hplc法测定独一则颗粒中木草素的含量

hplc法测定独一则颗粒中木草素的含量

单味针（无糖）是在提取和其他过程中由独裁者phollomathe产品的提取而成的中药产品。具有活血、镇痛、活血化瘀、止血于血液抑制等功效。独一味中的主要化学成分为黄酮类化合物:木樨草素,有木樨草素?-7-?O?-?葡萄糖苷、芹菜素?-7-?O?-?新橙皮糖苷、槲皮素和槲皮素?-3-?O?-?阿拉伯糖苷。本品水解后的主要黄酮苷元为木樨草素,是独一味中的主要化学成分。为了控制独一味颗粒的内在质量,我们采用HPLC法,对其制剂中所含的主要成分木樨草素进行了含量测定研究,取得了较为满意的结果,可作为独一味颗粒的主要质量控制指标之一。1仪器和试剂盒1.1仪器Waters高效液相色谱仪:1525泵,2487双通道紫外检测器,Waters柱温箱,Empower液相色谱工作站。1.2含量测定木樨草素对照品(批号:111520-200201),供含量测定用,购自中国药品生物制品检定所。甲醇为美国Tedia色谱纯,水为超纯水,其它试剂均为分析纯。2方法和结果2.1流动相及柱温度参照银杏黄酮含量测定的色谱条件。色谱柱:PhenomenexLunaC18,4.6mm×250mm,5μm;柱温:30℃;流动相:甲醇-0.4%磷酸溶液(50∶50);检测波长为350nm;流速:1.0mL/min。2.2检测波长的选择取木樨草素对照品溶液,在200~400nm范围内扫描,结果在350nm处有最大吸收,故选择350nm作为检测波长。2.3供试品溶液的制备取本品,研细,称取1.0020g,置锥形瓶中,加甲醇25.0mL,称定重量,超声提取30min,取出,放冷,甲醇补足失重,滤过,取续滤液10.0mL,置烧瓶中,加盐酸2.9mL,90℃水浴回流30min,取出,放冷,转移至25mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取滤液为供试品溶液。2.4对照溶液的制备取木樨草素适量,加甲醇制成每1mL含10μg的溶液,作为对照品溶液。2.5空白溶液测定按处方中辅料的比例,制备不含独一味的空白制剂,按正文方法制成空白溶液,依法测定,结果空白溶液在与木樨草素对照品相同保留时间处未见色谱峰,表明其它成分及辅料无干扰。2.6标准曲线及线性回归分析精密吸取上述对照品溶液(0.01058mg/mL)4,8,12,16,20μL,注入液相色谱仪,测定峰面积,以对照品的进样量(μg)为横坐标,以峰面积为纵坐标,进行线性回归,得回归方程(n=5):Y=4.106×106X-16281.947,r=0.99997。线性范围0.04232~0.2116μg。2.7进样稳定性试验精密吸取上述对照品溶液10μL,分别在0,2,4,8,24h进样,测定木樨草素的峰面积,结果表明24小时内测定结果稳定。2.8精密度测试精密吸取上述对照品溶液10μL,注入液相色谱仪,测定木樨草素的峰面积,重复进样5次,RSD为0.56%。2.9平均含量和rsd照含量测定项下操作,对同一批号(批号020504)样品5份进行测定,结果平均含量为0.369mg/g,RSD为1.94%。2.10加样回收及加标回收率用加样回收,精密称取已知木樨草素含量的同一批号(批号020504)的样品约0.6g,共6份,分别精密加入木樨草素对照品溶液(0.2002mg/mL)一定量,照含量测定项下操作,平均回收率98.23%,RSD为1.33%。2.11样品中木草素的含量测定测