生肉中多环芳烃的检测方法研究

生肉中多环芳烃的检测方法研究

多环芳烃（pahs）是环境和食物中的一种严重污染物。1材料和方法1.1标准品及标准溶液试剂:环己烷、乙酸乙酯(TEDIA)、乙腈(Merck)为色谱纯。生肉样品为市售食品。仪器:凝胶渗透色谱仪(LCTech),高效液相色谱仪-荧光检测器(Agilent1200系列),超声波清洗仪(ElmaD-78224型),高速离心机(Sigma2-16KL型),涡旋振荡器(IKA),电子分析天平(MettlerToledo,万分之一)。标准品为14种欧盟优控PAHs混合标准溶液(Dr.Ehrenstorfer公司):苯并(a)蒽、、5-甲基-1,2-苯并菲、苯并(b)荧蒽、苯并(j)荧蒽、苯并(k)荧蒽、苯并(a)芘、二苯并(a,h)蒽、苯并(g,h,i)苝、茚并(1,2,3-cd)芘、二苯并(a,e)芘、二苯并(a,h)芘、二苯并(a,i)芘、二苯并(a,l)芘,每种物质为10μg/mL的乙腈溶液。苯并(c)芴标准溶液(Dr.Ehrenstorfer公司),10μg/mL的乙腈溶液。-18℃下保存。1.2方法1.2.1色谱-质谱条件快速GPC净化分离柱,填充剂:Bio-BeadsS-X3,填充量:25g,色谱柱规格:300mm×20mm。洗脱液:环己烷-乙酸乙酯(1∶1)。流速:4.5mL/min。进样量:5mL。收集16～43min流出组分,在线浓缩近干,1mL乙腈复溶后供HPLC测定。1.2.2流动相及洗脱程序色谱柱:PAHC18键合固定相色谱柱(Waters,250mm×4.6mm,5μm)。流动相:A溶剂为水,B溶剂为乙腈,梯度洗脱程序见表1。进样体积:20μL。柱温35℃。荧光检测器检测,检测波长见表2。1.2.3标准系列的制备标准系列工作液:吸取15种PAHs混合标准溶液(20.0ng/mL)0.10、0.25、0.5、1.0、2.5、5.0、10mL,乙腈定容至10mL,得到质量浓度为0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0ng/mL标准系列。在设定色谱条件下,分别进样20μL,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,进行线性回归。1.3有机溶剂提取将生肉样品可食部分匀浆。称取2.00g匀浆,置于15mL具塞离心管中,加入10mL环己烷-乙酸乙酯混合溶剂(1∶1),涡旋振荡30s,超声提取15min,离心半径9.5cm,8000r/min离心5min,吸取上清液约10mL置于GPC进样瓶中净化浓缩。HPLC进样量20μL,记录色谱图,以保留时间定性,采用标准曲线法计算含量。2结果2.1柱温条件下pahs分离效果采用PAHC18键合固定相(反相色谱模式)进行分离。基于本研究团队之前研究考察20℃、25℃、30℃、35℃、40℃柱温条件下15种PAHs分离效果。PAHs混合标准溶液(2.0ng/mL)不同温度分别进样6次,保留时间随温度升高而减小,在35℃时具有最好的分离效果和进样精密度(RSD=2.1%)。因此设定柱温为35℃。2.3相对分子质量凝胶渗透色谱的柱填料为凝胶,是一种含有许多不同尺寸孔穴的表面惰性物质。当试样中大小不同的组分分子随流动相经凝胶颗粒时,大分子受到空间位阻障碍不能进入微孔,分子越小则进入微孔越深,因而滞留时间不同。试样中大分子的油脂、生物碱、聚合物等先淋洗出来,PAHs等相对分子质量较小,后淋洗出。因此弃去0～16min流出组分2.4方法的线性范围、检出限和定量限本方法采用外标法定量,按方法1.2.3配制标准系列,20μL进样,以峰面积A和对应的标准系列浓度C绘制标准曲线,15种PAHs在质量浓度0.2～20.0ng/mL范围内[苯并(j)荧蒽:0.5～20.0ng/mL]相关性良好(r值均>0.998)。以信噪比S/N=3和S/N=10确定15种PAHs测定方法检出限(LOD)为0.04～0.49μg/kg,定量限(LOQ)为0.12～1.51μg/kg。分别在生鱼肉、鸡肉、猪肉和牛肉4种基质中加入0.5、2.0、10.0μg/kg3个水平混合标准溶液,计算加标回收率和RSD(n=6)。回收率、RSD范围:鱼肉中为61.4%～97.3%、0.4%～11.5%,鸡肉中为62.5%～98.4%、0.5%～8.2%,猪肉中为63.5%～101.7%、0.6%～9.7%,牛肉中为61.0%～100.6%、2.0%～9.5%。2.5样品测定结果将市售新鲜生肉样品(10份)可食部分匀浆处理,按方法1.2.4进行样品测定,结果显示,样品多含有1～2种PAHs,为分子量较小的苯并(c)芴和苯并(a)蒽,含量均<1.0μg/kg。3pahs的同时检测方法PAHs具有慢性毒性和致癌、致畸、致突变作用,或作为致癌过程中的增效剂本文采用凝胶渗透色谱净化-定量浓缩与高效液相色谱荧光法检测相结合技术,建立了用于生肉中欧盟优控的15种PAHs同时检测方法。通过优化提取过程、GPC净化浓缩和HPLC分离条件,可以实现15种欧盟优控PAHs的有效分离和准确定量测定。本法与常规离线方法相比,减少了实验操作误差,灵敏度高,重现性好,可以满足定量分析的要求,对生肉样品中PAHs的监控有参考意义。2.2pahs提取溶剂的选择PAHs具有亲脂性,容易蓄积在脂肪组织内,随着苯环数量的增加脂溶性越强。肉类样品基质复杂且富含脂肪,PAHs提取溶剂的选择非常重要。比较环己烷、正己烷-丙酮(1∶1