高考二轮复习发酵工程课件(96张)新教材新高考版

第1讲发酵工程基础自查·明晰考位考点梳理·整合突破(聚焦新课标：概念3发酵工程利用微生物的特定功能规模化生产对人类有用的产品；3．1获得纯净的微生物培养物是发酵工程的基础；发酵工程为人类提供多样的生物产品)基础自查·明晰考位[纵引横连建网络]泡菜果酒果醋考点梳理·整合突破整合考点20微生物的培养技术及应用、传统发酵技术的应用和发酵工程及其应用[考点突破固考基]1．图解识记微生物的培养、分离与计数平板划线法紫外线碳源氮源高压蒸汽灭菌稀释涂布平板法2．熟记微生物分离与计数的实例土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(1)筛选菌株：利用_________筛选菌株。(2)测定微生物数量的常用方法：________和________直接计数。(3)过程：土壤取样→________→微生物的培养与观察。(4)鉴定方法：含酚红指示剂的以尿素为唯一氮源的培养基→细菌→指示剂________，则该菌能分解尿素。选择培养基活菌计数法显微镜样品稀释变红3．理清微生物培养的“4”种基本技术(1)无菌技术：主要包括________和________。(2)倒平板操作：待培养基冷却至________左右时，在__________附近倒平板。

(3)平板划线法：平板划线法是通过接种环在固体培养基表面________的操作，将聚集的菌种________分散到培养基的表面。注意划线的方法(如图)。(4)稀释涂布平板法：先将菌液进行一系列的梯度稀释然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成___________。称量灭菌50℃酒精灯火焰连续划线逐步稀释单个的菌落4．(1)理清选择培养基的“4”种制作方法(2)比较归纳统计菌落数目的“2”种方法比较项目间接计数法(稀释涂布平板法)直接计数法(显微镜直接计数法)原理样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量缺点当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落不能区分细胞死活误差比实际值偏小比实际值偏大细菌的数目还可以通过滤膜法来测定5.理清“4”种传统发酵食品的技术

项目内容

果酒和果醋的制作腐乳制作制作泡菜菌种果酒：①________果醋：②________③________④________原理(1)酵母菌在无氧条件下将葡萄糖氧化成乙醇(2)醋酸菌在有氧条件下将乙醇氧化为醋酸毛霉将蛋白质、脂肪分解成⑤________乳酸菌将糖转化为乳酸原料选择⑥________(或苹果)⑦_______大白菜、花椰菜等新鲜干净的蔬菜酵母菌醋酸菌毛霉乳酸菌小分子有机物新鲜葡萄豆腐实验流程

制作装置冲洗榨汁6.认清发酵装置——大型发酵罐的结构示意图(1)搅拌叶轮在发酵过程中的作用。①通过叶轮的搅拌作用，使培养基在发酵罐内得到充分的混合，尽可能使微生物在发酵罐里的每一处均能得到充足的________和培养基中的__________。②良好的搅拌有利于微生物发酵过程中产生的热量传递给____________。③搅拌能使发酵液充分混合，发酵罐的发酵液中的固型物质保持________状态。氧气营养物质冷却介质悬浮(2)发酵罐中发酵条件的控制。①温度的控制：发酵过程中可以通过温度传感器和控制装置进行检测和由________进、出口水流来调整。②溶解氧的控制：通过________和搅拌速度加以调节。③pH的控制：可以通过pH计检测，并由加料装置添加酸和碱进行调节，也可以在培养基中添加________等。计算机应用的发酵工程中实现了对温度、酸碱度、通气量、转速的自动记录和自动控制。冷却水通气量pH缓冲液(3)与传统的容器相比，发酵罐最明显的优势。发酵罐能实现大规模连续生产，最大限度地利用原料和设备，获得高产量和高效率。①进行严格灭菌，能使空气按需要流通，从而提供良好的发酵环境。②实施搅拌、震荡以促进微生物生长。③对温度、压力、空气流量实行自动控制。④通过各种生物传感器测定发酵罐内菌体浓度、营养成分、产品浓度等，并用电脑随时调节发酵进程。7．发酵工程的应用(1)在食品工业上的应用。①生产传统的发酵产品：例如a.霉菌(如黑曲霉)将大豆等原料中的蛋白质分解成小分子的____________，然后经淋洗、调制成酱油。b．利用酿酒酵母发酵生产各种酒类。②生产各种食品添加剂：例如a.黑曲霉的发酵制得食品酸度调节剂柠檬酸。b．谷氨酸棒状杆菌发酵得到________，经过一系列处理制成味精。③生产酶制品：例如发酵制得α­-淀粉酶、β­-淀粉酶、果胶酶、氨基肽酶和脂肪酶等。肽和氨基酸谷氨酸(2)在医药工业上的应用。例如：应用基因工程、蛋白质工程生产生长激素释放抑制激素、乙型肝炎疫苗。(3)在农牧业上的应用。①生产微生物肥料：根瘤菌肥、固氮菌肥。②生产微生物农药：利用微生物或其代谢产物来防治病虫害属于________防治。③生产微生物饲料：单细胞蛋白。(4)其他方面的应用。生物[题组集训提考能]题组一

高考分类练明考向类型1等级考真题体验1．[2021·浙江6月]下列关于原生质体和细胞计数的叙述，错误的是(

)A．测定植物原生质体的密度时，可用血细胞计数板B．红墨水不能进入活细胞，可用于检测细胞的存活状态并计数C.涂布分离法和划线分离法均能得到单菌落，都可用于细菌计数D．酵母菌在液体培养基中培养一段时间后，可用比浊计测定其密度答案：C解析：血细胞计数板法适用于较大细胞或颗粒，因此可以将原生质体制成的悬浮液滴加在血细胞计数板上，对植物原生质体进行显微计数，A正确；活细胞的质膜具有选择透性，不会被红墨水染上颜色，死细胞的质膜选择透性丧失，会被红墨水染上颜色，故可通过观察细胞内部是否变红来判断细胞活性并计数，B正确；涂布分离法可以对样液中的细菌进行计数，而划线分离法无法对样液中的细菌进行计数，C错误；酵母菌悬液的混浊度和透光度成反比、与光密度成正比，因此可用光电比色计测定细菌悬液的OD值，以OD值代表培养液中的浊度即微生物量，此方法能检测液体培养基中酵母菌的密度，D正确。2．[2021·浙江1月]用白萝卜制作泡菜的过程中，采用适当方法可缩短腌制时间。下列方法中错误的是(

)A．将白萝卜切成小块

B．向容器中通入无菌空气C．添加已经腌制过的泡菜汁D．用沸水短时处理白萝卜块答案：B解析：将白萝卜切成小块可增大与腌料的接触面积，用沸水短时处理可抑制其他杂菌的繁殖，这两种方法均可缩短腌制时间，A、D正确；制作泡菜主要利用的是乳酸菌，其在无氧条件下进行发酵，因此向容器中通入无菌空气不利于腌制，B错误；泡菜汁含有一定量的发酵菌种，添加已经腌制过的泡菜汁相当于接种了菌种，可以缩短腌制时间，C正确。3．[2020·浙江7月]下列关于微生物培养及利用的叙述，错误的是(

)A．利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物B．配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pHC．酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒D．适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化答案：A解析：利用尿素固体培养基筛选尿素分解菌时，尿素固体培养基并不直接杀死其他微生物，而是其他微生物不能以尿素为氮源，无法在尿素固体培养基中存活，A错误；不同的微生物生长所需的最适pH不同，如细菌适宜生活在中性偏碱环境，霉菌适宜生活在中性偏酸环境，因此配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pH，B正确；利用糯米酿酒需要先进行糖化，酵母菌不能直接利用淀粉进行发酵，C正确；醋化醋杆菌的发酵底物为一定浓度的酒—水混合物，适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化，D正确。4．[2021·河北卷，节选]葡萄酒生产过程中会产生大量的酿酒残渣(皮渣)。目前这些皮渣主要用作饲料或肥料，同时研究者也采取多种措施拓展其利用价值。回答下列问题：(2)为了解皮渣中微生物的数量，取10g皮渣加入90mL无菌水，混匀、静置后取上清液，用稀释涂布平板法将0.1mL稀释液接种于培养基上。104倍稀释对应的三个平板中菌落数量分别为78、91和95，则每克皮渣中微生物数量为__________个。×107解析：(2)三个平板中菌落数量平均值为(78＋91＋95)/3＝88，10g皮渣加入90mL无菌水，稀释倍数为104，接种量为0.1mL，则每克皮渣中微生物数量为×104×100÷10＝107个。(3)皮渣堆积会积累醋酸菌，可从中筛选优良菌株。制备醋酸菌初筛平板时，需要将培养基的pH调至_____性，灭菌后须在未凝固的培养基中加入无菌碳酸钙粉末、充分混匀后倒平板，加入碳酸钙的目的是_______________________________________________。培养筛选得到的醋酸菌时，在缺少糖源的液体培养基中可加入乙醇作为____。(4)皮渣堆积过程中也会积累某些兼性厌氧型乳酸菌。初筛醋酸菌时，乳酸菌有可能混入其中，且两者菌落形态相似。请设计一个简单实验，区分筛选平板上的醋酸菌和乳酸菌。(简要写出实验步骤和预期结果)酸醋酸菌产生的醋酸使碳酸钙溶解产生透明圈，从而筛选菌株碳源将筛选培养基放入无氧环境中培养，透明圈变大的为乳酸菌，透明圈大小不变的为醋酸菌解析：(3)醋酸菌适于在酸性环境中生存，因此应将培养基的pH调至酸性。由于醋酸菌产生的醋酸遇到碳酸钙会使碳酸钙溶解，因此在培养基中加入碳酸钙，优良菌株产生的醋酸较多，能使碳酸钙溶解产生较大的透明圈，从而筛选菌株。在缺少糖源的培养基中加入乙醇，可提供碳源。(4)醋酸菌为好氧菌，只能在有氧条件下生存，乳酸菌为兼性厌氧型菌，在有氧和无氧条件都可生存，故可将筛选培养基放入无氧环境中培养，透明圈变大的菌落为乳酸菌，透明圈大小不变的菌落为醋酸菌。

时期时段(天)盐度(%)温度(℃)前期0～12612中期12～16637后期16～301537两种工艺的结果比较如下图。(1)下列关于本研究的实验方法与原理的描述，错误的是(

)A．发酵开始阶段的微生物主要来源于制曲过程的积累B．蚕豆瓣可提供微生物生长繁殖所需的碳源和氮源C．温度与盐度都影响微生物的生长繁殖D．定期取样，使用平板划线法统计活细菌总数(2)下列对实验结果的分析，错误的是(

)A．新工艺中期活霉菌总数下降由温度升高导致B．新工艺后期活细菌总数下降由温度、盐度均升高导致C.新工艺中期氨基酸产生速率较前期末加快，是因为温度升高提高了蛋白酶活性D．新工艺中甜瓣子风味提升，与前、中期活微生物总数高和氨基酸终产量高均有关DB解析：(1)根据工艺流程可知，蚕豆瓣制曲形成豆瓣曲，说明发酵开始阶段的微生物主要来源于制曲过程的积累，A正确；蚕豆瓣含有丰富的糖类和蛋白质，因此蚕豆瓣可为微生物的生长繁殖提供碳源和氮源，B正确；根据图中发酵前期、中期和后期的活霉菌、活细菌总数变化以及表格数据可知，温度与盐度都影响微生物的生长繁殖，C正确；定期取样，使用稀释涂布平板法统计活细菌总数，D错误。(2)与前期相比，中期的盐度不变，温度上升，因此新工艺中期活霉菌总数下降与温度升高有关，A正确；新工艺中期、后期温度不变，盐度升高，因此新工艺后期活细菌总数下降是由盐度升高导致的，B错误；与前期末相比，新工艺中期氨基酸产生速率加快，是因为温度由12℃升高到37℃，温度升高提高了蛋白酶活性，C正确；综合分析三图中两条曲线的变化，新工艺中甜瓣子风味提升，与前、中期活微生物总数高和氨基酸终产量高均存在密切关系，D正确。类型2小高考共性借鉴6．[2020·江苏卷，31]产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：(1)常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是______(填编号)。编号①②③④物品培养基接种环培养皿涂布器灭菌方法高压蒸汽火焰灼烧干热臭氧(2)称取1.0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经________后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌__________________个。(3)为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行________育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以______________为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径________的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。④梯度稀释×105(或460000)诱变脂肪(或油脂)较大解析：(1)涂布器一般用干热灭菌法或灼烧灭菌法进行灭菌。(2)99mL无菌水中加入1.0g土壤制成的菌悬液为100mL，取稀释10倍后的菌悬液0.1mL涂布平板，平板上的平均菌落数为46，则每克土壤约含酵母菌×10×100＝×105(个)。(3)辐射可以提高基因突变的频率，利用射线辐照进行的育种为诱变育种。本实验的目的是筛选产脂肪酶的菌株，所用的培养基应该以脂肪(或油脂)为唯一碳源；最终形成的菌落直径越大，形成该菌落的菌株分解脂肪(或油脂)的能力越强，生产脂肪酶的能力也越大。(4)在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株________进行后续相关研究，理由是__________________________________________________________。B

该菌株增殖速度快，单细胞蛋白产量高；降解脂肪能力强，净化效果好解析：(4)由图可知，相对于菌株A，菌株B的增殖速度更快，降解脂肪能力更强；根据题干信息“在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白”可进一步推知菌株B处理含油废水时可得到更多的单细胞蛋白，故菌株B更适合作为后续研究的材料。7．[2019·海南卷，节选]回答下列问题。(2)某同学在通过发酵制作果酒时，发现在制作原料中添加一定量的糖，可以提高酒精度，原因是_______________________________________________________________________________________。在家庭以葡萄为原料制作葡萄酒时，可以不添加酵母菌，原因是___________________________；在制作葡萄酒的过程中，如果密封不严混入空气，发酵液会变酸，可能的原因是____________________________。

糖类是主要的能源物质，可以为酵母菌的生长、繁殖提供能源物质，还可以作为酒精发酵的原料葡萄皮上附着有野生的酵母菌醋酸菌大量增殖，进行醋酸发酵解析：(2)糖类是主要的能源物质，可以为酵母菌的生长、繁殖提供能源物质，还可以作为酒精发酵的原料。故在通过发酵制作果酒时，在制作原料中添加一定量的糖，可以提高酒精度。在家庭以葡萄为原料制作葡萄酒时，由于葡萄皮上附着有野生的酵母菌，故可以不添加酵母菌；在制作葡萄酒的过程中，如果密封不严混入空气，会造成醋酸菌大量增殖，进行醋酸发酵，发酵液会变酸。8．[2018·江苏卷，31]酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程，请回答下列问题：(1)配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的_____，及时对培养基进行分装，并进行__________灭菌。(2)取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤③中将温度约________(在25℃、50℃或80℃中选择)的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。(3)挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线。下列叙述合理的有___________。a．为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌b．划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落c．挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量d．可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，可获得甲醇高耐受株pH高压蒸汽50℃a、b、d解析：(1)配制培养基的操作步骤为称量→溶化→定容→调pH→培养基的分装→包扎→灭菌，因此微生物的培养基配制好后应该先调节pH，再分装。常见的灭菌方法有：干热灭菌、高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌。培养基适宜用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。(2)在步骤③中，待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板。(3)在划线过程中，接种针、接种环使用前都必须灭菌，以防止杂菌污染，a正确；划线时应避免划破培养基表面，否则将不能形成正常菌落，b正确；该实验的目的是获得利用工业废甲醇作为碳源的酵母菌，不需要测定酵母菌中的甲醇含量，c错误；培养基中的甲醇浓度越高，此种培养基中得以生存的酵母菌利用甲醇的能力越强，因此可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，可获得甲醇高耐受株，d正确。(4)步骤⑤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和________供应。为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释1000倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用25×16型血细胞计数板计数5个中格中的细胞数，理论上____色细胞的个数应不少于_____，才能达到每毫升3×109个活细胞的预期密度。氧气无30解析：(4)酵母菌通过有氧呼吸大量繁殖，因此为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和氧气供应；台盼蓝是大分子物质，不能将活细胞染色，再根据25×16型的血球计数板：1毫升悬液中待测标本(菌体)总数＝80小方格内菌体数/80×400×104×稀释倍数。而台盼蓝与菌液等体积加入，因此要达到每毫升3×109个活细胞的预期密度，理论上无色细胞数应该不少于(3×109)÷(1000×2×104×400÷80)＝30个。9．[2017·江苏卷，31]苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题：(1)酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作为碳源的有______________。(2)将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐______，以达到富集酚降解菌的目的。若上图平板中菌落过于密集，应进一步________，以便于菌落计数与分离。制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加________。

(3)右图为连续划线法示意图，在图中________(填图中序号)区域更易获得单菌落。蛋白胨、苯酚增加稀释涂布凝固剂③解析：(1)分析富集培养基的成分可知，培养基中蛋白胨、苯酚都是含碳有机物，可作为碳源。(2)在接种培养时，随转接次数的增加，应逐渐增加培养基中苯酚(碳源)的含量，以达到富集酚降解菌的目的。若接种培养后平板中菌落过于密集，应继续稀释涂布，以降低平板上的菌落密度，便于菌落计数与分离。稀释涂布时所用的培养基为固体培养基，制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加琼脂等物质作为凝固剂。(3)利用连续划线法接种时，越在最后划线区域，菌落的密度越稀，越容易获得单菌落，所以，图中③区域更易获得单菌落。(4)采用比色测定法(使用苯酚显色剂)检测降解后的废水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中1～5号比色管的苯酚浓度应分别为________________________。如果废水为50mg/L苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，则需将残留液稀释_______(填序号：①5

②10

③20)倍后，再进行比色。管号123456苯酚浓度(mg/L)

10、、、、③解析：(4)根据表中6号比色管中苯酚浓度为1mg/L可以推知，1～5号比色管的苯酚浓度应分别为0mg/L、0.2mg/L、0.4mg/L、0.6mg/L、0.8mg/L。根据题意，废水为50mg/L苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，要使稀释后的苯酚残留液浓度介于0～1mg/L之间，需将残留液稀释20倍左右，再进行比色。类型3原味品全国卷非选择题10．[2021·全国乙卷]工业上所说的发酵是指微生物在有氧或无氧条件下通过分解与合成代谢将某些原料物质转化为特定产品的过程。利用微生物发酵制作酱油在我国具有悠久的历史。某企业通过发酵制作酱油的流程示意图如下。回答下列问题：(1)米曲霉发酵过程中，加入大豆、小麦和麦麸可以为米曲霉的生长提供营养物质，大豆中的_______可为米曲霉的生长提供氮源，小麦中的淀粉可为米曲霉的生长提供______。(2)米曲霉发酵过程的主要目的是使米曲霉充分生长繁殖，大量分泌制作酱油过程所需的酶类，这些酶中的________、________能分别将发酵池中的蛋白质和脂肪分解成易于吸收、风味独特的成分，如将蛋白质分解为小分子的肽和________。米曲霉发酵过程需要提供营养物质，通入空气并搅拌，由此可以判断米曲霉属于________(填“自养厌氧”“异养厌氧”或“异养好氧”)微生物。(3)在发酵池发酵阶段添加的乳酸菌属于________(填“真核生物”或“原核生物”)；添加的酵母菌在无氧条件下分解葡萄糖的产物是________。在该阶段抑制杂菌污染和繁殖是保证酱油质量的重要因素，据图分析该阶段中可以抑制杂菌生长的物质是_________________(答出1点即可)。蛋白质碳源蛋白酶脂肪酶氨基酸

异养好氧原核生物CO2和酒精酒精(乳酸、食盐)解析：(1)大豆的主要成分为蛋白质，可为米曲霉的生长提供氮源；淀粉属于多糖，小麦中的淀粉可为米曲霉的生长提供碳源。(2)蛋白酶可以将蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可以将脂肪水解为甘油和脂肪酸。由题干信息可知，米曲霉发酵过程需要提供营养物质、通入空气并搅拌，可推断出米曲霉属于异养好氧微生物。(3)乳酸菌为原核生物。酵母菌在无氧条件下通过无氧呼吸将葡萄糖分解成CO2和酒精。在发酵池发酵阶段添加的酵母菌和乳酸菌通过无氧呼吸产生的酒精、乳酸可以抑制杂菌的生长，加入的食盐也可抑制杂菌生长。11．[2020·全国卷Ⅰ，37]某种物质S(一种含有C、H、N的有机物)难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解S。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和S，乙的组分为无机盐、水、S和Y。回答下列问题：(1)实验时，盛有水或培养基的摇瓶通常采用___________的方法进行灭菌。乙培养基中的Y物质是______。甲、乙培养基均属于______培养基。(2)实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2×107个/mL，若要在每个平板上涂布100μL稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释_____倍。(3)在步骤⑤的筛选过程中，发现当培养基中的S超过某一浓度时，某菌株对S的降解量反而下降，其原因可能是_______________________________(答出1点即可)。(4)若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数，请写出主要实验步骤：____________________________________________________________。(5)上述实验中，甲、乙两种培养基所含有的组分虽然不同，但都能为细菌的生长提供4类营养物质，即_________________________。高压蒸汽灭菌琼脂选择104

S的浓度超过某一值时会抑制菌株的生长取淤泥加入无菌水中，涂布(或稀释涂布)到乙培养基上，培养后计数水、碳源、氮源和无机盐解析：(1)实验时，盛有水或培养基的摇瓶常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。题图中摇瓶M内装有液体培养基甲，培养皿中的培养基乙为固体培养基，相比甲需添加凝固剂Y琼脂。依据题干信息，甲、乙培养基均为以S(一种含有C、H、N的有机物)为唯一氮源和碳源的培养基，可抑制或阻止其他微生物繁殖，仅使能够降解和利用S的菌株生长和繁殖，故属于选择培养基。(2)若使平板上长出的菌落数不超过200个，则接种液中的菌体浓度至多为200个/0.1mL＝2×103个/mL，已知摇瓶M中的细菌细胞数为2×107个/mL，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释104倍。(3)S作为一种营养物质，在培养基中浓度过高，可导致培养液渗透压升高，细菌细胞渗透失水，使其代谢速率下降；另一方面S作为污染物，其浓度过高可能抑制菌体生长、代谢和繁殖。(4)若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数，需进行的实验步骤如下：称取一定质量(10g)的淤泥溶于一定体积的(90mL)无菌水中，制备土壤浸出液，经梯度稀释(对于细菌，一般选用104、105、106倍的稀释液)后，采用稀释涂布平板法接种于以S为唯一碳源和氮源的固体培养基(即乙培养基)中，每个稀释倍数下设置三组重复实验；在适宜条件下培养，待长出菌落且菌落数目达到稳定后，选取菌落数在30～300的平板进行计数，统计并计算平均值。(5)在甲、乙两种培养基中，S既作为碳源，又作为氮源，同时培养基中还含有水、无机盐等营养物质。12．[2019·全国卷Ⅰ，37]已知一种有机物X(仅含有C、H两种元素)不易降解，会造成环境污染。某小组用三种培养基筛选土壤中能高效降解X的细菌(目标菌)。Ⅰ号培养基：在牛肉膏蛋白胨培养基中加入X(5g/L)。Ⅱ号培养基：氯化钠(5g/L)，硝酸铵(3g/L)，其他无机盐(适量)，X(15g/L)。Ⅲ号培养基：氯化钠(5g/L)，硝酸铵(3g/L)，其他无机盐(适量)，X(45g/L)。回答下列问题。(1)在Ⅰ号培养基中，为微生物提供氮源的是______________。Ⅱ、Ⅲ号培养基中为微生物提供碳源的有机物是____。(2)若将土壤悬浮液接种在Ⅱ号液体培养基中，培养一段时间后，不能降解X的细菌比例会______，其原因是____________________________________________________。(3)Ⅱ号培养基加入琼脂后可以制成固体培养基，若要以该固体培养基培养目标菌并对菌落进行计数，接种时，应采用的方法是________________。(4)假设从Ⅲ号培养基中得到了能高效降解X的细菌，且该菌能将X代谢为丙酮酸，则在有氧条件下，丙酮酸可为该菌的生长提供______和__________________。牛肉膏、蛋白胨X下降不能降解X的细菌因缺乏碳源不能增殖，而能降解X的细菌能够增殖稀释涂布平板法能量合成其他物质的原料解析：(1)在Ⅰ号培养基中，牛肉膏、蛋白胨可以为微生物提供氮源，Ⅱ、Ⅲ号培养基中为微生物提供碳源的是有机物X。(2)Ⅱ号培养基中，碳源只有X，不能降解X的细菌会因缺乏碳源而不能增殖，使该类细菌比例降低。(3)利用固体培养基对菌落进行计数时，需采用稀释涂布平板法进行接种。(4)在有氧条件下，丙酮酸可被分解为CO2和H2O且释放能量，为该菌的生长提供能量和合成其他物质的原料。13．[2019·全国卷Ⅱ，37]物质W是一种含氮有机物，会污染土壤。W在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌(目标菌)。回答下列问题。(1)要从土壤中分离目标菌，所用选择培养基中的氮源应该是_____。(2)在从土壤中分离目标菌的过程中，发现培养基上甲、乙两种细菌都能生长并形成菌落(如图所示)。如果要得到目标菌，应该选择______菌落进一步纯化，选择的依据是_______________________________________。W乙乙菌落周围出现透明圈，说明乙菌能降解W解析：(1)要从土壤中分离能降解W的细菌，培养基中应以W为唯一氮源。(2)乙菌落周围出现透明圈，说明乙菌能降解W。(3)土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源，请简要写出实验思路、预期结果和结论，即_________________________________________________________________________________________________________。(4)该小组将人工合成的一段DNA转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降解W的酶(酶E)。为了比较酶E与天然酶降解W能力的差异，该小组拟进行如下实验，请完善相关内容。①在含有一定浓度W的固体培养基上，A处滴加含有酶E的缓冲液，B处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲液，C处滴加_________，三处滴加量相同。②一段时间后，测量透明圈的直径。若C处没有出现透明圈，说明__________________；若A、B处形成的透明圈直径大小相近，说明_________________________________。

将甲、乙菌分别接种在无氮源培养基上，若细菌能生长，则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源缓冲液缓冲液不能降解W酶E与天然酶降解W的能力相近解析：(3)要判断甲、乙能否利用空气中的氮气作为氮源，应将甲、乙菌分别接种在无氮源的培养基上，观察细菌能否生长，若细菌能生长，则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源，否则不能。(4)①实验设计应遵循单一变量原则，C处应滴加等量不含酶的缓冲液。②C处只滴加等量缓冲液，若C处没有出现透明圈，说明缓冲液不能降解W，若A、B处形成的透明圈直径大小相近，说明酶E与天然酶降解W的能力相近。14．[2019·全国卷Ⅲ，37]回答下列与细菌培养相关的问题。(1)在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是__________(填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH，其原因是_______________________________。硝化细菌在没有碳源的培养基上_____(填“能够”或“不能”)生长，原因是___________________________________。(2)用平板培养细菌时一般需要将平板______(填“倒置”或“正置”)。(3)单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物，原因是_______________________________________________________。(4)有些使用后的培养基在丢弃前需要经过_______处理，这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。蛋白胨不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同能够硝化细菌可以利用空气中的CO2作为碳源倒置在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征灭菌解析：(1)细菌培养时需要碳源、氮源、水和无机盐等，蛋白胨能同时提供碳源、氮源，葡萄糖提供碳源，NaNO3不能提供碳源，可提供无机氮源。不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同，故制备培养基时需要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH。硝化细菌是自养型细菌，可以利用空气中的CO2作为碳源，故硝化细菌可在没有碳源的培养基上生长。(2)为防止培养皿盖的冷凝水落入培养基造成污染，用平板培养细菌时一般需将平板倒置。(3)在一定培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征，如特定的形状、大小、颜色、隆起程度等，所以依据菌落的特征，可以初步区分不同种的微生物。(4)为防止污染环境，使用后的培养基丢弃前要都经过灭菌处理，以便杀死丢弃物中所有的微生物。15．[2018·全国卷Ⅰ，37]将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培养基。回答下列问题：(1)M培养基若用于真菌的筛选，则培养基中应加入链霉素以抑制______的生长，加入了链霉素的培养基属于_____培养基。(2)M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除氮源外还有____________(答出两点即可)。氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有____________(答出两点即可)。细菌选择碳源、无机盐蛋白质、核酸解析：(1)M培养基若用于真菌的筛选，要求M培养基能满足真菌的生长，且能抑制其他微生物的生长，则培养基中应加入链霉素以抑制细菌的生长，加入了链霉素的培养基属于选择培养基。(2)微生物生长需要多种营养物质，除氮源外，还需要碳源、无机盐、水以及特殊营养物质等。氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有蛋白质和核酸。(3)若在M培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是______，该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是_____________________________________________________。(4)甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量，在同一稀释倍数下得到以下结果：甲同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是110、140和149，取平均值133；乙同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是27、169和176，取平均值124。有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其原因是________________________________________________________。碘液淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈乙同学的结果中，1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差解析：(3)筛选产淀粉酶的微生物，依据淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈，再根据透明圈，来筛选产淀粉酶的微生物。(4)乙同学的结果不合理，因为其中1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差，不能简单的用其平均数作为最终结果。16．[2018·全国卷Ⅱ，37]在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题：(1)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具______(填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是______________________________________。(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能________________。在照射前，适量喷洒________，可强化消毒效果。可以在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少破坏DNA结构消毒液解析：(1)能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等可以放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。(2)煮沸消毒法即在100℃煮沸5～6min可以杀死微生物细胞和一部分芽孢；巴氏消毒法即在70～75℃煮30min或在80℃煮15min，可以杀死微生物，并且保证营养物质不被破坏。因此，与煮沸消毒法相比，牛奶消毒常采用的巴氏消毒法或高温瞬时消毒法的优点是在达到消毒的同时，营养物质损失较少。(3)因紫外线能破坏DNA结构，所以密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒。在照射前，适量喷洒消毒液，可强化消毒效果。(4)水厂供应的自来水通常是经过______(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是____________________。氯气未将锅内冷空气排尽解析：(4)通常乙醇消毒是使用75%的酒精，有气味，影响水质，不适宜消毒自来水；高锰酸钾本身有颜色，消毒后溶液呈紫红色，无法使用；因此水厂供应的自来水通常是经过氯气消毒的。(5)采用高压蒸汽灭菌时，锅内的水加热煮沸，将其中原有的冷空气彻底排除后才能将锅密闭。如果未将锅内冷空气排尽，则会出现压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度的现象。类型4整体对比历年同类题，找共性和趋势17．[全国卷Ⅱ，39]苹果醋是以苹果汁为原料经发酵而成的，回答下列问题：(1)酵母菌的呼吸代谢途径如图所示。图中过程①和②是苹果醋生产的第一阶段，在酵母菌细胞的__________中进行，其产物乙醇与__________试剂反应呈现灰绿色，这一反应可用于乙醇的检验；过程③在酵母菌细胞的_______中进行。与无氧条件相比，在有氧条件下，酵母菌的增殖速度____。(2)第二阶段是在醋酸杆菌的作用下将第一阶段产生的乙醇转变为醋酸的过程，根据醋酸杆菌的呼吸作用类型，该过程需要在______条件下才能完成。(3)在生产过程中，第一阶段和第二阶段的发酵温度不同，第一阶段的温度_____(填“低于”或“高于”)第二阶段的。(4)醋酸杆菌属于____核生物，其细胞结构中______(填“含有”或“不含有”)线粒体。细胞质基质重铬酸钾线粒体快有氧低于原不含有解析：(1)图示中的过程①和②分别表示无氧呼吸的第一、第二阶段，其场所均为细胞质基质；橙色的重铬酸钾溶液，在酸性条件下与乙醇(酒精)发生化学反应，变成灰绿色。过程③表示有氧呼吸的第二、三阶段，其场所分别为线粒体基质和线粒体内膜，即在酵母菌细胞的线粒体中进行。与无氧条件相比，有氧条件下酵母菌的增殖速度快。(2)醋酸杆菌是一种好氧菌，在氧气充足的条件下才能进行旺盛的生命活动，因此将第一阶段产生的乙醇转变为醋酸的过程，需要在有氧条件下才能完成。(3)第一阶段即果酒的制作，所控制的温度范围是18～25℃，第二阶段即果醋的制作，所控制的温度范围是30～35℃，所以第一阶段的温度低于第二阶段的温度。(4)醋酸杆菌属于原核生物，其细胞结构中不含线粒体等复杂的细胞器。18．[全国卷Ⅲ，39]某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题：(1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用_______对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由是_____________________________________________。(2)推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有____________和________________。分离纯化时应挑选出____________的菌落作为候选菌。(3)乳酸菌在－20℃长期保存时，菌液中常需要加入一定量的__________(填“蒸馏水”、“甘油”或“碳酸钙”)。无菌水

泡菜滤液中菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落鉴别乳酸菌中和产生的乳酸(或酸)具有透明圈甘油解析：(1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释；进行梯度稀释的理由是在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的乳酸菌将被分散成单个细胞，通过培养，从而能在培养基表面形成单菌落。若直接培养，由于泡菜滤液中菌的浓度高，则很难分离得到单菌落。(2)由题意可知，分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。由此可推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有中和乳酸菌代谢过程中产生的乳酸和鉴别乳酸菌；根据产酸菌在含CaCO3的培养基上产生透明圈的原理，分离纯化时应挑选出具有透明圈的菌落作为候选菌，然后用平板划线法进一步分离纯化。(3)对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。即将1mL培养的菌种转移到已灭菌的盛有1mL甘油的甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在－20℃的冷冻箱中保存。所以乳酸菌在－20℃长期保存时，菌液中需要加入一定量的甘油。答案：AC解析：甲培养皿的菌落均匀分布，接种方法应为稀释涂布平板法，A正确；甲、丙培养基菌落数目多，包括野生型酵母菌菌株和某种营养缺陷型酵母菌菌株，乙培养皿菌株是某种营养缺陷型酵母菌菌株，乙培养皿的培养基是基本培养基，甲和丙是加入了同种营养成分的培养基，B错误；由于基因突变具有不定向性，接种到甲培养皿的酵母菌可能还有其他营养缺陷型，且有些菌落不一定由一个酵母菌形成，所以，甲培养皿中菌落数有可能比接种的酵母菌数少，C正确；乙培养皿的培养基是基本培养基，形成的菌落只可能是野生型菌落，D错误。成分含量蛋白胨10.0g乳糖5.0gNaCl5.0g琼脂12.0g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL(1)该培养基中蛋白胨为微生物生长提供了____________和维生素。(2)分离大肠杆菌时，常用的接种方法有_____________________________。(3)培养大肠杆菌时，通常需要检测培养基是否被污染，对于固体培养基应采用的检测方法是_____________________________________。对已使用过的培养基及其培养物必须经过________处理后才能丢弃，以防止培养物污染环境。(4)为检测水体中大肠杆菌数量，可在上表中的培养基中添加伊红美蓝染料，将水样适当稀释后，取样涂布在该培养基中，适宜条件下培养后选择颜色为黑色的菌落进行计数。该方法的原理是①_______________________________________________________；②_______________________________________________________________________________________。碳源、氮源平板划线法和稀释涂布平板法将未接种的培养基在相同条件下进行培养灭菌大肠杆菌代谢产物能与染料伊红美蓝反应，使菌落呈黑色当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌解析：(1)培养基中的蛋白胨可以为微生物的生长繁殖提供碳源、氮源和维生素。(2)常见的微生物的接种方法有稀释涂布平板法和平板划线法。(3)培养微生物时，在接种前通常需要检测培养基是否被污染，对于固体培养基应将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。对已使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散，造成环境污染。(4)根据题意可知，“大肠杆菌代谢产物能与染料伊红美蓝反应，使菌落呈黑色”，因此为检测严重污染水体中大肠杆菌数量，将水样适当稀释后，取样涂布在上述平板培养基中，应选择颜色为黑色的菌落进行计数，该方法是通过统计平板上的菌落数来推测样品中的活菌数，其原理是当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。3．[2021·广东梅州市高三一模]随着生物科学的发展，微生物的应用范围在生活中越来越广泛。例如：微生物在酒类酿造、食品发酵、药物研发和污水处理等方面都扮演着重要角色。请回答下列关于微生物的问题：(1)培养微生物的培养基的营养成分一般都有水、无机盐、__________等。

此外，还要满足微生物生长对pH、温度、湿度、氧气及特殊营养物质的需求。灭菌后的培养基在平板倒好后，需要随机选取若干个平板先行培养一段时间

，这样做的目的是_____________________________________。(2)滤膜法常用来检测饮用水中的大肠杆菌是否超标，这种测定方法的主要原理是大肠杆菌的代谢产物能与培养基中添加的伊红－美蓝反应，使菌落颜色呈_____。若要长时间保藏大肠杆菌，可采用的方法是____________。(3)果醋已经成为我们日常生活中饭桌上的常用饮料，具有一定的保健功能。果醋在发酵过程中利用的菌种主要是________，其能产生多种酶，通过________________________技术将其制作成商品重复使用。碳源、氮源检验培养基灭菌是否合格(无菌检查)黑色甘油管藏法醋酸菌固定化酶(或固定化细胞)解析：(1)培养微生物的培养基的营养成分一般都有水、无机盐、碳源、氮源等。此外，还要满足微生物生长对pH、温度、湿度、氧气及特殊营养物质的需求。灭菌后的培养基在平板倒好后，为了检验培养基灭菌是否合格(无菌检查)，通常需要随机选取若干个平板先行培养一段时间，观察是否有菌落出现。(2)滤膜法常用来检测饮用水中的大肠杆菌是否超标，该测定方法依据的原理是大肠杆菌的代谢产物能与培养基中添加的伊红－美蓝反应，使菌落颜色呈现黑色，从而便于辨别计数。若要长时间保藏大肠杆菌，可采用的方法是甘油管藏法。(3)果醋已经成为我们日常生活中饭桌上的常用饮料，具有一定的保健功能。果醋制作利用的菌种为醋酸菌，醋酸菌为需氧型微生物，在有氧条件下能将乙醇氧化成乙醛，再进一步氧化成乙酸，在糖源充足的情况下，醋酸菌能将糖直接氧化为乙酸。醋酸菌产生的多种酶可通过固定化酶(或固定化细胞)技术将其制作成商品重复使用，固定化酶的优点是既能重复使用，又能与产品分离，降低生产成本。4．[2021·重庆高三三模]随着人们生活质量的提高，餐饮含油脂废水的排放量大量增加，合理处置油脂废水也成为新的课题。已知芽孢杆菌中有多种分解油脂并产酸的菌种，科研人员欲采用下列流程筛选出能高效分解油脂的微生物。菌种取样→分离培养→菌株的筛选→形态特征观察和生理生化反应鉴定，请回答下列问题：(1)选取饭店附近排污渠的含油脂废水为样本，采样约0.2mL，立即装于试管内，此试管使用前需要经过_______处理。(2)样品分离培养前，一般需要将菌液进行______处理，然后吸取0.2mL菌液涂布到营养琼脂培养基平板上，置于37℃恒温培养箱内培养24h，记录菌落总数。将分离出的菌株按照菌落__________________________(至少答3点)等表观特征初步分类。灭菌稀释形状、大小、隆起程度和颜色解析：(1)微生物培养过程中需要无菌操作，防止杂菌污染，所以试管使用前需要经过灭菌处理。(2)菌液一般需要先经过稀释处理，再进行涂布。不同微生物菌落的形状、大小、隆起程度和颜色不同，所以可以根据菌落的特征初步分类。(3)上述步骤筛选的菌株分别接种到含“花生油”的琼脂培养基中，37℃恒温培养箱中培养24h，筛选出油脂降解菌，培养基中“花生油”主要为菌种繁殖提供____________。在该培养基还需加入中性红染料(中性红为脂溶性染料，遇酸为红色，遇碱为黄色)，挑选菌株要挑选显_______降解圈的菌株，并且选颜色较____(填“深”或“浅”)的为宜。(4)实际操作中，由于油脂易聚集成液滴，常在培养基中加入2～3滴乳化剂使油脂分散均匀，鉴定效果更好，试分析原因__________________________________________________________________________________________________。碳源和能源红色深

油脂乳化后均匀分散在培养基表面，分解油脂的微生物产生的降解圈更为明显，便于快速分离和鉴定解析：(3)花生油的主要成分是脂肪，所以可为菌种提供碳源和能源。培养基中的中性红染料遇酸变为红色，而脂肪可以被分解为甘油和脂肪酸，使培养基呈酸性，所以可选择红色降解圈的菌株，并且颜色较深的脂肪酸含量越高，说明油脂降解菌的分解能力越强。(4)油脂乳化后均匀分散在培养基表面，分解油脂的微生物产生的降解圈更为明显，便于快速分离和鉴定，所以常在培养基中加入2～3滴乳化剂使油脂分散均匀，鉴定效果更好。5．[2021·江苏连云港市高三模拟]蚯蚓粪中富含细菌、放线菌和真菌，这些微生物不仅使复杂物质矿化为植物易于吸收的有效物质，而且还合成一系列有生物活性的物质，如糖、氨基酸、维生素等，这些物质的产生使蚓粪具有许多特殊性质，成为最有效而无害土壤。某研究小组以新鲜蚯蚓粪为材料，从中筛选出除氨菌。回答下列有关问题：(1)蚯蚓与体内的微生物可能有_______________关系。分离除氨菌首先进行富集培养，先将10g新鲜的蚯蚓粪加入到某液体培养基中，振荡30min后在________中培养。该培养基中的(NH4)2SO4为唯一氮源，该培养基从功能上应属于_____培养基。进行富集培养的目的是____________________。(2)将得到的富集培养液进行如图所示操作，其中进行步骤⑤和⑥时所用培养基的成分与富集培养基的差异是____________________。培养基在配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是________________；实验室中对培养基进行灭菌的方法是______________。用上述方法对培养皿进行灭菌之前需要______________________________。寄生、互利共生恒温箱选择增加除氨菌的浓度(数量)添加了一定量的琼脂先调节pH后灭菌高压蒸汽灭菌法(用报纸、牛皮纸和棉线)捆扎解析：(1)蚯蚓与体内的微生物可能有寄生、互利共生关系。本实验的目的是筛选除氨菌，因此培养基中应以(NH4)2SO4为唯一氮源，从功能上讲该培养基属于选择培养基，在恒温箱中通过富集培养能增加培养液中除氨菌的浓度或数量。(2)图中步骤⑤和⑥中所用的培养基属于固体培养基，需要添加一定量的琼脂，而富集培养用的是液体培养基，不加琼脂。培养基在配制和灭菌时需要先调pH再进行灭菌。常用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。(3)若用A对应的接种方法培养了3个培养皿，菌落数分别为163个、158个、159个，若与其对照的________________________________，则可以推测富集培养后的菌液中每毫升含除氨菌数为__________个，否则需要重新实验。(4)得到的菌种可以接种在___________上进行临时保存。还可加入甘油或石蜡，并在低温下长期保存。后者的优点是__________________