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第19 在细胞凋亡时,细胞核会发生变形、浓缩、碎裂,因此我们可以通过检测细胞核的形态来判断细胞是否凋亡,比如用oechst染色或I染色。细胞膜也会发生变化,部分膜会包裹细胞的内容物形成凋亡小体,因此我们可以通过电镜观察有没有凋亡小体来判断细胞是不是正在凋亡。细胞膜还会发生的一个变化是破损外翻,这样我们就可以用一些标记细胞膜内侧的染料来检测细胞膜是否外翻,配合检测细胞核内物质的染料进行双染,判断细胞凋亡的进程,比如nnen-/I双染。 断裂时,的3’端断裂口会出现游离的3’-OH,可使用TUNNEL法还有一个利用PI细胞凋亡是基因严格控制的过程,可通过检测相关通路和分子marker检测细胞凋细胞凋亡不仅会发生在细胞出现损伤而无法修复的时候,也会发生在像发育这种正常的生理过程中。它既可以清除那些坏掉的细胞,也可以清除那些虽然没坏,但是机体已经不需要的细胞。TUNEL 正常细胞基因组断裂很少,细胞凋亡时 TdTdUTP3'-OH细胞爬片/切片:将灭菌玻片放入24 PBSPBS1次,5min。(此步可省略固定:细胞用4%PFA室温固定30min,冰冻切片用4%PFA室温固定30-60min(不要使用酸性固定液,不要使用乙醇或甲醇固定)5minPBSPBS洗3次,每次5min0.3%TritonX-100,5min0.5TritonX-100,5min,石蜡切片使用20μg/ml
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