保元抗癌口服液质量标准的提高

保元抗癌口服液质量标准的提高

宝元抗癌口服是解放军总医院的非标准制剂。这是由黄原、西洋参、半枝莲和仙鹤草组成的11种中药组成的。具有益气养阴、健脾补肾、清热解毒、抗癌作用。主要用于各种肿瘤的治疗或肿瘤术后的恢复和化疗。临床使用多年，质量可靠，疗效确切，具有较高的安全性和有效性。保元抗癌口服液的现行标准较为落后，有进一步优化的空间。原质量标准仅对处方中黄芪、西洋参进行薄层鉴别，无含量测定项。为了加强制剂质量控制，满足中药制剂质量标准提高要求，本研究尝试新增白花蛇舌草、半枝莲、白术的薄层鉴别，新增黄芪甲苷的含量测定，以期提高制剂质量标准，达到有效控制药品质量的目的。1材料表面1.1超声仪器和设备LC-20AT高效液相色谱仪(岛津)；YP502N电子天平(上海精密科学仪器有限公司)；KQ-100DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；列孔型电热恒温水浴锅(天津市中环科技开发公司)；GoodLook-1000型全自动薄层色谱成像系统(上海科哲生化科技有限公司)。1.2药物质量、药材保元抗癌口服液(解放军总医院，批号：190701,190702,190703)；黄芪甲苷对照品(北京曼哈格生物科技有限公司，批号：B0005705；纯度：90.6%)；黄芪、西洋、白花蛇舌草、半枝莲、白术对照药材(批号：120974-201311,120997-201309,121183-201404,121203-201003,120925-201611)均购自中国食品药品检定研究院。乙醇、无水乙醇、甲醇、正丁醇、三氯甲烷、乙酸乙酯、石油醚(30～60℃)、环己烷、硫酸、盐酸、冰醋酸、氨水、氢氧化、三氯化铝、对二氨基苯甲醛均为分析纯。硅胶G板、聚酰胺薄膜(青岛海洋化工厂)。2方法和结果2.1包装侵权2.1.1黄2.1.4阴性样品溶液取本品10mL，加甲醇30mL，超声处理30min，放冷，离心，取上清液，滤液蒸干，残渣加水20mL溶解，超声10min，放冷，过滤，滤液用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20mL，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。取缺半枝莲药材的阴性样品，同法制成阴性样品溶液。另取半枝莲对照药材1g，加甲醇20mL，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，吸取上述溶液各1μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-冰醋酸(3∶2∶2∶1.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，且阴性样品无干扰，结果见图1F。2.1.5检测方法及设备取本品20mL，用石油醚(30～60℃)充分振摇2次(25mL,20mL)合并，蒸干，残渣加0.5mL甲醇溶解，作为供试品溶液。取缺白术药材的阴性样品，同法制成阴性样品溶液。另取白术对照药材1g，加水50mL，煎煮30min，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，吸取上述溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(7∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热6～8min，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，结果见图1G。2.2hplc黄棕榈叶含量的测定2.2.1在铬条件下进行系统适用性试验WondaSilC2.2.2对照药材的制备(1)对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，混匀，即得。(2)供试品溶液的制备：精密量取供试品10.00mL于50mL离心管中，加入30mL水饱和正丁醇溶液，充分萃取5min，静置分层后，取水饱和正丁醇层于150mL分液漏斗中，水层继续用30mL水饱和正丁醇重复萃取3次，合并正丁醇液于分液漏斗中。用氨试液充分洗涤2次(轻轻振摇防止乳化)，每次40mL，弃去氨试液，正丁醇液于250mL平底烧瓶中，85℃旋蒸至干，放冷，残渣精密加入5.00mL甲醇溶解，密塞，过0.45μm有机滤膜，备用。(3)黄芪对照药材的制备：取黄芪对照药材细粉约0.5g(加甲醇25mL，加热回流提取1h，放冷，过滤，滤液蒸干，残渣加水30mL使溶解)，按“2.2.2”项下供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液。(4)阴性样品溶液的制备：取缺少黄芪药材的阴性样品，按“2.2.2”项下供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液。2.2.3样品前处理取“2.2.2”项下对照品溶液、供试品溶液、对照药材溶液及阴性样品溶液适量，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结果表明，供试品中黄芪甲苷与对照品及对照药材在相同保留时间处有相同色谱峰，峰形良好，与其他组分峰基线分离度较好，且阴性样品无干扰。结果见图2。2.2.4加甲醇溶液制备精密称取黄芪甲苷对照品24.55mg，置10mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得浓度为2224.23μg·mL2.2.6试品溶液制备精密量取样品(批号：190701)6份，按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法处理，平行制备6份，再按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算含量。结果表明，黄芪甲苷含量为0.012%,RSD=3.1%(n=6)，表明本方法重复性良好。2.2.7加标的回收率测得各添加水平的平均回收率分别为104.0%(RSD=2.6%)、97.6%(RSD=1.5%)、103.0%(RSD=1.4%)，所有加标的平均回收率为101.5%(RSD=3.4%)。满足方法的回收率要求，显示方法的准确度良好，回收率均在90%～108%，符合要求。2.2.1稳定性试验将制备好的供试品溶液(批号：190701)和对照品溶液，在室温放置0,2,4,6,8h后分别按“2.2.1”项下色谱条件进样测定黄芪甲苷，供试品溶液和对照品溶液中黄芪甲苷峰面积RSD分别为0.09%和0.08%(n=5)，均<3%，表明上述溶液在室温放置8h内稳定性良好。2.2.1样品中黄芪甲苷含量测定取3批中试样品(批号：190701,190702,190703)，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算样品含量，黄芪甲苷含量分别为0.012%,0.011%,0.011%。3讨论3.1薄层色谱鉴别为了进一步提升标准，根据本品的制备工艺及药味的主要成分的化学性质，对方中其他药味进行薄层色谱鉴别筛选研究。参照中国药典2015年版一部，新增白花蛇舌草、半枝莲、白术的薄层鉴别，比移值适中，专属性强，空白无干扰，可以列入质量标准草案中。参照中国药典2015年版一部及相关文献试验，仙鹤草3.2化学成分的检测黄芪具有补气升阳、固表止汗、利水消肿、生津养血、行滞通痹、托毒排脓、敛疮生肌的作用。主要含有三萜皂苷、黄酮类化合物、多糖以及氨基酸等，为处方中君药。参照中国药典2015年版一部，黄芪药材中黄芪甲苷含量测定方法，采用蒸发光检测器，乙腈-水为流动相，通过多次试验，调节流动相比例、漂移管温度及载气量，最终确定检测条件，结果黄芪对照药材溶液在与黄芪甲苷对照品色谱峰相应的位置有相同的色谱峰出现，空白溶剂及阴性对照溶液在黄芪甲苷峰位置处无相应色谱峰出现，不干扰本品含量测定。为了考察微小变动因素对本品含量测定的影响，调节流速(0.8,1.0,1.2mL·min3.3黄芪甲苷的提取、鉴别和鉴别中国药典2015年版一部中规定：黄芪药材中黄芪甲苷含量按干燥品计算，含黄芪甲苷不得<0.04%。处方中黄芪350g，制成口服液1000mL。经检测，黄芪药材中黄芪甲苷含量0.057%,3批保元抗癌口服液中黄芪甲苷平均含量为0.011g·(100mL)取本品30mL，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次25mL，合并正丁醇提取液，用氢氧化钠试液洗涤2次，每次20mL，弃去氢氧化钠洗涤液，再用20mL水洗涤正丁醇提取液1次，弃去水洗液，将正丁醇提取液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。取缺少黄芪药材的阴性样品，同法制成阴性样品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，吸取上述溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点或荧光斑点，且阴性样品无干扰，结果见图1A和1B。2.1.2阴性样品的检测取西洋参对照药材粉末1g，加甲醇25mL，加热回流提取1h，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30mL使溶解，照“2.1.1”项下供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。取缺西洋参药材的阴性样品，同法制成阴性样品溶液。照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，吸取上述溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)5～10℃放置12h的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点或荧光斑点，且阴性样品无干扰，结果见图1C和1D。2.1.3阴性样品溶液取本品10mL，加乙醇20mL，搅拌摇匀，离心，取上清液置水浴蒸至近干，加硅藻土适量搅匀，干燥，加无水乙醇30mL浸渍30min，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL溶解作为供试品溶液。取缺白花蛇舌草药材的阴性样品，同法制成阴性样品溶液。另取白花蛇舌草对照药材1g，加水50mL，回流1h，放冷，过滤，滤液浓缩至约10mL，加乙醇20mL，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙醇-浓氨试液(3∶7.5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸乙醇(1→3)溶液，105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性样品无干扰，结