浙江省金华地区并殖吸虫自然中间宿主和终宿主感染情况调查

浙江省金华地区并殖吸虫自然中间宿主和终宿主感染情况调查

同时繁殖疾病是由同时繁殖疾病引起的共病。该病主要分布于亚洲、非洲和美洲的27个国家,中国有25个省(市/自治区)存在不同程度流行试验对象和方法1查点镇点采用整群随机抽样法选择调查点。金华市的9个区(县/市)中各随机抽取3个乡镇(街道),共27个调查点,分别为婺城区琅琊镇、沙畈乡和安地镇;金东区曹宅镇、源东乡和孝顺镇;义乌市苏溪镇、佛堂镇和北苑街道;永康市唐先镇、新楼乡和石柱镇;武义县白姆乡、桐琴镇和西联乡;兰溪市黄店镇、永昌街道和横溪镇;东阳市千祥镇、南马镇和虎鹿镇;磐安县新渥镇、冷水镇和大盘镇;浦江县檀溪乡、杭坪乡和黄宅镇。2参加培训2.1根据中间地主的感染2.2明末主感染的检测2.3人工感染试验3基因组dna提取根据并殖吸虫线粒体细胞色素C氧化酶亚单位(COI)部分基因和核糖体DNA第二间区(ITS2)序列使用基因组DNA提取试剂盒(WizardSVGenomicDNAPurificationSystem,美国Promega公司)提取成虫基因组DNA。COI反应体系:模板DNA1μl,10×PCR缓冲液2.5μl,25mmol/LMgCl3.2种子系统建设结果1溪蟹中检出的虾2.各调查点收集到的螺类鉴定为放逸短沟蜷(Semisulcospiralibertina),仅从溪蟹阳性的婺城区沙畈乡和琅琊镇的螺内检出尾蚴,感染率分别为0.2%(2/1088)和0.1%(1/1683)。共捕获溪蟹1252只,均为浙江华溪蟹(Sinopotamonchekiangense)。婺城区沙畈乡、琅琊镇和武义县白姆乡的溪蟹中检出囊蚴,感染率分别是76.7%(46/60)、53.0%(32/60)和30.0%(18/60),感染指数分别是2.0、0.9和0.1。确定婺城区沙畈乡为高度疫源地,婺城区琅琊镇和武义县白姆乡为中度疫源地。2最终主机感染婺城区沙畈乡和琅琊镇各有1份流浪猫粪便中检出并殖吸虫虫卵阳性,检出率分别为8.3%(1/12)和0.6%(1/17)。3成虫的形态和大小尾蚴细小,呈长椭圆形,大小为220μm×90μm,腹吸盘后凹陷呈倒三角形(图1A)。囊蚴呈圆形或近圆形,大小为(320±40)μm,壁2层,厚15～24μm(图1B)。虫卵呈金黄色,椭圆形,两侧不对称。共检测100卵,卵大小平均为78.2μm×47μm[(68～96)μm×(42～51)μm],末端有卵盖,无盖端壳增厚。成虫活体呈红色,透明,虫体肥厚,背面隆起,腹面扁平,大小为(9.7±1.0)mm×(4.5±0.6)mm,长宽比例为(2.2±0.2)∶1。口、腹吸盘大小近似,腹吸盘位于体中横线之前,卵巢与子宫分列于腹吸盘稍后,卵巢作5支分叶,睾丸分支亦简单左右排列在虫体后1/3处,鉴定为卫氏并殖吸虫(图1C)。4coi和sa-pcp基因同源性分析采用特异性引物对所提取的金华地区并殖吸虫成虫基因组DNA进行PCR扩增,得到的COI和ITS2基因片段大小分别为390和363bp,与预期大小一致(图2)。BoiEdit7.0.9.0软件分析显示,金华地区并殖吸虫与GenBank中已报道的11株卫氏并殖吸虫的COI和ITS2基因同源性分别为88.2%～98.2%和86.5%～88.1%。通过GenBank将卫氏并殖吸虫COI和ITS2序列输入MEGA5.0建树。金华地区并殖吸虫位于福建闽清和日本Mie与Chiba地理株之间,与福建闽清株最为接近(图3、4)。并殖吸虫感染途径的确定中间宿主和终宿主的感染情况是反映一个地区并殖吸虫病流行的重要因素本研究检查的并殖吸虫尾蚴、囊蚴、虫卵和成虫的形状和大小,以及成虫的口、腹吸盘大小和位置、生殖系统各器官形态,与卫氏并殖吸虫基本相符,故确定金华地区并殖吸虫为卫氏并殖吸虫。鉴于并殖吸虫的形态学特征易受到虫龄不同、标本处理和观察方法不同等因素的影响DNA序列可从基因水平上反映出虫种(株)的遗传信息。1997年Blair等各调查点由乡镇医院防保医师选择1～3条偏僻、周边植被茂密的溪坑,收集螺类和溪蟹标本后,参照文献选取囊蚴检查阳性的调查点,收集家猫、家狗和溪边山坑的流浪猫粪便,采用水洗沉淀法检查并殖吸虫虫卵。将获得的囊蚴口服感染非疫区家养的成年犬6只(感染前粪检并殖吸虫卵均为阴性)(50个/只),感染后55d粪检,处死阳性犬