金银花浸膏提取工艺研究

金银花浸膏提取工艺研究

金银花是蔷薇科植物科的一个干燥的花蕾和花朵。具有清热解毒,凉散风热之功。现代药理研究表明,其有较广泛的抗菌、抗病毒作用,主要有效成分为绿原酸,2005年版一部药典规定药材含绿原酸不得少于1.5%;浸膏含绿原酸不得低于15%。为了保证含金银花中药制剂的临床疗效,对其提取工艺研究,探索含量高,成本低的提取方法。1实验部分1.1高效液相色谱法干燥的金银花药材,药用乙醇,无水碳酸钠,浓盐酸,绿原酸对照品(购自中国药品生物制品检定所,批号0753-200111),乙腈、甲醇为色谱醇,美国Agilent1100高效液相色谱仪,分析天平(上海天平厂出品)。1.2原料的提取与测定含水率取忍冬的干燥花蕾或带初开的花,除去杂质,切碎,混匀为提取原料。称取混匀的原料200g,加10倍量水煎煮2次,每次2h,合并水煎液,静置过夜,过滤,滤液水浴上浓缩成稠膏状,再在真空干燥箱(60℃)中干燥成干浸膏,称重。测含水率,结果见表1。称取混匀的原料200g,加10倍量水煎煮2次,每次2h,合并水煎液,静置过夜,过滤,滤液水浴上浓缩成1:1的稠膏,加乙醇至含醇量达60%,再静置过夜,过滤,滤液减压回收乙醇,得无醇味浓缩膏,真空干燥箱中(60℃)干燥成干浸膏,称重。测含水率,结果见表1。取混匀的原料200g,置3000mL烧瓶中,加80%乙醇回流提取2次,每次加10倍量乙醇,每次回流2h,合并醇提液,过滤,滤液减压回收乙醇至无醇味,水浴上浓缩成1∶1稠膏,置真空干燥箱中干燥成干浸膏,称重。测含水率,结果见表1。称取混匀的原料200g,共计3份,分别加1%、0.5%、0.1%碳酸钠水煎煮2次,第1次10倍量水,2h,第2次8倍量水,2h,合并水煎液,测定pH值,用盐酸调pH近中性,水浴上浓缩至稠膏,置真空干燥箱(60℃)中干燥成干膏,称重。测含水率,结果见表1。1.3计算含水率用快速水分测定仪测定,预热30min,调零点,样品加热30s,读数据,得失重量,计算含水率(δ)=失重量(g)/样品重(g)×100%。结果见表1。1.4重复性与稳定性试验美国Agilent1100高效液相色谱仪,G1311A四元梯度泵,G1315B二极管陈列检测器。色谱柱DiamonsiTMC18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-0.4%磷酸(10:90);检测波长:327nm;柱温:30℃;流速:1.0mL/min。精密吸取浓度为0.0416mg/mL的绿原酸对照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL,注入液相色谱仪中,按上述色谱条件测定峰面积(见表2),以进样量为横坐标,色谱峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,经线性回归,得回归方程为Y=224.71X-7.61,r=0.9999。由此可见,绿原酸在0.0832～0.4160μg范围内线性关系良好。标准曲线见图1。重复性与稳定性试验精密度:精密吸取同一供试品溶液,分别测定5次,得绿原酸峰面积的RSD为1.1%。重复性:精密称取同一原料,共5份,分别制得5份供试品溶液,进样测定,得绿原酸含量RSD为2.2%。表明本方法重复性较好。稳定性:精密吸取同一供试品溶液,分别于配制后0、2、4、8和12h进样测定。结果得绿原酸峰面积的RSD为1.1%。表明本品溶液在12h内稳定。精密称取已知含量的同一样品,共5份,分别加入绿原酸对照品溶液(0.10mg/mL)1.0mL,按样品含量测定下操作,测定结果平均回收率为98.8%,RSD为2.4%。精密称取各样品细粉2g,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇25mL,密塞,称定重量,超声提取30min,放冷,再称定重量,加50%甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,取续滤液即得。精密吸取对照品溶液5μL与供试品溶液20μL,注入高效液相色谱仪,测定,计算。结果见图2～3,表3。2水提醇提取总量低,醇提效率低绿原酸为酚酸类化合物,可溶于水,易溶于醇,加碱形成有机酸盐更易溶于水,加酸后,变为原形,水提取虽然成本低,但绿原酸提取总量偏低,水提醇沉收率及提取总量最低,醇提耗用乙醇成本高,绿原酸总量也不高,不宜采用;3种碱水提取比较,0.5%碱水提取,绿原酸提取总量最高,且含水率最低,所用碳酸钠量和浓盐酸量较低,综上所述,用0.5%碱水提取工艺适用于工业生产。3种碱水提取煎煮过程中,要不断补充蒸发掉的水分,以保持碱度。1.2.1