微生物学检验分枝杆菌属及检验

分枝杆菌属主要特点

是一类直或微弯曲、有分枝生长趋势的杆菌。细胞壁脂质含量高，主要为分枝菌酸。

具有抗酸性，革兰染色不易着色，常用抗酸染色。

专性需氧营养要求特殊，大多数生长缓慢。

不产内、外毒素和侵袭性酶等致病物质，所致疾病呈慢性。分枝杆菌属种类结核分枝杆菌复合群结核分枝杆菌牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌田鼠分枝杆菌非典型分枝杆菌麻风分枝杆菌光产色分枝杆菌暗产色分枝杆菌不产色分枝杆菌迅速生长分枝杆菌分枝杆菌属结核分枝杆菌－－形态染色

细长略弯，分枝生长趋势

无芽孢，无鞭毛，部分菌株有荚膜

革兰染色阳性，不易着色抗酸染色阳性结核分枝杆菌－－培养特性生长条件：专性需氧、细胞内寄生菌、最适～、营养要求高、培养基含鸡蛋、马铃薯粉、甘油、孔雀绿等生长现象：※生长缓慢※改良罗氏培养基菌落特征：干燥、淡黄色、质地较硬的R型菌落※液体培养基：形成菌膜，有毒株呈索状生长结核分枝杆菌－－生化反应生化反应不活泼，不发酵糖类与非结核分枝杆菌鉴别：耐热触酶试验－；（非结核分枝杆菌＋）与牛分枝杆菌鉴别烟酸试验＋；（牛分枝杆菌－）结核分枝杆菌－－抵抗力与变异性抵抗力特点：“三耐四敏”※耐干燥、耐酸碱、耐孔雀绿（1：13000）※对湿热、70％乙醇、紫外线、常用抗结核药物（但长期使用易产生耐药性）变异性※典型形态－→多形性※R型菌落－→S型菌落※有毒－→无毒（用于制备疫苗）※抗结核药敏感－→耐药结核分枝杆菌－－致病物质脂质索状因子:与该菌毒力有密切关系磷脂:分枝菌酸：与抗酸性有关蜡质D:具有佐剂作用硫酸脑苷脂蛋白质糖类结核杆菌不产生内、外毒素，不产生侵袭性酶结核分枝杆菌－－所致疾病与免疫性

经多途径感染，引起结核病，以肺结核多见类型：原发感染和继发感染免疫性※抗结核免疫以细胞免疫为主※抗结核免疫属带菌免疫※抗结核免疫与Ⅳ型超敏反应同时出现结核分枝杆菌－－结核菌素试验

原理：用结核菌素进行皮肤试验，以检测受试者对结核杆菌是否有细胞免疫及迟发型超敏反应的试验。结果：根据注射部位是否出现红肿判断结果＜5mm为阴性≥＞5mm为阳性＞15mm为强阳性

应用：选择卡介苗接种对象；判断卡介苗接种效果；辅助诊断婴幼儿结核病；测定肿瘤患者细胞免疫状态结核分枝杆菌－－检验程序标本核酸检测接种固体培养基可疑菌落涂片抗酸染色镜检抗体检测慢性生长菌快速生长菌菌种鉴定标本前处理接种液体培养基接种小白鼠豚鼠脏器涂片镜检抗酸染色鉴定试验结核分枝杆菌－－涂片检查直接涂片薄涂片

厚涂片集菌涂片

沉淀集菌法漂浮集菌法荧光显微镜检查法：金刚胺O染色→荧光显微镜下检查抗酸染色－－报告方式报告方式镜检结果-仔细检查300个视野未发现抗酸杆菌±300个视野内发现1~2条抗酸菌＋100个视野内发现1~9条抗酸菌2＋10个视野内发现1~9条抗酸菌3＋每个视野内发现1~9条抗酸菌4＋每个视野内发现9条以上抗酸菌结核分枝杆菌－－分离培养标本前处理：※目的：杀死杂菌；液化标本※方法：4％NaOH法；4％H2SO2法；胰酶-新洁尔灭法等

培养基选择：罗氏培养基、米氏培养基、小川培养基等接种培养培养结果记录与报告方法报告方式培养结果＋斜面20个菌落以上，占斜面1/4以下2＋斜面上菌落生长面积占1/4以上，1/2以下3＋斜面上菌落面积占斜面1/2以上，3/4以下4＋斜面上菌落生长密集，成菌苔非典型分枝杆菌

是指结核分枝杆菌与麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌。大多为环境中的腐生菌对酸碱比较敏感对常用抗结核药耐受

为条件致病菌，艾滋病患者易感染鸟复合分枝杆菌麻风分枝杆菌－－生物学性状为抗酸杆菌细胞内寄生

有麻风杆菌寄生的细胞呈泡沫状，称为麻风细胞体外人工培养尚未成功犰狳是动物感染模型麻风分枝杆菌－－临床意义与微检经呼吸道、接触感染引起麻风病瘤型麻风（开放型）：传染性强结核样型（闭锁性）：传染性弱

微检：标本涂片抗酸染色是诊断麻风的主要依据麻风杆菌犰狳抗酸染色染液组成：石炭酸复红、3％盐酸酒精、美兰染色步骤※石炭酸加温染5分钟，水洗※3％盐酸酒精脱色致无红色脱下为止，水洗※美蓝染1分钟，水洗，干后镜检染色结果※抗酸菌：红色※非抗酸菌：蓝色染色意义：区别抗酸菌与非抗酸菌结核分枝杆菌菌落结核分枝杆菌（抗酸染色）麻风病人厌氧菌概念:是一大群必须在无氧环境条件下才能生长繁殖的细菌

特点:种类多分布广感染可发生于人体各个部位厌氧菌特点特点芽胞厌氧菌无芽孢厌氧菌种类1个菌属40多属分布自然界人和动物体内致病外源性感染多以外毒素致病内源性感染多为条件致病菌厌氧菌感染的临床及细菌学特征感染发生于黏膜附近深部外伤感染局部有气体产生分泌物有恶臭或暗血红色某些抗生素治疗无效的感染标本直接涂片细菌染色不均镜检见细菌,需氧培养无细菌培养厌氧菌感染的原因局部形成厌氧微环境局部或全身免疫功能下降菌群失调寄居部位发生改变厌氧菌－－标本采集与送检采集部位恰当正确采集避免污染严格厌氧及时送检运送针筒运送法无氧小瓶运送法标本充盈运送法组织块运送法厌氧袋运送法棉拭运送法厌氧菌－－常用培养基非选择性培养基心脑浸液＋％5脱纤维羊血＋氯化血红素＋维生素

K选择培养基七叶苷胆汁平板－－培养脆弱类杆菌卡那万古冻溶血琼脂平板－－培养

FS培养基－－培养梭杆菌属VS培养基－－培养韦容球菌

CCFA培养基－－培养艰难梭菌厌氧菌－－厌氧培养法厌氧罐培养法厌氧器袋法厌氧手套箱法疱肉培养法标本增菌分离培养肉眼观察染色镜检血标本需氧培养厌氧培养厌氧培养挑取菌落厌氧培养生长不生长生长专性厌氧菌专性厌氧菌形态染色菌落特征生化反应药敏鉴定气相色谱厌氧菌－－标本观察和涂片镜检

肉眼观察：观察标本的性状（脓性、带血、气味、硫磺样颗粒、坏死组织等）

涂片染色镜检：估计细菌数量、观察细菌形态、染色性，以便选择培养基和培养方法厌氧菌－－分离培养

初代培养：厌氧培养48h

次代培养：挑5个以上不同菌落做耐氧试验，每个菌落接种2个平板，分别进行需氧培养和厌氧培养，挑取有氧培养中不生长、厌氧培养生长的菌落进行鉴定厌氧菌－－鉴定菌体形态：菌落性状：形状、色素、荧光、溶血药敏鉴定试验：卡那霉素：梭杆菌属多敏感，类杆菌属多耐药聚茴香脑磺酸钠：快速鉴定厌氧消化链球菌生化反应气相色谱技术破伤风芽孢梭菌－－主要性状

革兰阳性细长杆菌，有周鞭毛，芽孢位于菌体顶端，圆形大于菌体，呈“火柴棒状”专性厌氧

在血平板上呈扩散生长，菌落边缘不整齐，呈羽毛状

在疱肉培养基中，肉渣变黑，有腐败恶臭味破伤风芽孢梭菌－－临床意义致病物质：破伤风痉挛毒素，属神经毒素，阻止中枢抑制性神经介质的释放，导致骨骼肌强制性痉挛所致疾病：破伤风感染途径：伤口致病条件：伤口内形成厌氧微环境破伤风芽孢梭菌－－检查方法显微镜检查：菌体形态、芽孢特征分离培养：厌氧培养，菌落特征

动物实验：毒力试验：毒素注射小鼠→小鼠出现症状保护试验：毒素＋抗毒素→注射小鼠→小鼠无症状产气荚膜梭菌－－形态与培养

革兰阳性粗大杆菌，有荚膜，芽孢位于菌体中央或次级端，小于菌体，无鞭毛专性厌氧

血平板菌落特征：圆形、凸起、光滑、湿润，双层溶血环卵黄琼脂平板：Nagler反应牛乳培养基：“汹涌发酵”现象生化反应：生化反应活泼，分解多种糖产气荚膜梭菌－－临床意义致病物质：荚膜、多种毒素和侵袭性酶

所致疾病：气性坏疽

食物中毒

坏死性肠炎产气荚膜梭菌－－检查方法

标本涂片染色镜检：观察形态、染色性、荚膜分离培养：注意观察双圈溶血环生化反应：汹涌发酵现象动物实验：

培养物→小鼠腹腔注射→处死小鼠→培养→解剖小鼠→肉眼观察泡沫肝＋涂片染色镜检肉毒梭菌－－形态与培养

革兰阳性粗大杆菌，有鞭毛，芽孢位于菌体次级端，大于菌体，呈“网球拍状”无荚膜专性厌氧

菌落大而不规则；消化肉渣，肉渣变黑，有腐败恶臭肉毒梭菌－－临床意义

致病物质：肉毒毒素，为神经毒素，引起肌肉驰缓型麻痹。毒素分为8个型别，我国以A型最多见所致疾病肉毒食物中毒婴儿肉毒病肉毒梭菌－－检验程序标本分离培养可疑菌落毒素测定疱肉培养革兰染色生化反应毒素测定肉毒梭菌－－检验方法标本采集：可疑食物、呕吐物等分离培养：疱肉培养、分离培养毒素测定毒素定性检验：毒素注射小鼠→小鼠出现症状毒素＋抗毒素→注射小鼠→小鼠无症状毒素型别鉴定：

鉴定依据：形态、芽孢特征、疱肉培养物、肉毒毒素艰难梭菌

革兰阳性粗大杆菌、芽孢位于菌体次级端，无荚膜严格厌氧在果糖卵黄琼脂平板上形成粗糙的黄色菌落脂酶－、卵磷脂酶－人和动物肠道中的正常菌群肠道菌群失调时可引起伪膜性肠炎

粪便标本直接涂片检查见优势生长的革兰阳性粗大杆菌并有芽孢，具有诊断价值革兰阴性无芽孢厌氧菌类杆菌属肠道和女性生殖道主要菌群临床最重要的无芽孢厌氧菌普雷沃菌属卟啉单胞菌属

梭杆菌属：菌体细长，两端尖细，中间膨大，革兰染色可见菌体中有紫色颗粒革兰阳性无芽孢厌氧菌丙酸杆菌属痤疮丙酸杆菌寄居人和动物皮肤、皮脂腺等部位，与痤疮有关优杆菌属乳杆菌属：女性生殖道主要正常菌群

双歧杆菌属：人和动物肠道中重要的正常菌群，对维持人体内微生态平衡发挥重要作用厌氧性球菌消化球菌属：革兰阳性球菌消化链球菌属：革兰阳性球菌韦荣球菌属：革兰阴性球菌测验1正常人肠道中数量最多的细菌是A

大肠埃希菌B

乳酸杆菌C

粪肠球菌D

无芽孢厌氧菌E

芽孢厌氧菌测验2

在无芽孢厌氧菌感染中，临床标本检出阳性率最高的是：A

脆弱类杆菌B

双歧杆菌C

丙酸杆菌D

梭形杆菌E

消化链球菌测验3下列对厌氧要求不严格的细菌是A

双歧杆菌B

产气荚膜梭菌C

破伤风梭菌D

艰难梭菌E

产黑色素类普雷沃菌测验4下列哪种细菌是条件致病菌A

脆弱类杆菌B

淋病奈瑟菌C

溶血性链球菌D

肠产毒素性大肠杆菌E

乙型副伤寒沙门菌测验5

在牛乳培养基产生“汹涌发酵”现象的是A

破伤风梭菌B

产气荚膜梭菌C

肉毒梭菌D

艰难梭菌E

诺维梭菌测验6关于艰难梭菌特点错误的是A

革兰阳性粗大杆菌B

为肠道内正常菌群C

在组织和培养时不易形成芽孢D

是伪膜性肠炎最常见的病原菌E

所致疾病与长期使用抗生素有关测验7

菌体细长，两端尖细，中间膨大，菌体中常有紫色颗粒（革兰染色），可能的细菌是A

产气荚膜梭菌