小柴胡汤降脂及抗脂肪肝形成的实验研究

小柴胡汤降脂及抗脂肪肝形成的实验研究

在本研究中，我们使用了抗胆红素肝脏疾病的模型，调查了小柴胡汤的降压和抗胆红素的形成，为扩大小柴胡汤的临床应用范围，并发现具有抗高血压和肝脏保护的有效药物提供了一定的药理基础。1试剂与试剂盒(1)动物:雄性健康SD大鼠,90只,体重(200±10)g,购于北京维通利华实验动物技术有限公司,合格证号SCXK(京)2007~0001。(2)中药制备:小柴胡汤的组成为柴胡24g,黄芩9g,半夏9g,生姜9g,人参(红晒参)9g,甘草9g,大枣12g。上7味,以8倍量水浸泡30min,加热保持微沸30min,过滤;残渣加5倍量水,微沸30min,过滤,合并2次滤液,滤液浓缩至折合原药材浓度2g/ml。(3)辛伐他汀溶液:将辛伐他汀片研成细粉末溶于水中,浓度为0.467mg/ml,用时充分摇匀。(4)脂肪乳剂:参考文献制成脂肪乳剂,放于4℃冰箱中备用。1.1试剂胆固醇(北京普博欣生物科技有限责任公司,分装批号:PB10167,纯度大于99.5%),脱氧胆酸钠(北京市化学试剂公司,批号:20070122),丙硫氧嘧啶片(上海复星朝晖药业有限公司,批号060902),吐温80(天津市福晨化学试剂厂,批号20070307),1-2丙二醇(北京北化精细化学品有限责任公司,AR级,批号20040726),辛伐他汀片(浙江京新药业股份有限公司,批号0611233),猪油(市购)。TC试剂盒(批号:70710G011)、TG试剂盒(生产批号:70709F021)、LDL-C试剂盒(批号:70615F011)、HDL-C试剂盒(批号:70718F011),均为北京利德曼生化技术有限公司提供。1.2仪器低温离心机:DDL-5型,上海安亭科学仪器厂产。多功能调速匀浆机:D-8401型,天津市华兴科学仪器厂产。2大鼠肝脏生化指标检测2.1分组与处理大鼠随机分为正常对照组30只和造模组60只。造模组大鼠每天AM8:00开始给予脂肪乳剂(10ml/kg)灌胃,每日1次,连续1w。正常对照组给予等量生理盐水灌胃,二组大鼠均喂以普通饲料。于实验第2w,造模组大鼠再次随机分为模型组、小柴胡汤高剂量组、小柴胡汤低剂量组、辛伐他汀组共4组,每组各10只,各组继续给予脂肪乳剂灌胃2w,正常组给予等量生理盐水;其中小柴胡汤高、低剂量组分别于PM4:00按9.45g/kg和18.9g/kg(分别相当于成人临床等效量和其2倍量),给予小柴胡汤灌胃,辛伐他丁组按4.67mg/kg剂量给予辛伐他丁溶液灌胃,正常对照组和模型组分别给予等量生理盐水,连续给药2w。分别于实验第8d、15d和第22d,从各组中取大鼠10只,10%水合氯醛腹腔麻醉,主动脉取血5ml,离心,取血清,低温保存,待测。采血后迅速剖取肝脏,称重后于固定位置切取小块肝脏组织,放于10%的甲醛溶液中保存,HE制片。2.3观测指标体重、肝脏指数、血清生化指标、肝组织学观察。2.4统计学处理各组数据均以ˉx±s表示,总体方差分析后,多组间的均值比较采用q检验,全部数据用Spss统计软件处理。3结果3.1w后血脂中tc、tg、ldl-c、hdl-c表达变化由表1可以看出,与正常组比较,模型大鼠连续给予脂肪乳剂灌胃1w后,血中TC、TG、LDL-C、HDL-C均呈不同程度升高,其差异均有显著或非常性意义(P<0.05或P<0.05)。3.2模型组比结果分别见表2、3。与正常组比,☆P<0.05,☆☆P<0.01与正常组比,☆P<0.05,与模型组比,*P<0.05;与柴低组比,△P<0.05与正常组比,☆☆P<0.01;与模型组比,*P<0.05,**P<0.01,;与柴低组比,△P<0.053.3表4显示了服用小柴胡汤2周对高脂血症模型大鼠体重和肝脏指数的影响与正常组比,☆P<0.05;与模型组比,*P<0.053.4小柴胡汤小剂对大鼠肝脏组织结构的影响肉眼观察到,正常对照组大鼠肝脏未见肿大,背面呈暗红色,质地柔软;模型组大鼠肝脏明显增大,边缘圆钝,包膜紧张,外观呈土黄色,与周围组织有粘连,切面有油腻感;小柴胡汤小剂量组的肝脏肿大,包膜较紧张,外观略呈土黄色,但程度不及模型组;小柴胡汤高剂量与辛伐他汀组的肝脏体积大小及外观颜色均接近正常组。镜下观察到,正常对照组大鼠肝脏未见异常;模型组大鼠肝细胞肿大、肿胀肝细胞成圆形,体积明显增加,胞质内充满大量脂肪空泡,以大泡性脂滴为主,核被挤到一边,细胞边界不清,呈重度脂肪变;小柴胡汤小剂量组大鼠肝细胞脂肪变减轻,间有肝细胞变性,脂滴或空泡样变;小柴胡汤高剂量和辛伐他汀组大鼠肝细胞脂肪变程度均明显减轻。4讨论4.1脂质设计时间本实验观察到,口服脂肪乳剂1周的确可诱导出高血脂症,连续口服脂肪乳剂3周可形成高脂血症性脂肪肝模型。但此模型容易恢复,停止给予脂肪乳剂2周后模型会恢复至正常。提示该模型在持续2周或更长时间的脂肪乳剂负荷的情况下适用于药物降脂或抗肝脂肪变作用的观察。4.2对动脉联杆血脂代谢动力学的作用给予小柴胡汤可显著对抗模型大鼠血脂的升高,且随着给药时间的延长降脂作用明显,并能降低模型大鼠肝脏指数及减轻其肝脂肪变。表明小柴胡汤不仅具有降脂作用,而且具有一定的抗肝脂肪变的作用。实验中还发现,辛伐他汀降血脂和肝脂的显效作用比较快;小柴胡汤降低血清TG的作用出现较早,该方大剂量降血脂及降肝脂的作用较小剂量明显。已知血中HDL-C作为有益因子,在高血脂中有对抗动脉粥样硬化的形成作用,一些高脂血症往往伴随血HDL-C的降低。但本实验中发现,模型大鼠血TC、TG、LD