终止反响100ul第八步酶标仪测定30450nmsop酶标仪测定流程：启动酶标仪——翻开相应的软件——放置微孔板——选择450nm波长读数，选择相应曲线——导出数据；留意事项：a.加完终止液不要马上读数，一分钟前方可；b.微孔板放置正确，否则读数有误；c.测定完毕后，微孔板临时备份，以免数据有误，需重测定。注：酶标仪测定数值后推举使用e-LisaXL〔2〕对结果进展计算。结果计算A)B)自动计算，将吸光度转换为PGII浓度。由於标准液是直接使用，毋须使用稀释因子培增病人样本的结果。手工计算计算空白液、标准液、比照液和样本各复孔测试的平均吸光度，各测试均值减去空白液的平均吸光度值。0点为起点，标准液的平均吸光度值为YX轴,绘出最正确拟合曲线作为标准曲线。依据样本及比照液的平均吸光度值，在曲线上查出对应的PGII浓度值。建议使用模板，请查阅模板附件1。自动计算有多种计算机程序用于自动计算。在标准液最高浓度范围内，运用简洁二项式计算未知浓度；当样本的吸光度值超过最高浓度标准液的吸光度值时，建议使用更为简单的外推计算法。建议使用模板，请查阅附件2。标2。LOM-4-02-01-01BIOHITOYJ工程名称编写人 批准人

必欧瀚生物技术〔合肥〕II〔PGII〕检测日期 文件号结果报告及复查标准结果审核结果推断 当PGI与PGII的比值<3.0时说明患者的胃体有严峻萎缩，且胃癌发生率将增高。所定的临界值仅供参考。同一样本的结果与承受不同厂家的试剂盒检测所得的结果可能有差异,由于不同厂家对PGII产品检测承受的标准化、试剂规定和分析方法有差异,所以不同厂家的检测结果不具有可比性。使用单位生物参考区间

ug/l3-15临床背景PGII是由胃窦部的幽门腺和十二指肠近端的Brunner氏腺黏膜的主细胞和颈细胞分泌。正常时，血清或I〔PGI〕II〔PGII〕4：1。PGIPGII的比值随着胃体萎缩性胃炎的严峻程度增加呈直线下降。中、重度萎缩性胃炎时，其比值为<2.5。PGI与PGII的比值较低时，胃癌的发生率增加5倍。PGII的测试用于关心胃体萎缩性胃炎的诊断，以及评估癌变的发生率。PGII测试需和PGIPGIPGII的比值。诊断程序的限制同其他诊断手段，Biohit的PGII检测试剂盒的测试结果，必需综合病人的临床病症和其他信息进展分析。留意事项试验前请检查全部仪器〔移液枪、洗板机、酶标仪〕，确保仪器的正常使用，并定期对仪器进展校准；试验时必需戴手套；4℃保存，枯燥剂置于板底；样品处理及保存请遵从试剂盒说明书；试验前全部试剂盒成分肯定要室温下平衡30分钟左右；试剂盒试剂室温平衡后要混匀充分，建议使用涡旋振荡器；微孔板拆封使用前对光观看孔底是否干净，正常状况下孔底透亮无污渍，否则弃用；LOM-4-02-01-01BIOHITOYJ工程名称编写人 批准人

必欧瀚生物技术〔合肥〕II〔PGII〕检测日期 文件号出；除加样外，其他步骤请尽量使用8通道移液器；酶标液孵育完毕后微孔板肯定要清洗干净，否则对试验结果影响较大；底物液肯定要避光处理；底物液孵育完加终止液时避开液体溅出；终止液加完30分钟内酶标仪测定结果，测定前确保混匀，一般酶标仪会有振荡功能；试验完毕测定后，微孔板临时保存，勿丢弃。试验前请做好加样图谱；CV%大小〔CV%≤10%〕确保试验的准确性；建议有自己的中控样品*，从而能推断每次试验的准确性；450nm；空白比照的吸光度≤0.3，否则试验不行靠；试验完毕后请遵循试验室规定对废弃物进展处理。*中