中药催乳的实验研究

中药催乳的实验研究

母乳喂养是孩子成长中唯一、最自然、最安全、最完整的自然食物。它含有婴儿成长所需的所有营养和抗体。而近年来,由于产妇年龄趋于增高,加之剖宫产率上升,以及妊娠期营养不足、精神过度紧张等诸多因素,产后缺乳有上升趋势,尤其在城市妇女中较为常见1实验材料1.1实验动物Wister大鼠,SPF级,雄雌兼用,雄性:雌性=1:4,体重250~300g,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供,许可证:SCXK(京)2007-0001,饲养于天士力集团研究院药理毒理研究所的屏障动物房内。1.2实验用材料及检测本催乳中药组方依据明末清初傅山所著《傅青主女科》生化汤化裁而来,组方主要由当归、川芎、桃仁、黄芪等7味药材组成,本实验所用受试物为提取未加辅料的浸膏(出膏率为31.30%),由天士力集团研究院中药研究所提供;阳性对照药物:补血生乳颗粒(九芝堂);左旋多巴(Sigma);大鼠血清泌乳素检测试剂盒(ADL公司),大鼠组织5-羟色胺检测试剂盒(ADL公司)。其他试剂:甲醛、正丁醇、浓盐酸均为国产分析纯。1.3酶标仪检测分析天平(AE260,梅特勒-托利多);酶标仪(InfiniteM200,瑞士TECAN公司);离心机(Z323K,德国HERMLE公司)。2方法2.1实验研究对象的确定将未经孕、产的雄性大鼠与雌性大鼠按1:4比例同笼饲养,自然交配受孕,采用托盘阴栓检查法筛选孕鼠,将受孕鼠单笼饲养用于实验。取产仔时间前后相差不超过24h的50只母鼠作为实验研究对象,每窝仔鼠调整为8只。将50只母鼠按体重随机分为正常组、模型组、催乳药物高剂量组、催乳药物低剂量组和阳性对照组,每组10只母鼠。2.2模型的构建自分娩第2日起上午给母鼠腹腔注射左旋多巴2mg/kg,连续注射7d,复制产后缺乳大鼠模型。2.3催乳药高剂量组2.5%自分娩第2日起,正常组每日蒸馏水灌胃,催乳药物低剂量组(1.35g/kg)、催乳药物高剂量组(2.70g/kg)、阳性对照组(1.87g/kg)分别以各自的剂量灌胃,每日1次,各组均给药14d。各组动物均正常饮食饮水。2.4观察检测方法和指标2.4.1全窝仔鼠单次泌乳量的测定从给药第2日开始,每日将仔鼠与母鼠隔离5h后,用手指轻压仔鼠腹部以排出尿液后,称量全窝体重,然后将仔鼠送回母鼠身边哺乳,吮乳1h后再次称仔鼠体重,比吮乳前增加的体重为全窝仔鼠单次泌乳量。2.4.2母鼠体重泌乳量测定将全窝仔鼠饥饿4h后,令母鼠哺乳15h,于哺乳前后分别称仔鼠体重,以其体重差表示母鼠一日泌乳量,累计14d总量作为总泌乳量。2.4.3prl的测定实验结束后,各组大鼠腹腔注射水合氯醛麻醉(每10g体重0.04mL),下腔静脉取血,常温静置30min,3500r/min,4℃离心15min,分离血清,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA法)严格按照试剂盒说明书步骤测定PRL含量。2.4.4elisa法测定土壤中5-ht含量实验结束后,各组大鼠腹腔注射水合氯醛麻醉(每10g体重0.04mL),取脑备用。准确称量取材的下丘脑0.1g,加入2mL酸性正丁醇(500mL正丁醇中加入0.85mL浓盐酸)进行组织匀浆,匀浆后再振荡5min,3000r/min离心10min,取上清,采用ELISA法严格按照试剂盒说明书步骤测定5-HT含量。2.4.5病理诊断动物给药14d后处死解剖,取乳腺,立即固定,固定完成后各组进行常规切片、HE染色,观察乳腺的形态学变化。2.5统计学处理方法计量资料以均数±标准差(ue0af±s)表示。应用SPSS11.0统计软件分析,多样本均数的两两比较采用单因素方差分析(one-wayANOVA)。两变量的关联性采用线性相关分析。3结果3.1影响缺仔大鼠的卵数量造模后正常组的单次泌乳量和总泌乳量高于模型组,说明造模成功。催乳药高、低剂量组的单次泌乳量和总泌乳量均高于模型组。结果见表1。3.2各组大鼠血清prl、强化和ht的含量检测各组大鼠血清PRL含量检测结果显示,催乳药高、低剂量组血清PRL含量均显著高于模型组(P<0.01)。各组大鼠下丘脑5-HT的含量检测结果显示,催乳药高剂量组下丘脑5-HT含量高于模型组(P<0.05)。结果见表2。3.3大鼠乳腺癌组织形态变化病理图像观察结果:正常组大鼠的乳腺小叶、腺泡及小导管显著增生,小叶内腺泡密集,腺泡腔增大,形状不规则,部分腺泡上皮细胞为高柱状、部分腺泡上皮细胞为低柱状,部分腺泡腔充盈乳汁,小叶间结缔组织和脂肪组织明显减少成很薄的间隔(见图1-A);模型组大鼠乳腺部分小叶腺泡被结缔组织包围,小叶间隔变成厚层,腺泡腔变窄,乳汁减少(见图1-B);催乳药各组与模型组比较乳腺组织均有明显改善,与正常对照组的组织形态相似,小叶腺泡充满乳汁且显著增大,腺叶间的结缔组织明显减少,小叶间隔也明显变成薄层。高剂量组与低剂量组无明显差别(见图1-C,图1-D);阳性对照组乳腺组织形态与催乳药组大致相似,乳腺组织丰富,腺腔充满乳汁(见图1-E)。各组大鼠乳腺组织病理形态观察结果表明,给药各组可促进哺乳期母鼠乳腺增生,使乳腺组织呈高度分泌状态。4对泌乳大鼠的作用目前关于产后缺乳发病机制的研究多集中在对PRL的影响上,其广泛存在于动物体内,是腺垂体前叶催乳素细胞分泌的一种蛋白质激素。PRL在泌乳过程的启动和维持中起着重要作用,是促进泌乳发生的主要激素。下丘脑分泌的5-HT作为一种中枢神经系统递质,能促进PRL的分泌,从而增加泌乳量。本实验结果表明,该