水产病害微生物检测与防治-

水产养殖技术专业教学资源库近年来，水产品养殖规模显著扩大，但高密度的养殖模式使水产常见传染性疾病发生率逐渐增加。传染性疾病危害范围不断扩大，危害时间不断增长，规模不断增加，病害种类显著增加，使水产疾病防治难度越来越大。重特大水产疾病的发生流行，还会对整个水域生物健康生长造成致命威胁，给养殖户带来巨大经济损失。水产养殖病害发生的主要特点病害种类多样化发病具有一定的复杂性特点疫病具有一定的爆发性特点具有一定的相互感染性特点常见微生物疾病由微生物引起的疾病也称为传染性疾病。按病原体的不同，水产养殖中的主要传染性疾病可以分为病毒性疾病、细菌性疾病、真菌性疾病和寄生虫引起的疾病。水产养殖的种类较多，每个品种都会有相应的病害。这为防治病害带来了一定的困难。虾微生物疾病类型名

称病毒性传染性皮下及造血组织坏死病（IHHNV），偷死病（偷死野田村病毒CMNV）、对虾白斑症病毒病（WSSV）、虹彩病（虹彩病毒DIV1）、肝胰脏细小病毒病（HPV）、桃拉综合症病毒病（桃拉病毒）等细菌性弧菌病（条件性弧菌、pirABvp毒性弧菌）、急性肝胰腺坏死病（AHPND/EM，PirA/B致病毒素，副溶血弧菌）、虾白便综合征（WFS，弧菌）、假单胞杆菌病（假单胞菌jia"dan"bao"ju）、爱德华氏菌病（迟钝爱德华氏菌）、链球菌病（链球菌）细菌性烂鳃病（柱状嗜纤维菌）等真菌性链壶菌病（链壶菌）、镰刀菌病（腐皮镰刀菌、三线镰刀菌、禾谷镰刀菌）等寄生虫虾肝肠胞虫（EHP）等鱼类微生物疾病类型名

称病毒性草鱼出血病（草鱼呼肠孤病毒）、鲫造血器官坏死病（鲤疱疹病毒Ⅱ型）、传染性胰脏坏死病（双RNA病毒）、鱼类弹状病毒病（弹状病毒）、传染性造血器官坏死病（IHN，传染性造血器官坏死病病毒IHNV）、病毒性出血性败血症（VHSV）、牙鲆弹状病毒病等细菌性条件性弧菌、pirABvp毒性弧菌、烂鳃病（柱状黄杆菌）、细菌性肠炎（气单胞菌）、鲤鱼白云病（恶臭假单胞菌）、赤皮病（荧光假单胞菌）、点状气单胞菌（腐皮病）等真菌性水霉病（水霉、棉霉）、流行性溃疡综合症（私囊霉菌）、镰刀菌病（镰刀菌）等寄生虫寄生纤毛虫病（车轮虫、小瓜虫和斜管虫）、蠕虫病（指环虫、三代虫）等水产养殖病害发生的主要特点病害种类多样化发病具有一定的复杂性特点疫病具有一定的爆发性特点具有一定的相互感染性特点发病具有一定的复杂性特点。针对我国的水产养殖环境来说，不同的养殖环境下其发病的程度也都是有所不同的，并且病害情况也具有一定的复杂性。近年来，随着全国性苗种流通的日益频繁，不仅大大增加了病害种类，同时也提高了发病的可能性，并逐渐趋于复杂化。水产养殖病害发生的主要特点疫病具有一定的爆发性特点。在水产养殖中，经常会发生一些重大流行疾病，一旦出现很容易发生大面积感染，从而造成死亡率大大增加，所以由此可以看出，疫病具有一定的爆发性特点。以鲫鱼为例，一旦出现出血病，致死率能够达到近90%；如果虾群中爆发白斑综合征病，致死率同样会达到80

～

90%。针对于这些病害，势必会给养殖户造成严重的经济损失，同时也会严重阻碍我国水产养殖业的健康发展，所以要想促进水产养殖业的健康发展，必须做好水产养殖病害防治工作水产养殖病害发生的主要特点水产养殖病害发生的主要特点具有一定的相互感染性特点在水产养殖中，如果发生病害，那么很容易发生相互感染的情况，从而形成新的病害，针对于新病害，由于很难及时发现，从而会耽误最佳治疗时间，进而造成严重的经济损失。2009年以来的监测表明，水产养殖病害的并发症现象普遍，霉菌与寄生虫并发、多种寄生虫并发、霉菌与细菌并发、寄生虫与细菌并发、2种或几种细菌并发都监测到过，病原微生物的多重感染会导致漏诊或误诊而使得治疗无效，并导致耐药性的形成。水产病害微生物检测随着我国海水、淡水养殖集约化程度的提高，水产养殖中疾病的危害出现了日益严重的趋势。水产养殖的病原微生物检测，对于水产产品安全和质量以及疾病的预防，都具有十分重要的意义。为了对各种爆发病、流行病进行深入研究和监控，将现代生物技术应用于各种病原诊断和防治，建立灵敏、准确、快速的病原检测技术已迫在眉睫。病原的检测方法多种多样，各种方法都有其优缺点，提高灵敏度和去除假阳性、快速便携是检测方法发展的趋势。病害微生物检测技术微生物培养技术核酸检测技术免疫学检测技术鉴定病害微生物微生物培养基TCBS显色培养基微生物培养基在养殖生产中常说的黄弧菌绿弧菌其实是不正确的，准确的应该叫做叫黄菌绿菌，它们是一大类能形成黄色或绿色菌落的细菌的总称。菌落颜色细菌类别绿色副溶血弧菌、河流弧菌、恶臭假单胞菌黄色溶藻弧菌、霍乱弧菌、哈维弧菌、鳗弧菌、温和气单胞菌淡黄无色变形杆菌、肠球菌蓝色假单胞菌、气单胞菌、蓝绿色创伤弧菌黑色变形杆菌核酸检测技术核酸检测技术是以病原的核酸为研究对象,通过鉴定病原的核酸分子来证实病原。PCR技术DNA指纹技术基因芯片技术核酸检测核酸检测技术以水体、水产生物的器官组织为材料，提取基因组DNA，进行后续核酸检测操作。核酸检测技术以病害微生物基因组中的特异性基因或16SrRNA基因为检测对象，定性更为准确。特异性基因：区别于其他微生物的基因。病害微生物的特异性基因一般为毒性基因或于毒性相关的基因，如外膜蛋白等。16S

rRNA(rDNA)基因：16S

rRNA(rDNA)基因为所有生物体生存所必需的基因序列并且也是较保守的序列之一。利用16SrRNA(rDNA)基因中的保守区为研究对象,对此间隔区进行分析,能为病原微生物各种菌株、种、属的鉴定、分型提供依据。在水产病害方面也开始运用，具有较高的选择性和特异性。核酸杂交技术核酸杂交是利用特异性的标记DNA片段为指示探针,与其互补链退火杂交,从而达到检查核酸样品中特定基因序列的目的。按杂交的方式可分为打点杂交、斑点杂交、Southern转移杂交和原位杂交等。根据核酸分子探针的来源和性质分为基因组DNA探针、cDNA探针、RNA探针及人工合成寡聚核苷酸探针等在探针的长短方面,则分为全染色体探针、PCR合成的长链探针及寡核苷酸探针。灵敏度高、特异性强、诊断速度快和操作较为简单。近年来在对虾病毒等病毒性病原体检测中倍受青睐。PCR技术PCR(Polymerase

Chain

Reaction)即聚合酶链式反应,一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法。该方法可使极微量的目的基因或特定的DNA序列在短短几个小时内扩增至百万倍。当我们知道待检病原具有某一特定基因片段时,即可利用特异的引物对样品中微量的目标

DNA进行

PCR扩增,通过电泳检测扩增出的特定片段,即可确定感染的病原。PCR技术PCR技术分类特

点一步法PCR不够敏感，潜伏感染样品难以检出套式PCR敏感性高，但操作繁琐，检测时间长，容易污染环境，且不可定量定量PCRSYBGreen染料法敏感性高，快速，可定量，但易出现假阳性Taqman探针法可定量，快速，探针长度太长，敏感性不佳Taqman-MGB探针法敏感性高，快速，可定量，造价相对较高LAMP法灵敏、快速，不需要特殊仪器，但易出现假阳性DNA指纹技术DNA指纹是指限制性酶消化产物在电泳图谱或Southern杂交中产生的一系列带纹,不同带纹代表了在染色体不同位置上的不同长度的DNA序列。目前在病原微生物检测上应用的DNA指纹技术主要包括限制性片段长度多态性,扩增片段长度多态性和随机扩增多态性DNA等技术。利用扩增片段长度多态性指纹技术成功研究了对虾不同发育期的孵化场及虾池中的病原微生物动力学变化,为预防不同发育期对虾的主要病原菌提供了依据。基因芯片技术基因芯片技术是将各种基因寡核苷酸点样于芯片表面,微生物样品DNA经PCR扩增后制备荧光标记探针,再与芯片上寡核苷酸点杂交,最后通过扫描仪定量并分析荧光分布模式来确定检测样品是否存在某些特定微生物。基因芯片技术可以对环境中的微生物实现高通量和并行检测。它在理论上可以在一次实验中检出所有潜在的致病原,可以用同一张芯片检测某一致病原的各种遗传学指标;同时具有灵敏、特异和快速便捷等优点,因而在致病微生物检测中有很好的发展前景。免疫学检测技术免疫学检测技术是利用抗原抗体间能发生特异性免疫反应的原理来检测病原。免疫学检测免疫学酶技术免疫酶技术利用了抗原-抗体反应的高度特异性和酶促反应的高度敏感性,通过肉眼或显微镜观察及分光光度计测定,达到在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的部位,以及对其进行定量的目的。酶联免疫吸附试验(ELISA)是目前应用最广泛的固相免疫酶测定技术。免疫荧光技术免疫荧光技术是利用某些荧光素通过化学方法与特异性抗体结合制成荧光抗体,荧光抗体与被检抗原特异性结合后,形成的免疫复合物在一定波长光的激发下可产生荧光,借助荧光显微镜可检测或定位被检抗原。免疫荧光技术将免疫化学和血清学的高度特异性和敏感性与显微术的高度精确性相结合,在水产养殖病原的检测上得到一定应用胶体金免疫层析技术胶体金免疫层析技术(GICA)是一种以胶体金作为标记物应用于检测特定抗原或抗体的一种新型免疫标记技术。胶体金免疫标记技术主要利用了颗粒金具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因此可用于定性或半定量的快速免疫检测方法中该技术成为继酶标记、荧光素和放射性同位素技术之后的又一重要的现代新型免疫标记技术。GICA技术已经成为目前检测食源性传染病致病菌最快速、敏感和特异的免疫学检测方法之一。胶体金免疫层析技术操作简单、生产成本低、检测范围广，不需要仪器设备检测1检测速度快，一般在5～15min就可得到肉眼可见的结果，可用于现场大批量样品的检测和流行病普查2稳定性好，室温保存12～24个月检测结果室温下保存时间较长3样品仅需简单处理或不处理即可检测，且样品用量极少4免疫磁珠分离法免疫磁珠分离法可将特异性抗体偶联在磁性颗粒表面,与样品中被检致病微生物发生特异性结合,载有致病微生物的磁性微球在外加磁场的作用下向磁极方向聚集,因此可特异性地将目的微生物从样品中快速分离出来。与一般细菌培养分离法相比,极大地提高了病原性副溶血性弧菌的检出率。病害防治策略保持良好的养殖环境，防止水体环境变坏；

使用卫生、营养丰富的饲料，福利养殖，增强养殖鱼类的抗病能力；减低（少）病原体进入水体环境的机会良好的养殖环境管理增强水产养殖品种的抗病能力减少水体中的病原体合理用药病害防治策略良好的养殖环境管理加强水质管理定时巡塘实施良好喂饲管理措施妥善弃置鱼类尸体及垃圾定期消毒渔具为新放养的成鱼或鱼苗进行检疫隔离/适当处理病鱼适当使用添加剂及药物定期监测水质及鱼健康备存养殖记录良好的养殖环境管理包括天气情况（阴/晴、气温、风向）水的情况（水位、水温、透明度、水色）对象的活动、吃食、生长及健康与否巡池中发现浮头或中毒现象，说明管理不善，应及时采取补救措施。巡池观察良好的养殖环境管理良好的养殖环境管理

影响水质的重要因素：水色、透明度、悬浮固体、酸碱度、溶解氧、氨、亚硝酸盐、鱼塘老化

在高密度的养殖环境下，过剩的饲料、鱼的排泄物及藻类等有机物容易令水质变差，因此有需要密切监测鱼塘的水质，并采取适当措施防止水质恶化，并及早作出补救行动加强水质管理良好的养殖环境管理水质调控包括物理调控、化学调控和生物调控注水：每隔一段时间给水池内注入一定清水，因为随着鱼类的捕捞和水分的蒸发，水池内的水量减少，进而单位面积内的有害物质就会增多，通过注入一定的清水，可以稀释水池内的有害物质。良好的养殖环境管理水质调控包括物理调控、化学调控和生物调控水质化学调控方法是利用化学作用，除去水中的污染物，通常在水体中加入水质改良剂，促使污染物混凝、沉淀、氧化还原、络合等，从而改善水体环境，促进养殖鱼类的生长和发育，抑制有害细菌的繁殖。通常在养殖的中、后期使用。①生石灰②过氧

化钙③明矾良好的养殖环境管理水质生物调控是利用微生物和自养性植物(如绿色藻类、高等水生植物)改良水质。其原理是这些微生物和植物可以吸收利用水体中的营养物质，将残饵与代谢产物转化为可利用资源或转移出水体，从而达到净化水质的目的。微生物净化移植或种植水生生物人造水草净化滤食生物的净化良好的养殖环境管理光合细菌一类以光作能源、以二氧化碳或小分子有机物作碳源、以硫化氢等作供氢体，行完全自养性或光能异养性的微生物。光合细菌在无氧有光、有氧无光以及无氧无光条件下均能取得能量生长。因此，光合细菌投入养殖池后，能迅速消除水体中的氨、硫化氢、有机酸等有害物质，平衡酸碱度，改善水质。净水活菌由多种化能异养菌（如芽孢杆菌、乳酸杆菌等）组成，具有改善水质等多种功能。它们克服了光合细菌不能直接利用大分子有机物，不能分解生物尸体、残饵、粪便等不足，不仅能净化水质，还能为单胞藻类的繁殖提供大量营养。净水活菌的大量繁殖，在池内形成优势菌群，可抑制病原微生物的滋生，减少病害。良好的养殖环境管理良好的养殖环境管理妥善处理鱼类尸体及垃圾能减少过量的有机物及病原体进入水体，并能有效减轻溶氧量下降及细菌滋生问题。清除浮于水面的垃圾、饲料残余及鱼尸，并将其妥善弃置于有盖垃圾箱，以免水质变坏及病菌传播。如发现鱼类死亡，应立即收集鱼尸并放入垃圾袋，然后焚烧或掩埋。良好的养殖环境管理良好的养殖环境管理良好的养殖环境管理良好的养殖环境管理过量使用饲料添加剂或药物，可导

致水中有机物增加、鱼类药物残余超标，病菌出现抗药性及浪费等问

题，对环境及鱼类的健康都有影响。管理措施：应按执业兽医师指示使用饲料添加剂及药物。良好的养殖环境管理定期监测水质及鱼健康良好的养殖环境管理养鱼户应养成良好习惯，备存养殖记录，内容包括天气情况、投入品、水温、溶氧度及养鱼活动情况等。这些数据有助分析养殖效果，以便选择合适的管理方法，提高效益。良好的养殖环境管理增强水产养殖品种的抗病能力减少水体中的病原体合理用药病害防治策略增强养殖品种的抗病能力科

学

选

育免

疫

预

防益

生

菌

应

用合理混养、科学投喂加

强

管

理增强养殖品种的抗病能力科研工作者和原（良）种生产基地应加强育种科学研究，为繁育场提供生产性能好、抗病力强的优良品种。病害微生物检测：挑选健康、抗病成鱼培育后备亲鱼，繁殖前对亲鱼进行病害微生物检测，淘汰携带病害微生物亲本。增强养殖品种的抗病能力疫苗、免疫调节剂研发机体免疫调节剂，科学使用于养殖生产中，刺激养殖动物机体的非特异性免疫系统，促进和诱发宿主防御反应，对于提高养殖动物非特异性免疫具有非常重要的作用。以中草药提取物、海藻多糖、香菇多糖、黄芪多糖、几丁质、糖蛋白、酵母多糖等为主要成分的组成药物在生产中已经被认可具有明显增强鱼类品种的细胞活动性，促进非特异性免疫因子的基因表达。增强养殖品种的抗病能力增强养殖品种的抗病能力养殖模式放养密度不当、混养品种及混养比例不合理与水产动物的抗病力都有很大的关系。如单位面积内放养密度过大，或底层鱼类与上层鱼类搭配不当，超过一般饵料基础与饲养条件，以致鱼类营养不良，抵抗力减弱。同一水层、食谱一致的两种鱼类混养在一起，抢食能力较差的种类因不能等到足够的饵料，导致抗病力下降。增强养殖品种的抗病能力饲养的过程中不能为了节约成本，使用劣质的饲料，一定要保证给鱼喂食的饲料是有质量保障的。还要根据不同的天气环境和温度，制订对应的喂食计划。滥用药物，损害消化、免疫系统功能。增强养殖品种的抗病能力保障水池的水质优良，水池内的微生物、有害物质、溶解氧、浮游生物等等，都可以使用特殊的检测设备来将数据信息分析出来，养殖户就可以根据数据分析的结果，制订对应的水质调节计划，保证水质的安全稳定。良好的养殖环境管理增强水产养殖品种的抗病能力减少水体中的病原体合理用药病害防治策略减少水中病原体减少水中病原体受精卵及鱼苗消毒：聚维酮碘鱼种放养消毒：高锰酸钾（灰锰氧）采购优质鱼苗：健康检疫证明食场消毒工具消毒颗粒饲料存放防霉变野杂鱼妥善存放防变质水草消毒水源水质不符要求：设置沉淀消毒池减少水中病原体不建议定期对水体进行消毒，以免破坏水体微生物系统的稳定而影响水体的自净能力和水质稳定，但必要时或治疗疾病时须消毒。良好的养殖环境管理增强水产养殖品种的抗病能力减少水体中的病原体合理用药病害防治策略合理用药规范用药原则合理用药二、慎用抗生素原则药物进入机体后，受伤害最直接、最严重的是肝、脾、肾等内脏器官，若因病原微生物具有一定耐药性而加大用药量时，内脏器官受到的伤害就更大，甚至有可能出现病原微生物未被杀死，而内脏器官已发生坏死的情况；过量用药还会对机体自身的免疫系统造成极大损害，后果严重。因此，不可乱用、滥用抗生素。营养和水质引起的疾病一般不用抗生素，细菌

性疾病也要慎用抗生素，不能长期使用同一种抗生素。规范用药原则合理用药规范用药原则合理用药四、对症用药原则只有做到对症下药才能保证水产养殖动物疾病防治的效果。这里的对症，不是指针对病害的症状，而是指针对引起病害的病原微生物。只有根据病原微生物对药物的敏感性正确选择药物和确定药物的剂量，才是对症用药的前提。病害微生物检测的重要性