基于多重竞争性PCR技术的基因定量方案资料

基于多重竞争性PCR技术的基因定量分析摘要：多重竞争性PCR技术（MCF-PCR）来进行基因定量分析是上海翼和应用生物技术有限公司开发的一种高通量，快速进行核酸定量分析的实验方案。该方案利用竞争性PCR原理，实现和实时荧光定量PCR一样的快速、准确结果，但与只能进行单管检测的实时荧光定量PCR相比，该方案能在一管反应中检测多达10-15个目的基因，并利用ABI3730x1测序系统实现96（384）个样本快速鉴定，从而实现高通量的快速准确鉴定。比Beckman的GeXP方案比，该方案有着和实时荧光定量PCR一样的准确性，而GeXP系统仅能进行基因定量进行初步的评估。技术原理竞争性PCR最早是wang等人于1989年发明用于目标基因表达量的确定，其理论基础是制备一段内对照序列，其与目标基因序列相同，但存在长度上的差异，两者用共同引物进行扩增，具备类似的扩增效率，因此两种扩增产物量比值可以真实反映掺入内对照与目标基因mRNA量的比。这种竞争PCR技术运用到基因表达分析中，降低了位点扩增效率差异以及实验操作和检测环境等外界环境的影响，从而有着非常准确的实验结果。图a是本公司开发的一个竞争性PCR来检测多个基因的表达情况，左图为正常样本结果，右图是病历样本的实验结果。其中基因4是看家基因（*表示看家基因）。经过比较，两个样本间检测基因有表达差异。・•正#本□HK1□K闵□・•正#本□HK1□K闵□对照样本103基因4*基因5苹因6病例样本31413基酌基因£图a多重竞争性PCR的结果示意及分析基于多重竞争性PCR方案，本公司能在单管PCR中实现15-25个基因的同时检测，基于ABI3730xl测序系统可实现96（384）个样本快速鉴定。技术的比较A实时荧光定量PCR（SYBR法）实时荧光定量PCR作为基因定量最准确的检测方案被广泛应用到科研的各个领域，经过对比，本公司开发的多重竞争性PCR技术有着和实时荧光定量PCR（SYBR法）有着完全相同的准确度。图b显示是多重竞争性PCR技术和实时荧光定量PCR（SYBR法）的结果比较。将一

Real-Tim^y=1.0315x一0.0434Rz=0.990112987&543212-111111111?虽莒娶daHd电昌O个样本进行梯度稀释后，用多重竞争性Real-Tim^y=1.0315x一0.0434Rz=0.990112987&543212-111111111?虽莒娶daHd电昌O2129S432129S4321-S左0.991311.11.21.31.41.51.61.71.81.922.12.211.11.21.31.41.51.61.71.81.922.1梯拂虔浓虔RNA图b，多重竞争性PCR和实时荧光定量PCR（SYBR法）的结果比较。BBeckman的GeXP系统相对于Beckman公司开发GeXP多重基因表达遗传分析系统（即常规的多重PCR系统），本公司开发的多重竞争性PCR技术有着无可比拟的准确性，而Beckman公司开发的GeXP系统仅是基于简单的多重PCR方案，在实验结果的准确性上要大打折扣。图C显示是多重竞争性PCR技术和GeXP多重基因表达遗传分析系统（即常规的多重PCR系统）的实验结果比较。对于多个基因，稀释至不同的浓度，然后用多重竞争性PCR和GeXP系统（常规多重PCR系统）进行定量分析。其中直线是多重竞争性PCR结果，虚线是GeXP系统（常规多重PCR系统）的结果。基于多重竞争性PCR的结果和实际值是一致的——斜率为1的线性直线（R2>0.99）,而GeXP系统（常规多重PCR系统）所获得的结果和实图c图c多重竞争性PCR和GeXP系统的比较广泛的应用当样本总量大于100例，检测位点大于4个时，用该方案就能够用比实时荧光定量PCR（SYBR法）更低的价格开展检测。本方案非常适合信号/代谢通路研究，分子药物筛选的分析，药理毒理研究等多样本多位点检测需求。研发周期针对细胞/组织中基因表达丰度存在着的巨大差异，本公司已经开发出一整套完整的研发流程以保障在短期内完成相关基因的的研发工作。整个开发流程