高考生物查漏补缺复习课件：微生物的实验室培养人教选修3

专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养微生物真核类㈠.微生物的类群原核类:

细菌、支原体、放线菌、蓝藻原生生物：显微藻类、原生生物（如：草履虫、变形虫等）真菌：酵母菌、霉菌、食用菌非细胞类：病毒、类病毒、朊病毒微生物的共同特点：个体微小、结构简单一.微生物基础知识1.细菌的形态2.细菌的繁殖细菌主要是以二分裂的方式进行增殖（如右图）3.细菌的菌落⑴.定义：单个或者少数细菌在固体培养基上大量

繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有

一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。⑵.特征：大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。⑶.功能：每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以作为菌种鉴定的重要依据。几种菌落及其形态几种菌落及其形态4.病毒的结构

:由核酸和蛋白质构成。病毒的结构吸附注入合成释放组装5.病毒的繁殖病毒的增殖一般可分五个阶段，即：吸附→注入核酸→合成核酸和蛋白质→组装→释放6.病毒的营养方式：寄生㈡.微生物需要的营养物质及功能微生物需要的五大类营养要素物质是：1.碳源

2.氮源

3.生长因子

4.无机盐

5.水1.微生物的碳源⑴.概念：凡是能为微生物提供所需碳元素的营养物质。⑵.来源：

①无机碳源：CO2；NaHCO3等②有机碳源：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等⑶.作用：①构成细胞物质和一些代谢产物②异养微生物的能源2.微生物的氮源⑴.概念：

凡是能够为微生物提供N元素的营养物质。⑵.来源：

①无机氮源：N22、NH

+、NO

-、NH

等。4

3

3②有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等⑶.作用：

主要用于合成蛋白质、核酸及含N的代谢产物。3.生长因子⑴.概念：微生物生长不可缺少的微量有机物。⑵.作用：

酶和核酸的组成成分。⑶.常见的生长因子：维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。㈢.培养基培养基（培养液）是由人工方法配制而成

的，专供微生物生长繁殖使用的营养基质。培养基的类型和用途不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方(参考教材附录内容)不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、氮

源、无机盐、等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。培养基的种类划分标准培养基种类特点用途物理性质液体培养基不加凝固剂工业生产半固体培养基观察加凝固剂，如琼脂

微生微生物的运动、分类鉴定固体培养基物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种化学成分天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确分类、鉴定用途选择培养基在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物鉴别培养基在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类微生物液体培养基：均匀混浊生长 沉淀生长back表面生长半固体培养基：无动力有动力(弥散)固体培养基：菌落几种选择培养基加入青霉素的培养基分离酵母菌、霉菌等真菌不加氮源的无氮培养基分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基分离导入了目的基因的受体细胞back人工斜合成巡寿培养难基只徒能维她持细输胞生星存，蚀要想共使细驰胞生长和繁殖，还需补充一定量的天推然培忘养基币（如血清）。血清中含有：①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋膨白等拼）②多种金属离子；③激素；④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、未胶原蓝等。⑤各种生长因子⑥转移蛋白⑦不明错成分㈣.无菌哪技术无菌技术的概念无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防敬止杂偏菌污染的方法。消毒与灭菌的概念及两者的区别⑴消毒定义：利用化学或物理方法，杀死部份微生物的过程滤。⑵灭菌的定义：以化学试剂或物理方法消灭所有微生物，包括号所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全抛无菌之过程。灭菌与消毒技术是微生勺物有拦关工作中最普通也拌是最重遗要括的技窃术。3.常用的消家毒与缩慧灭菌这的方法昼⑴.消毒的方法：①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min衰或80督℃下煮15min。③化学药剂消毒法：用75%酒精、新槐洁尔灭涉等进行皮肤消毒；氯气消毒水源。④紫外鞋线消勤毒。①灼烧灭菌②干热灭菌：160-1组70女℃下加热1-2h。③高压蒸气灭菌：

100鞠kPa、121℃下维持脸15振-3都0m灰in.顶⑵.灭菌摊的方使法：最常哪用的王灭菌膨方法分是高压筛蒸汽骡灭菌，它绵可以慈杀灭吨所有的生物，包括最耐热的某些微生舌物的领休眠艰体，同时可以基本保持培养基的营养成分缴不被狐破坏。有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为扮了防听止杂阁菌，特别是空气中的杂菌污染，试管虹及玻捉璃烧范瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采舌用棉金花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽着，它僻们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不掩能通过。而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具序是专奖为防告止空青气中角微生镜物的寄污染需而设哗计的愤。无菌技术除了用来防止实验室的培养唱物被奴其他蓬外来微生物污染外，还有什么目的？答：无菌技术还能有效避免操作者自身被尖微生铺物感刻染。请你判断以下材料或用具是否需要消裕毒或肯灭菌苏。如果需要，请选择合适的方法。⑴培养细菌用的培养基与培养皿⑵玻棒、试管、烧瓶和吸管⑶实验操作者的双手答：（谷1）、肾（2）需坏要灭侧菌；瘦（3）需疲要消碗毒。P1—5推—16熊旁栏幸思考二.实验皆操作(以培项养大旱肠杆培菌为皱例)㈠.制备牛肉膏蛋白胨培养基计算称量溶化灭菌:将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为10鲁0k笑Pa、温度为121℃，灭菌15～30min。倒平板:待培教养基冷却到50℃左右时，在酒精灯附近月倒平填板。2d后观察平板，熟无杂荐菌污染才可用败来接斥种。倒平问板操顶作问题讨鉴论培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右走时，限才能蛮用来倒平板。你用什么办法来估计培养基陕的温母度？答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，心感觉姑锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可怨以进臂行倒平板了。为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防个止瓶健口的微生物污沙染培构养基。表平板夕冷凝微后，纯为什赴么要两将平桐板倒蓄置？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠西，凝享固后兄的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，土既可以使培养基表面的水分更好地挥发，剩又可绑以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污哈染。在倒平板的过程中，如果不小心将培塑养基津溅在屡皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用朋来培蒸养微生物吗？为什么？答：究空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的致培养基上滋生，因此最骡好不得要用这个平板鲜培养桑微生抹物。㈡.纯化湾大肠孟杆菌微生物的接种的常用接种方法隐有：平板划线法和稀释涂布平板法。1.平板划线的操作方法平板划线的操作一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到亡分离披单菌落的目的；二是谨存留在划破处的单个细胞无法形成规则的努菌落，菌落会沿着划破坏处生挪长，会形成一妙个条逆状的腾菌落警。问题讨拔论1.为什么在操作的第一步以及每次划线孔之前都丘要此灼烧接种环？在划线操作结束时，仍绘然需要衰灼洲烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免绪接种盗环上可能存在的微生物污染培养物；每次费划线淹前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后拳，接其种环上残留的菌种，使下一次划线时，接艇种环旅上的菌种直接来源于上次划线的末端，从致而通灿过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目窄逐渐皆减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接息种环轿，能及时取杀死搭接种纽奉环上扰残留的菌种，姐避免司细菌茫污染混环境恳和感扰染操睡作者摸。在灼培烧接际种环陆之后南，为巷什么棕要等巴其冷拼却后芦再进蔬行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。在作第二次以及其后的划线操作时，宣为什溪么总冈是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条串起始律处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使拨细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，答最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。2.稀释肠涂布猎平板的操嫌作方宝法问题顿讨论涂布平板的所有操作都应在火焰帅附近慎进行提。结合占平板划线与系列稀释的无菌操作要薄求，

想声一想，第2步应如何进行无菌操作许？答：应从操作的各个细节保证“无菌”港。票例如，酒精灯与培养皿的距离要合适腔、吸管绢头不踩要接触任何其他物体、吸管要在酒挽精灯火焰周王围等等。3.微生谢物的贵恒温则培养4.菌种的保存⑴.临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。⑵.长期保存：

甘油冷冻管藏法三.结果粪分析衔与评浴价㈠.培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落树生长说明里培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。㈡.接种操作是否符合无菌要求如果培惧养基上生长的菌落的颜色、形状、大小储基本糠一致厌，并符锤合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是造符合得要求的输；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接概种过嫂程中，降无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再升次练反习。㈢.是否进行了及时细致的观察与记录培养12h洒与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，场及时观惯察记录的同学会发现心这一迹点，并能观察到其候他一锁些细微役的雷变化果。代谢类妥型养型正)营养类型能源氢的供体基本碳源微生物举例光能无机营养(光能自光无机物二氧化碳蓝细匆菌绿色坡硫细菌惑藻类养型)光能有鞭机营养(光能异光有机物二氧化碳艇及简单有窝机物紫色非沟硫晌细菌养型)

化能无机营养(化能自无机物无机物二氧化碳硝化楚细菌氢细菌养拴型)

化能有艇机营养(化能异洒有机洲物有机物透有机物大多数已兆知细菌和渡全部绵真核见微生浑物本课病题知机识小钻结:A.是碳源的物质不可能同时是氮源

B.凡碳源都提供能量C.除水以外的无机物只提供无机盐D解.无析机：冤氮不源同也厨的能微提剩生供物能间，量所需营养物质有较大忙差别打，要公针对微亚生物的具体情况分析。对于A、B选项，它亚的表撤达是不舅完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳浅；有堡的碳源芽可同时是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同时是次能源钥，如葡懂萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如民蛋白烫胨。对于C选项，除水以外的无机物种类繁多，功能猪也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源锅；NaH