复方磺酸二胺喹恶啉钠对海兰褐蛋鸡免疫器官的影响

复方磺酸二胺喹恶啉钠对海兰褐蛋鸡免疫器官的影响

氨基丙烯酸是一种用于预防和抗凝剂的药物。这是磺胺类药物的重要成员之一，在动物临床上得到广泛使用。这是目前应用最广泛、剂量最高的药物之一。但随着抗药菌株的大量出现,价格的降低,临床用药浓度越来越高。另外,由于商品名的混乱,重复用药现象屡见不鲜,由此而引起的中毒现象已严重影响了养鸡业的健康发展。磺胺喹恶啉是一种在国内需求量较大的抗球虫兽药,具有良好的抑制球虫生长繁殖的功能,该试验将致力于正确评价不同浓度的磺胺喹恶啉对雏鸡的生长发育和对各器官组织特别是免疫器官的影响,并分析其中毒机理。1材料和方法2结果与分析2.1关于磺酰胺中毒的实验观察2.2氨基丙烯酸对鸡体重的影响2.3两组抗体水平的比较表2表明,在14日龄时,试验组(1)抗体水平最高,其次是对照组,试验组(2)的抗体水平最低,对照组和试验组(1)在0.05水平上无差异。试验组(2)显著低于对照组和试验组(1),在0.01水平上有差异。在21日龄时,对照组抗体水平最高,其次是试验组(1)。试验组(2)的抗体水平最低,对照组和试验组(1)在0.05水平上无差异;试验组(2)显著低于对照组和试验组(1),在0.05水平上有差异。这表明:高剂量、长时间应用磺胺喹恶啉钠,对雏鸡的免疫具有严重的抑制作用,显著降低新城疫抗体水平。2.4各组间肝脏指数比较表3表明,14日龄时,对照组胸腺和法氏囊指数最高,其次是试验组(1),试验组(2)最低,各组差异不明显,各组间脾脏指数基本相同。21日龄时,试验组(1)胸腺和法氏囊指数最高,其次是对照组,试验组(2)最低。对照组和试验组(1)在0.05水平上无差异;试验组(2)显著低于对照组和试验组(1),在0.01水平上有差异,而各组间脾脏指数无显著差异。这说明:高剂量磺胺喹恶啉会引起法氏囊和胸腺明显萎缩,对脾脏指数无显著影响。2.5微生物试验的结果2.6动态病理观察2.6.1出血的脏器表现试验组(2)剖检可见整个肠黏膜有散在出血点,肝肿大呈淡黄色,有的病鸡腺胃有出血斑点,肌胃角质层有大小不等的的溃疡灶,肾肿大,尿酸盐沉积不明显,可见针尖状出血,胸腺萎缩点状出血,胸部、大腿部肌肉明显出血,脾脏稍肿大,法氏囊明显萎缩,其他脏器无明显眼观病变;试验组(1)病理变化较轻,肠黏膜无散在出血点,肌胃角质层无溃疡灶,肾肿大,尿酸盐沉积不明显,脾脏轻微肿大,法氏囊及其他脏器无明显的眼观病变。2.6.2病理组织学检测(1)胸腺:对照组胸腺小叶发育良好,皮、髓质分界明显,皮质较宽,皮、髓质淋巴细胞致密。试验组(1)未见明显的病理组织学变化。试验组(2)14d时,胸腺皮质区减少,髓质区相对增多,皮质区可见淋巴细胞消失灶;21d胸腺皮质区进一步减少,仍可见淋巴细胞消失灶。皮、髓质区可见异嗜性粒细胞浸润。胸腺充血、出血。(2)法氏囊:对照组法氏囊淋巴滤泡发育良好,大小较一致。淋巴滤泡内淋巴细胞数量较多,分布密集,网状细胞增生不明显。间质清晰,未见间质组织增生。试验组(1)21d时,法氏囊淋巴滤泡大小较为一致,滤泡皮质与髓质分界明显,皮、髓质区淋巴细胞较稀疏。试验组(2)14d时,法氏囊淋巴滤泡大小较为一致,滤泡皮质与髓质分界明显,髓质区细胞分布稀疏,轻度充血、出血。21d时,淋巴滤泡萎缩,滤泡间结缔组织增生,滤泡内淋巴细胞十分稀疏,皮质很少,个别滤泡髓质区细胞消失呈空泡化。(3)脾:对照组14d时,脾脏淋巴小结及动脉周围淋巴鞘不甚明显,但有相对集中的淋巴组织。红髓区淋巴细胞较多;21d时,白髓形象明显,淋巴小结和动脉周围淋巴组织逐渐增多,淋巴细胞数量增多,红髓区淋巴细胞也相对增多。椭球分界明显,较小,未见网状细胞增生。试验组(1)未见明显的病理组织学变化。试验组(2)14d时,脾脏白髓很少,未见明显的淋巴小结和动脉周围淋巴组织。21d时,可见到较小的淋巴小结和动脉周围淋巴组织,椭球分界略显清晰。脾索内淋巴细胞较少,主要是红细胞。(4)骨髓:试验组(2)14d时,骨髓髓系细胞减少。21d时,髓系细胞减少更加明显,红系细胞的发育与对照组比较也受到一定程度的影响。(5)肝:试验组(1)21d时,可见肝细胞肿大,颗粒变性,空泡变性。试验组(2)14d时,试验组可见肝细胞肿大,颗粒变性,空泡变性,出血。21d时,可见肝细胞更加明显的颗粒变性,并有灶状坏死,坏死灶内可见异嗜性白细胞浸润。(6)肾:试验组(1)21d时,可见肾小管上皮细胞肿大,颗粒变性,空泡变性。试验组(2)14d时,可见肾小管上皮细胞颗粒变性,以集合管、远曲小管最为明显。21d时镜检可见肾小球毛细血管壁增厚,远曲小管和集合管上皮细胞病变更加明显,呈明显的空泡变性及坏死病变。(7)小肠:试验组镜检可见黏膜上皮细胞层杯状细胞增多,上皮细胞变性、坏死、脱落,固有层充血、出血。3结论3.2微生物检查3.3病理部位的检查和变化3.4病理形态的变化3.4.1细胞受损,免疫抑制骨髓是造血器官和重要的中枢免疫器官,是胸腺和法氏囊淋巴细胞的发源地,磺胺喹恶啉所导致的骨髓髓系细胞减少,造血功能受损,必然会导致机体的免疫机能受损,从而引起免疫抑制。红细胞减少与磺胺药中毒引起的贫血有关。3.4.2嗜酸性社会细胞的浸充该试验高剂量磺胺喹恶啉组,胸腺的主要病变是胸腺皮质萎缩、淋巴类细胞的减少等,这种病变随用药时间的延长逐渐加重,还可见嗜酸性粒细胞浸润。胸腺是禽类重要的中枢免疫器官,是T淋巴细胞分化的场所,它的病变必然会对机体的免疫机能,特别是细胞免疫机能造成重大影响。3.4.3非炎性退行性病变该试验高剂量磺胺喹恶啉组,法氏囊的病变主要表现为法氏囊滤泡的萎缩、皮质减少、淋巴细胞减少以及间质组织增生为主要特征的非炎性退行性病变,法氏囊是禽类另一重要的中枢免疫器官,是淋巴干细胞分化B细胞的场所,它的病变也必然会对机体的免疫机能,特别是体液免疫机能造成重大影响。3.4.4外周血免疫相关病变该试验高剂量磺胺喹恶啉组,脾脏的主要病变是淋巴细胞缺失,脾脏实质细胞进行性减少,但是脾脏指数却未见明显下降,这可能与脾脏网状细胞增生、充血等病变有关。脾脏是重要的外周免疫器官,是机体产生抗体和进行免疫反应的主要场所。因而,脾脏的淋巴细胞缺失,是导致机体体液免疫、细胞免疫和非特异性免疫功能降低,发生免疫抑制的重要原因。脾脏的淋巴细胞缺失可能是与高剂量磺胺喹恶啉引起的骨髓及中枢免疫器官病变有关。3.4.5一些内脏器官的病理形态变化雏鸡饮用高剂量磺胺喹恶啉可以引起实质器官的急性变质性损伤病变,并且这种病变还相当明显,其中肝脏和肾脏是主要的受害器官。1.1药物、制剂及仪器选择1日龄海兰褐蛋健康雏鸡90只,由滨州市某种鸡场提供;磺胺喹恶啉购自昆山制药总厂;TMP购自山东寿光制药厂,按4∶1比例混合;新城疫Lasota系低毒力活疫苗,产于齐鲁动物保健品厂。1.2日龄时系活疫苗的免疫选择的试验用雏鸡,在舍温28~34℃,相对湿度为75%~85%条件下用正常配合饲料饲养1周。7日龄时对雏鸡进行新城疫Lasota系活疫苗点眼和滴鼻免疫。将1周龄雏鸡随机分为3组,每组30只,3组鸡平行垫料隔离饲养,设1组为对照组不投放任何药物,其余2组为试验组(1)与试验组(2),分别饮用0.2%和0.5%复方磺胺喹恶啉钠盐溶液,自由采食,饲喂至21日龄。1.3扑杀鸡ndv检测(1)按上述饲养条件,3组分别进行饲养。14日龄时各组分别取15只雏鸡扑杀,观察组织器官病变;21日龄扑杀剩余试验组和对照组雏鸡,观察组织器官病变。各组雏鸡在扑杀前分别称重,并逐个采血,分离血清,通过微量法(HI试验)测定NDV抗体效价。(2)对扑杀雏鸡脾脏、胸腺和法氏囊以电子分析天平分别称重并记录重量,按如下方法计算免疫器官指数:免疫器官指数=免疫器官重量(g)/鸡活体重(kg)。内脏器官、骨髓和脑组织以10%福尔马林溶液固定,做病理组织切片,显微镜下观察组织病理变化。(3)取心包液和肝脏做常规细菌培养检查,判定细菌感染情况。1.4测试方法1.4.1加样稀释方法用2000r/min低速离心机对采取的血液离心5min,取上层血清备用。在96孔V型微量凝集板上进行,用定量稀释器加样稀释。第1孔加入1∶1280倍ND标准阳性血清50μl,依次做倍比稀释至第7孔,弃去最后50μl,第8孔不加抗原做对照。每孔加入50μl的生理盐水及50μl待检血清,每孔再加入1%的致敏红细胞悬液1滴,轻轻摇匀30min后观察,判定结果。1.4.2病理学染色及组织病理学检测取所有试验雏鸡的心、肝、脾、肺、肾、胃肠及法氏囊等内脏器官,用浓度10%福尔马林溶液固定12~24h,然后再制成5μm厚的石蜡切片,进行HE染色,生物显微镜下观察组织病理学变化。1.4.3两组主观型鸡的一般情况比较2次扑杀前各组随机挑取2只雏鸡的肝脏切面抹片进行革兰氏染色。在各组鸡剖检时以无菌操作取心包液、肝组织按常规划线法接种于普通琼脂培养基及麦糠凯琼脂培养基上,经37℃恒温培养箱培养24h,观察菌落形态。对照组雏鸡生长发育及鸡群的精神状态良好,饮食欲正常,增长速度快,个体差异小;试验组(2)生长发育不良,鸡精神沉郁,挤堆,活动少。缩颈闭眼,粪便呈白色,有的水泻,采食减少,饮水增多,有的病鸡呆立,呈昏睡状,羽毛蓬乱,体重低于正常发育鸡的水平,鸡群均匀度差,个别雏鸡虚弱站立不稳,运动失调,角弓反张。试验组(1)症状稍轻,个别雏鸡出现采食减少,饮水增多,精神沉郁,无明显水泻症状。试验组雏鸡在饮用磺胺喹恶啉钠溶液后,14及21日龄各组雏鸡体重见表1。在14日龄时,试验组(1)体重最大,其次是对照组,试验组(2)的体重最小,各组差异不显著。21日龄体重,对照组体重最大,其次是试验组(1),试验组(2)的体重最小,对照组和试验组(1)在0.05水平上有差异;试验组(2)显著低于对照组和试验组(1)(P<0.05)。这表明:高剂量、长时间应用磺胺喹恶啉钠,雏鸡的生长发育明显受阻,鸡体增重显著减慢。涂片及在普通琼脂培养基和麦康凯琼脂培养基上培养,经检查未发现大肠杆菌、白痢杆菌等病原菌。说明磺胺喹恶啉对细菌感染有很好的预防作用,试验鸡的病症与细菌感染无关。3.1抗菌药的使用较低含量(0.2%)的磺胺喹恶啉连续2周饮水,早期雏鸡尚不表现明显的临床症状,后期有轻微的中毒表现。当把剂量提高到0.5%时,则早期就表现明显的中毒症状。较低含量(0.2%)的磺胺喹恶啉连续2周饮水,对雏鸡的生长发育尚不造成明显的影响;当把剂量提高到0.5%,连用7d雏鸡体重明显低于对照组,用药至14d时体重显著低于对照组。高剂量磺胺喹恶啉对雏鸡免疫功能的影响极为明显,表现免疫器官指数及新城疫抗体水平下降,表明雏鸡免疫期间最好不用,尤其是不要高剂量使