2019高考生物选修一生物技术实践知识点总结

--#-（6）运用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离纯化1．凝胶色谱法：（1）依据：蛋白质相对分子质量的大小（2）原理：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。⑶凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。2．缓冲溶液（1）组成：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成（如H2CO3—NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等），调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。（2）作用：抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定。3．电泳法：（1）原理：不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同,在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。（2）分离方法：琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。（3）聚丙烯酰胺凝胶电泳：在加入带负电荷多的SDS,形成“蛋白质一SDS复合物”，使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。二、实验步骤1．样品处理红细胞的洗涤洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白,采集的血样要及时采用低速短时间离心分离红细胞，然后用胶头吸管吸出上层透明的黄色血浆,将下层暗红色的红细胞液体倒入烧杯,再加入五倍体积的生理盐水,缓慢搅拌lOmin,低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色,表明红细胞已洗涤干净。血红蛋白的释放在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。粗分离分离血红蛋白溶液将搅拌好的混合溶液离心后，试管中的溶液分为4星。第一层为无色透明的甲苯层,第2层为白色薄层固体，是脂溶性物质的沉淀层,第3层是红色透明液体，这是血红蛋白的水溶液,第4层是其他杂质的暗红色沉淀物。将试管中的液体用滤纸过滤，除去之溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。透析透析可以去除样品中分子量较小的杂质纯化：凝胶色谱法分离4•纯度鉴定SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（选做）三、注意事项如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出.专题五植物有效成分的提取课题一植物芳香油的提取天然香料的来源：植物、动物，真菌芳香油的性质：挥发性强;难溶于水，易溶于有机溶剂;成分复杂，以萜类化合物及衍生物为主。芳香油的提取方法：蒸馏、压榨、萃取等。⑴水蒸气蒸馏法：原理：水蒸汽可将挥发性较强的芳香油携带出来形成油水混合物，冷却后水油分层。方法：水中蒸馏：水上蒸馏：水汽蒸馏。不足：有些原料不适宜于水中蒸馏，如柑橘、柠檬等易焦糊，有效成分容易水解。⑵压榨法（通过机械压缩力将液相物从液固两相混合物中分离出来的一种简单操作）：如柑橘、柠檬等易焦糊的材料不足：分离困难，出油率低⑶萃取法：原理：芳香油易溶于有机溶剂，溶剂挥发后得到芳香油。如石油醚、酒精、乙醚等。不足：有机溶剂中的杂质影响芳香油的品质。玫瑰精油的提取实验步骤：鲜玫瑰花和清水（比例为1：4）一水蒸气蒸馏一油水混合物一分离油层一除水一玫瑰油注意事项：①蒸馏时间不能过短，温度不能过高。②加入氯化钠：分离油层，无水硫酸钠：吸收油层中的水分橘皮精油的提取实验步骤：①石灰水浸泡：防止压榨时滑脱，提高出油率，降低压榨液黏稠度漂洗：浸泡好的橘皮用流水彻底漂洗干净，沥干。压榨：将橘皮粉碎，加入小苏打和硫酸钠（促进油和水的分离）后,用压榨机压榨过滤：用布袋过滤,滤液再高速离心处理，分离出上层橘皮油。静置处理：（除去果蜡和水分）静置5〜7d，分离出上层澄清橘皮油。再次过滤：将下层橘皮油用滤纸过滤，滤液与上层橘皮油合并，得到橘皮精油。课题二胡萝卜素的提取胡萝卜素性质：橘黄色结晶，化学性质比较稳定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等有机溶剂。依据碳碳双键的数目划分为a、B、Y三类。其中最主要的组成成分为B-胡萝卜素。作用：①治疗夜盲症、幼儿生长发育不良、干皮症等疾病；②常用于食品色素；③使癌变细胞恢复成正常细胞。3•提取B—胡萝卜素的方法主要有三种：①从植物中提取②从大面积养殖的岩藻中获得③利用微生物的发酵生产4•实验步骤①粉碎:使原料与有机溶剂充分接触，增大溶解度。②干燥:脱水温度太高，干燥时间太长会导致胡萝卜素分解。③萃取④过滤：除去萃取液中的不溶物⑤浓缩：蒸发出有机溶剂5•萃取剂的选择：具有较高的沸点，能够充分溶解胡萝卜素，并且不与水混溶。如石油醚6•、影响萃取的因素主要因素：萃取剂的性质和使用量一般来说，原料颗粒小，萃取温度高，时间长，需要提取的物质就能够充分溶解，萃取效果就好。7、胡萝卜素提取装置的设计：萃取过程应该避免明火加热，采用水浴加热,这是因为有机溶剂都是易燃物，直接使用明火加热容易引起燃