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文档简介

一、试验目标

掌握从土壤中分离培养微生物方法,从而取得若干种微生物纯培养技能。

微生物分离与纯化技术第1页二、试验器材及设备1、无菌培养皿(直径90毫米)、无菌吸管1毫升、盛有90毫升无菌水锥形瓶、盛有9毫升无菌水试管5支。2、培养基(已灭菌)、土壤颗粒。微生物分离与纯化技术第2页3、接种环、酒精灯、恒温箱(培养箱)、超净工作台等。微生物分离与纯化技术第3页三、微生物分离纯化操作方法1、取样(取土样10g)2、稀释土壤悬浊液介绍两种方法:稀释混合平板法和平板划线法(一)稀释混合平板分离法(以分离真菌为例)微生物分离与纯化技术第4页稀释土壤悬浊液操作注意:依次编号:按10-1、10-2、10-3、10-4、10-5及10-6锥形瓶中玻璃珠将颗粒状样品打散无菌操作:超净工作台、酒精灯、无菌吸管移液管移液后多出液体处理试管中悬浊液须持移液管吹洗三次搅匀微生物分离与纯化技术第5页3、平板制作每组准备两套无菌培养皿,在皿底注明稀释液浓度(10-4、10-5、10-6中任选两种浓度)、菌名如黑曲霉、班级、组别。融化锥形瓶中培养基,放在45-50℃恒温水浴锅中备用制备混合液平板:无菌操作下,打开培养皿在无菌培养皿一边加两滴链霉素液,另一边加1mL土壤稀释液(注意不要让两液相混),倒入45-50℃融化真菌培养基约1/4-1/3培养皿高度。培养皿平放在桌上顺时针、逆时针轻轻转动,混匀皿中物质。培养基冷凝后即成平板。微生物分离与纯化技术第6页恒温培养:平板倒置于28-30℃恒温箱中,培养5-6天后观察真菌菌落形态。转接纯化:挑取单个菌落,接种到新鲜平板上,培养观察,直至纯化。微生物分离与纯化技术第7页平板制作操作注意:融化培养基时不要溢出烧瓶或糊底无菌操作下,打开培养皿操作一根1mL移液管屡次移液先移低浓度悬浊液,再移高浓度悬浊液。移液管能够用稀释悬浊液那根在无菌操作下接着做,也可另取一根无菌。为何培养皿要倒置培养微生物分离与纯化技术第8页(二)平板划线分离法(以分离细菌为例)每组准备两套无菌培养皿,在皿底菌名、班级、组别。融化培养基,在45-50℃恒温水浴锅中备用制备平板:无菌操作下,打开培养皿,倒入45-50℃融化细菌培养基约1/4-1/3培养皿高度。培养皿平放在桌上,培养基冷凝后即成平板。微生物分离与纯化技术第9页平板划线:无菌操作下,用接种环挑取一环10-1土壤悬浊液,在平板上轻轻划线(切勿划破培养基)划线方式可取下列图微生物分离与纯化技术第10页恒温培养:平板倒置于28-30℃恒温箱中,培养1

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