肉制品中致病菌的检测（沙门氏菌）-致病菌检测的方法

致病菌检测的方法

致病菌检验方法一目录页

沙门氏菌检验方法二致病菌检验方法1.大肠埃希氏菌检验方法2.志贺氏菌检验方法3.金黄色葡萄球菌检验方法4.副溶血性弧菌检验方法5.蜡样芽孢杆菌检验方法（大肠埃希氏菌检验方法）大肠埃希氏菌检验方法国标法参看食品卫生微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验(GB/T4789.6)。检测大肠杆菌及其肠毒素的新技术、新方法很多。如用K88单抗血清对粪中K88菌检出率比常规培养法提高1倍，最小检测菌量为10000cfu/mL。987P酶标单抗对粪便和肠内容物最小检出菌量为2000cfu/mL。对致病性大肠杆菌毒力基因检测，过去多用动物或细胞培养测定，现可用其单抗以多种免疫学手段检出。如用免疫磁分离法检测牛粪便和食品标本的大肠杆菌O157：H7，可提高了大肠杆菌O157：H7感染病例的检出率。（志贺氏菌检验方法志贺氏菌检验方法目前志贺氏菌检验多采用国标法(GB/T4789.5)。（金黄色葡萄球菌检验方法金黄色葡萄球菌检验方法MPN法：适用于检测带有大量竞争菌的食品及其原料和未经处理的含少量金黄色葡萄球菌的食品。直接平板计数法：适用于检查金黄色葡萄球菌数不小于10/g（ml）的食品增菌培养法：适用于检查含有受损伤的金黄色葡萄球菌的加工食品。定量方法定性方法（副溶血性弧菌检验方法副溶血性弧菌检验方法副溶血性弧菌的检验多采用国标法(GB/T4789.7)（蜡样芽孢杆菌检验方法）蜡样芽孢杆菌检验方法蜡样芽孢杆菌检验多采用国标法(GB/T4789.28)。国标法免疫学标记检测方法

分子生物学方法其他检测沙门氏菌的方法沙门氏菌检验方法（国标法）国标法GB4789.4—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》对沙门氏菌的常规检验包括以下5个基本步骤：预增菌和增菌；分离；生化试验；血清学鉴定；血清学分型(选做项目)；结果与报告。免疫学标记检测方法.酶联免疫吸附法(ELISA).斑点酶联免疫吸附法（Dot-ELISA）.免疫荧光抗体技术.其它免疫学标记检测方法（免疫学标记检测方法）（免疫学标记检测方法）免疫学标记检测方法免疫标记技术就是将已知抗体或者抗原上标记上易显示的物质(标记分子)，通过检测标记物反映有无抗原抗体反应,从而间接检测出微量的抗原或者抗体。

所谓的标记分子是那些即使在超微量时也能通过特殊的方法将其检测出来，高敏感性的标记分子主要有突光素、酶、放射性同位素3种。免疫标记技术不仅大大提高了试验的敏感性，和光镜或电镜技术结合后，能对待检物质做精细定位，为临床研究和诊断提供了极大的方便。（酶联免疫吸附法）

酶联免疫吸附法(ELISA)ELISA的原理是是把抗原或抗体预先结合在某种固相载体表面，然后加入受检样品和酶标抗原或抗体使其与结合在固相载体上的抗原或抗体起反应形成抗原抗体复合物，经洗涤去除反应液中其他物质，加入酶反应底物后，底物被固相载体上的酶催化变为有色产物，最后通过定性或定量分析有色产物即可确定样品中待测物质含量。该法灵敏度高、特异性强，可避免人为因素造成的假阴性，且能在短时间内快速筛去大量的阴性样品，（斑点酶联免疫吸附法）斑点酶联免疫吸附法（Dot-ELISA）Dot-ELISA是以纤维素膜作为固相载体的一种新型免疫检测技术，其原理与常规ELISA法相同，可用于抗原或抗体的定性或定量检测。其与ELISA的不同之处在于：一是将固相载体以硝酸纤维素滤膜、确酸醋酸混合纤维素滤膜、重氮节氧甲基化纸等固相化基质膜代替，用以吸附抗原或抗体；二是显色底物的供氢体为不溶性的，结果在基质膜上出现有色斑点进行判定。该方法具有简单、快速、灵敏、特异性强等特点,并具有较高的可重复性，而且阳性反应色斑易于观察,阳性检出率也高于常规分离培养法，且整个操作过程不需要任何特殊仪器，适用于大批量样品的快速检测，可以节省大量人力、物力、财力，便于在基层单位推广应用（免疫荧光抗体技术）免疫荧光抗体技术免疫荧光抗体技术是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗体，再用这种荧光抗体作为探针检测组织或细胞内的相应抗原。在组织或细胞内形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受外来激发光的照射而发生明亮的荧光(黄绿色或橘红色)，可以看见荧光所在的组织细胞，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定含量。（其它免疫学标记检测方法）其它免疫学标记检测方法免疫磁性分离法是将特异性抗体偶联在磁性颗粒表面，通过与样品中靶细菌的特异性结合和外加磁场的作用，使靶细菌得到分离、浓缩。此技术直接检测细菌特异性好，但灵敏度低。分子生物学方法.核酸探针.聚合酶链式反应技术(PCR).环介导等温扩增技术（LAMP）.基因芯片技术（分子生物学方法）（核酸探针）核酸探针通过酶切质粒DNA来进行，它主要采用一定数量的限制性内切酶，对提纯质粒的DNA酶切，分别得到不同DNA片断，用于检测食品中沙门氏菌的存在（聚合酶链式反应技术(PCR)）聚合酶链式反应技术(PCR)PCR技术是一项体外酶促扩增DNA技术，具有特异性强、敏感性高、操作简便、快速高效等特点。目前，PCR技术是一种快速、简便、特异、灵敏检测沙门氏菌的方法。（环介导等温扩增技术）环介导等温扩增技术（LAMP）LAMP技术的原理是针对靶基因的6

个区域按照规定的顺序设计4种特异的引物，因此

LAMP

技术扩增的特异性很高，只要出现扩增就可以判定靶基因存在。同时，在DNA

延伸合成过程中，从

dNTP

中析出的焦磷酸离子与反应溶液中的镁离子结合，会产生白色的焦磷酸镁沉淀。

因此只要用肉眼观察白色混浊沉淀，就能鉴定扩增与否[25]。LAMP

技术具备操作简单、特异性强、反应快速、灵敏度高的特点，LAMP

技术在微生物检测方面上得到了广泛的应用。（基因芯片技术）基因芯片技术基因芯片是一种固定有很多已知序列

DNA

探针的硅片或玻片。将经过荧光标记的样品分子与基因芯片上的

DNA探针进行杂交，通过检测每个探针分子的荧光信号强度以得到样品分子的数量和序列信息，基因芯片表面的

DNA

探针从几十到几百万个不等，可以一次性检测多种病原菌，并同时得到病原菌的耐药性等情况。（噬菌体法）噬菌体法噬菌体对细菌有特殊的裂解作用。其方法是挑取鉴别培养基上的可疑菌落，作胨水培养(37℃过夜)，若菌液浑浊，作1:200稀释，再用灭菌棉签在烘干的琼脂平皿上作条状涂布，待平板菌液干燥后，用微量加样器依次在每个区域滴加沙门氏菌噬菌体进行裂解试验。（微量热量测定法）