克氏伪裸头绦虫形态结构特征分析

克氏伪裸头绦虫形态结构特征分析

养猪场的通常寄生虫是分散在猪体内的。感染率为15.2%91.6%，引起仔细分析。0总结克氏伪裸头绦虫(Pseudanoplocephalacrawford猪生长发育严重受阻、消瘦、腹痛和腹泻等症状1材料和方法1.1虫体的分离和固定克氏伪裸头绦虫成虫采集于洛阳市老城区某生猪屠宰场。由于虫体较长且前半部分纤细,易形成结团,在分离过程稍不注意易造成虫体断裂,因此,采集时将虫体与小肠内容物一起用干净塑料桶收集带回实验室,然后小心挑取虫体放入清水中轻轻漂洗分离单个完整虫体。虫体分离完毕后在清水中浸泡6~12h,让虫体自然伸展,将虫体放入10%福尔马林溶液中固定2天以上。染色前虫体标本需用清水冲洗数次,从头节向后分别剪成2cm左右的小段,投入50%乙醇溶液中过夜(16~24h),投入70%乙醇溶液再固定8h1.2齐尔石碳酸复红原液的制备德氏(Delafield)苏木素染液配制:将苏木素4g溶于95%酒精25mL中,再向其中加入400mL的饱和铵明矾溶液(将30g铵明矾用研钵研成粉末,溶于400mL蒸馏水中加温到40~50℃溶解即可)。将此混合液暴露于日光下3~7天,待其充分氧化成熟,再加入甘油和甲醇各100mL充分混匀后室温放置,待其颜色充分变暗至紫黑色,滤纸过滤,保存于棕色瓶中备用。使用时进行适当的稀释齐尔石碳酸复红染液配制:将11g碱性复红溶于100mL无水乙醇中,充分溶解后取10mL加入90mL5%石碳酸溶液混合即配成齐尔石碳酸复红原液。取0.5mL的石碳酸复红原液加入10mL80%酒精即可用于绦虫节片的染色1.3克氏伪裸头僚染标本的制作参考有关文献[5-8],对不同染色方法进行比较分析后,笔者选择了德氏苏木素染液和齐尔石碳酸复红染液来制作克氏伪裸头绦虫成虫染色标本。1.3.1苏木素染色样品1.3.2石碳酸复合染色样品、昆虫体样品1.4虫体大小、厚度测量根据显微镜下绦虫标本内部结构是否清晰,着色深浅以及是否均匀等标准判断染色质量。利用显微测微尺(BMCI1-7,上海彼爱姆光学仪器制造有限公司)和MiE显微图像处理系统(山东易创电子有限公司)测量虫体不同节片的长、宽以及内部器官的大小,同时拍照。另外,利用放大镜和肉眼观察虫体的颜色、节片数量,用直尺测量虫体大小、厚度。参考有关文献[1]、[2]、[9]、[10],对虫体内部器官的形态结构进行正确描述和种类鉴定。2结果与分析2.1孕节染色的染色经2种染色方法和不同染色时间的效果对比,发现克氏伪裸头绦虫成虫颈节、幼节和成节的染色以15倍苏木素稀释染液染色12h效果最佳,睾丸、贮精囊等组织着色较重,呈紫红色,背景着色浅,呈淡红色;孕节的染色以齐尔石碳酸复红染液染色24h为最佳,不成熟虫卵为粉红色,成熟虫卵为黑色。两种染色方法分化脱色时均采用1%盐酸酒精溶液进行脱色,其中德式苏木素染色法脱色8~10min最佳,齐尔石碳酸复红染色法脱色1~3min最佳。2.2节片结构特征经生理盐水洗涤后虫体呈乳白色,长约670~1573mm,前细后宽,头节和颈节部分宽度平均为73μm,向后逐渐变宽、孕节最宽,平均为11mm。颈节较薄,眼观呈半透明状,向后依次变厚,成节和孕节厚度达到1.2~1.8mm。整个虫体节片数量在658~1026个之间,见图1。显微镜下,颈节、体节均分节,节片呈梯形,前窄后宽,纵轴小于横轴。颈节纵轴为73~98μm,横轴为217~389μm,内部无雄性和雌性生殖器官,见图2。本实验中未观察到头节及其结构特征。体节可分为幼节、成节和孕节,节片间无节间腺。幼节与颈节相邻,内部开始出现睾丸,数量较少,13~26个,后面节片内逐渐出现内、外贮精囊和雌性生殖系统,生殖孔位于节片单侧边缘中部,见图3;成节内部结构较为复杂,每一节片有完整的雄性和雌性生殖系统。雄性生殖器官有睾丸、内贮精囊、外贮精囊和阴茎囊。睾丸充满整个成节,每个节片为28~38个,呈圆形、椭圆形,大小约为82.38~122.28μm,着色较深呈紫红色。外贮精囊位于节片中前部,呈梨形,与阴茎囊相连,阴茎囊呈纺锤形,其膨大处为内贮精囊。阴茎一端与内贮精囊相连,另一端通向生殖孔。雌性生殖系统包括卵巢、卵黄腺、子宫、受精囊等。卵巢位于节片中部,呈扇形分布,着色深。卵黄腺位于卵巢后方,为致密团状。子宫位于阴茎囊中部前端,为带状,着色浅。受精囊为葫芦形,与阴茎囊相邻,不易观察,见图4;孕节较大,纵轴长380μm左右,横轴约为1100μm,内部充满虫卵,睾丸、贮精囊、阴茎囊、卵巢等退化,子宫不明显,被虫卵覆盖。生殖孔未退化,见图5。根据肉眼和显微观察结果,初步判断本实验从猪肠内容物分离的虫体为克氏伪裸头绦虫的成虫。3讨论猪场克氏伪裸头绦虫感染率高,与其中间宿主和保虫宿主的种类和生活习性密切相关苏木素可以将细胞核染成蓝紫色或深紫色,而细胞浆着色较淡4虫体标本的处理与展望用15倍苏木素稀释染液对克氏伪裸头绦虫的颈节、幼节和成节染色12h,可以获得节片分节明显、雄性和雌性生殖系统结构清晰的染色标本;用齐尔石碳酸复红染液染孕节24h,可区分孕节内部成熟和未成熟虫卵、着色理想的标本。加上这2种染液性能稳定,可长期保存使用,成为制作绦虫成虫标本理想而又简便的方法。通过对猪源克氏伪裸头绦虫成虫的肉眼和显微观察发现,明显的形态结构特征为虫体扁平状呈乳白色,颈节窄且薄,向后逐渐变宽变厚;整个成虫节片横轴大于纵轴,节片间无节间腺,在每个成节内各有一套完整的雄性和雌性生殖系统,到孕节阶段,整个节片内充满成熟和未成熟虫卵,其他生殖器官均退化,仅可看到明显的生殖孔。这些典型特征在虫种鉴定和临床诊断猪和人克氏伪裸头绦虫病具有重要的参考价值。将固定在70%酒精中的绦虫标本取出,依次投入50%、30%酒精和蒸馏水中各30min,脱去虫体中的乙醇;将配好的苏木素染液用蒸馏水进行10倍、15倍和20倍的稀释,将经过脱醇处理的虫体样品在3个不同浓度的染液中染色3、6、12、15h;然后用自来水洗去浮色,再分别投入30%、50%、70%的梯度酒精中各脱水20~30min;将虫体标本压入两载玻片之间,载玻片的左右两边用适当厚度的纸片衬垫防止压片过薄损伤虫体组织,载玻片两端用细线绳捆扎后投入70%酒精中固定24~48h;用盐酸酒精混合液(80%酒精100mL加入2mL浓盐酸)分色8~10min,直至镜下节片内部结构清晰为止;将分色后的虫体标本依次投入80%、90%、95%、100%I、100%II的梯度酒精中各脱水20~30min;将虫体标本移入二甲苯与无水乙醇比例为1:1的混合溶液和纯二甲苯中各1~3min,待虫体完全透明后取出;将透明后的虫体置于载玻片中央,滴加适量中性树胶封片,放入烘箱中60℃烘干2天将虫体标本投入稀释染液中,分别染色9h、12h、16h、24h、2天;将虫体标本压入两载玻片之间,载玻片的左右两边用适当厚度的纸片衬垫