胶原寡聚肽保湿抗皱功效评价及其机制研究

胶原寡聚肽保湿抗皱功效评价及其机制研究

类固醇是一种重要的蛋白质，是皮肤皮的主要成分之一。由于它可以结合大量的水，它不仅是维持皮肤张力和保持张力的重要因素，也是维持皮肤饱满的物质基础。本试验采用随机、双盲、对照的方法对胶原寡聚肽抗皱保湿功效进行了评价;并用体外试验方法初步探讨了胶原寡肽抗皱功能的机制。1平均性别97.84.84健康女性志愿者35名,年龄29~45岁,平均(38.97±5.82)岁。试验地点为空军总医院皮肤科化妆品实验室,试验时间为2008年5月,试验周期为1个月。2学习方法2.1基质的制备在体试验测定样品为含有胶原寡聚肽成分的眼霜,对照样品为不含胶原寡聚肽成分的基质,基质的主要成分为封闭剂和湿润剂;体外试验样品为胶原寡聚肽干粉(均由北京盛美诺生物技术有限公司提供)。2.2测试部分2.3使用设备和材料2.3.1角质层含水量皮肤水分测试仪(Courage+KhazakaCM825,德国)根据电容值的可以反映皮肤角质层中的含水量,角质层含水量越高,其电容量也越高;反之亦然2.3.2皮肤测量2.3.3电子耦合mtt基于WST-8广泛用于细胞增殖和细胞毒性检测的试剂盒。WST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合剂存在的作用下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的成分。细胞增殖越多越快,颜色越深。对于同样的细胞,颜色的深浅与细胞数目呈线性关系。2.3.4血牛血清外因子DMEM/F12培养液(北京纽因华信科技发展有限公司),胎牛血清(北京元享圣马生物技术有限公司),双抗(100U/ml青霉素及100μg/ml链霉素),酶联免疫检测仪(美国BIO-RAD)。2.4个人主义与团队使用b样品的方法,按照正确的手法进行多次清洁按双盲设计,即:将对照样品及试验样品分别标为A和B;采用同一受试者左右两侧自身对照法,志愿者随机入组,一侧使用A样品,对侧使用B样品。告知志愿者每日早晚清洁面部之后按照正确的手法涂抹眼霜。在试验第0、1、4周对眼霜进行称重,测定皮肤角质层水含量、皮肤颜色,并由两名医生参照由RolandBazin提出的皮肤皱纹分级标准2.5dmem培养液制备取包皮环切手术病人的包皮标本,常规方法培养人成纤维细胞,取第5代纯化成纤维细胞,以3000个/孔接种至96孔板,待细胞贴壁后,弃去培养液,换成浓度为0.5、1、2、8mg/ml的含胶原寡肽的DMEM培养液100μl;对照组只加入100μl的DMEM培养液;每组设6个复孔。分别于换液后72h,96h及120h加入10μlWST-8溶液,孵育3h后用酶标仪于450nm处读取吸光度值。2.6统计学分析采用Spss11.0对试验数据进行统计学分析,计数资料根据试验设计采用t检验或单因素方差分析,区组之间进一步比较采用Dunnett-t检验,计量资料采用Wilcoxon秩和检验,P<0.05被认为有统计学差异。3试验结果3.1数据输入统计3.2组患者侧眼周及角质层含水量的比较3.2.1使用样品前,受试者左右两侧眼周含水量见表1,并对两组数据进行统计学检验,两侧眼周含水量没有统计学差异。3.2.2试验第1周与试验前基础值相比,对照组与试验组角质层含水量均有所增加,且有统计学差异;试验组角质层含水量增高幅度高于对照组,但没有统计学差异;试验第4周,两组角质层含水量仍然比基础值高,但低于第1周,且两组之间差异变小(见表1)。3.3皮肤颜色测量3.4眼周皱纹的主观评价试验第1周及第4周,对照组与试验组眼周皱纹情况较基础值都有显著改善,但是两组之间比较没有统计学差异(见表3)。3.5橡胶基硫对人成纤维细胞的复制活性的影响4以单因素方差分析结果胶原寡聚肽是通过酶方法把胶原蛋白小分子化,最终获得分子量集中在300~700D的寡肽胶原。胶原寡聚肽分子量小,结构中含有甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、天门冬氨酸、丝氨酸,这些氨基酸是皮肤表皮、真皮细胞重要的营养物质,也是皮肤天然保湿因子的主要组成成分但是,在体试验数据显示,对照组与试验组的各项指标在第1周时均优于第4周;主要考虑各种因素对化妆品经皮吸收产生了影响。一方面化妆品本身的物理及化学性质可以影响化妆品的吸收,如化妆品配方中该成分的浓度,应用的方式和频率,应用的表面和解剖学部位及暴露时间(冲洗或不冲洗)体外试验表明,浓度为0.05、1.00、2.00mg/ml的胶原寡肽处理细胞后96h,细胞增殖活性达到高峰;120h后,胶原寡肽促进成纤维细胞增殖的作用开始降低。这一结果与以前文献报道的结果相似总之,胶原寡肽可以在短期内显著增加皮肤角质层的含水量,改善眼周皱纹,并有提亮肤色的作用;在细胞水平,可以显著促进成纤维细胞增殖;但是胶原寡聚肽能否促进胶原蛋白的合成、其透皮吸收性的高低以及临床长期保湿抗皱效果仍有待于进一步证实。眼眦外侧。采用国际公认的Minolta仪,L值可以反应皮肤的黑白程度。35名受试者,有2名未能完成试验,故有效受试者为33例。试验第1周及第4周两组的皮肤颜色与基础值相比没有统计学差异,但是有改善趋势(见表2)。采用单因素方差分析对数据进行检测,结果显示:72h时,处理组与对照组相比差异无统计学意义;96、120h时,处理组与对照组相比有统计学意义,以96h时差异最显著(P=0.0005),表明胶原寡肽在这两个时间点可以显著增加成纤维的增殖活性。进一步统计分析显