曲克芦丁原料药对氨酸缺陷型突变菌株基因回变安全性评价

曲克芦丁原料药对氨酸缺陷型突变菌株基因回变安全性评价

特洛伊木马属于生物黄酮类。这是乙基丙烯酸酯半合成的产物。它能降低毛细管的渗透性和复杂性，抑制血小板聚集，防止血栓形成。临床上主要用于缺血性脑病（如血栓形成和脑梗死）、中央性视网炎、肺动脉硬化、血管性静脉炎、静脉、血管透射增加导致的水肿。1药物、试剂和仪器曲克芦丁原料药,批号:20101201,提供单位:成都百康药业有限责任公司。组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌(试验用肝微粒体酶代谢活化系统(S9混合液)由实验室自制并鉴定。模型突变试剂(阳性物)注射用丝裂霉素(MMC,浙江海正药业股份有限公司,批号100806);复方环磷酰胺片(天津津世制药有限公司,批号:20100901);2,4,7-三硝基-9-芴酮(2,4,7-TNFone,Accustandard公司出品,批号210081273);4-硝基喹宁(4-NQNO,AlfaAesar公司出品,批号10112926);2-氨基芴(2-AF,Aldrich公司出品,批号A55500);1,8-二羟基蒽醌(东京化成工业株式会社,批号FHF01)。主要仪器GH-500恒温培养箱(北京市中兴伟业仪器有限公司);HRCJ-2S净化工作台(青岛海尔特种电冰柜有限公司)等。主要试剂L-组氨酸(梯希曼(上海)化成工业发展有限公司,批号:H01505934-292);氧化型辅酶Ⅱ二钠(NADP)(SANLAND);葡萄糖-6-磷酸二钠盐(上海如吉生物科技发展有限公司,批号:101121);牛肉膏(BR)(北京奥博星生物技术有限公司,批号:20100408);蛋白胨(BR)(北京奥博星生物技术有限公司,批号:20100520)等。22.1纯化水和阳性诱变剂设5个剂量组,浓度分别为5、1、0.2、0.04、0.008mg曲克芦丁/皿。同时设溶剂对照和阳性诱变剂对照组,其中溶剂对照组加除受试物和标准诱变剂以外的所有试剂,即加入相同体积的纯化水或DMSO;阳性对照组加入与供试品相同体积的阳性对照品。2.2培养基的制备在保温约45℃的2ml顶层培养基中加测试菌株增菌液0.1ml,混匀,加受试物0.1ml,活化时另加入10%S9混合液0.5ml;非活化时加入测试菌株增菌液0.1ml,混匀,加受试物0.1ml,加入磷酸盐缓冲液0.5ml。加完液后迅速混匀,倾入底层培养基平皿上,转动平皿使顶层培养基均匀分布在底层上,平放固化,37℃培养48h观察结果。重复实验一次。2.3测试指标观察各浓度组细菌毒性大小和沉淀情况,计数每皿的回变菌落数,计量资料以2.4诱变试验结果至少在一个菌株上,在有或无代谢活化的情况下,受试物所诱发的回复突变菌落数出现浓度依赖性的增加和/或在一个或多个浓度组上出现可重复性的增加,可判定为该受试物诱变试验结果为阳性。3自发回变能力对曲克芦丁原料药5～0.008mg曲克芦丁/皿各浓度组观察均未发现有细菌毒性和沉淀,背景菌苔生长良好,自发回变符合要求。表1、表2结果显示,5～0.008mg曲克芦丁原料药/皿在加S9混合物和不加S9混合物时,各剂量组的回复突变率与溶剂对照组相比较无明显差异(P>0.05),各剂量组所诱发的回复突变菌落数未出现浓度依赖性的增加和/或在一个或多个浓度组上出现可重复性的增加。4鼠伤寒沙门氏菌营养缺陷型回复突变试验上述结果显示,5～0.008mg曲克芦丁原料药/皿,在加S9混合物和不加S9混合物时,各剂量组的回复突变率与溶剂对照组相比较无明显差异(P>0.05)。表明在本试验条件下,曲克芦丁原料药在活化与非活化条件下,分别与鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型突变菌株接触48小时后,不能诱发鼠伤寒沙门氏菌营养缺陷型回复突变,即诱变结果为阴性。TA97,TA98和TA100可检测移码突变,TA1535和TA102可检测碱基对置换,分别从不同角度判定其致基因突变性。但TA系菌株回复