蛴螬化学成分研究

JOURNALOFDALI

第11卷第9期2012年9月Vol.11No.9Sep. 林1，2，李小年1，魏暑飔1，3，晏永明1，钟惠民2，程永现（1.中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室，昆 2.青岛科技大学化学与分子工程学院，山东青岛266042；3.河南中医学院药学院，郑州［］HolotrichiadiomphaliaBates（RP18反相硅胶、SephadexLH20、MCIgelCHP20P、D101大孔吸附树脂柱色谱及高效液相色谱），结合谱学方法（NMR、MS、ORD）分离鉴定蛴螬的化学成分。结果：从蛴螬的乙醇提取物中分离得到10个化合物，其结构经波谱鉴定为反1，2环己二醇（1）基苯甲醇（8）（9）oxiran2ylmethano（l10）1~10均为首次从该种虫类中药中分离得到。［关键词］虫类中药；蛴螬；化学成分；yangjinhualineChemicalConstituentsofHolotrichiadiomphalia（1.StateKeyLaboratoryofPhytochemistryandPlantResourcesinWestChina,KunmingInstituteofBotany,ChineseAcademyofAbstractObjective:ToinvestigatethechemicalconstituentsofmedicinalinsectsofHolotrichiadiomphaliaBates.Methods:Variouschromatographymaterialsandtechnology（includingsilicagel,RP18reversephasesilicagel,SephadexLH20,MCIgelglycerin1monooleate（2）,salicin（3）,4methoxyphenyllaceticacid（4）,glycerin1benzoate（5）,yangjinhualineA（6）,（±）dimerthyl2（（phenylmethoxy）methoxy）pentanedioate（7）,salicylalcohol（8）,（phydroxyphenyl）aceticacid（9）,andoxiran2;蛴螬为节肢动物门昆虫纲鞘翅目金龟子科昆虫朝鲜黑金龟子HolotrichiadiomphaliaBates等同属近缘昆虫的干燥幼体〔1〕，具有破血逐淤，明目退翳的功效，内服可用于妇女经闭、癥瘕，外用可治疗丹毒、痈疽、痔漏、跌打损伤等〔2。基于蛴螬的明目退翳功效，现代临床上将其制成滴眼液用于治疗白内障、眼角膜翳等效果显著3。药理研究证明蛴螬具有抗肿瘤、保肝、抗菌等作用〔4〕，如蛴螬石油醚提取物可诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡5，有研究表明蛴螬的保肝作用甚至胜过水飞蓟素6蛴螬的化学成分研究较少，也比较薄弱，报道称蛴螬含有脂肪酸类〔7-8、氨基酸、多肽或蛋白质、糖类、生物碱、总第105期医 大理学院学报有机酸盐、甾体化合物等〔9〕几乎在每个昆虫中均存在。GC-MS分析表明蛴螬的石油醚提取物含有反油酸、十六酸，硬脂酸等10。国外学者报道蛴螬含有两种酚氧化酶原（Propo-Ⅰ和Propo-Ⅱ）（PPAF-Ⅰ、疗效，目前的化学研究还远远不能揭示其药效物质基础。我们对该虫类中药进行了研究，从其乙醇提取物中分离得到10个化合物，经波谱学方法鉴定其结构为反-1，2-环己二醇（1）-1-单油酸酯（2）（3），对甲氧基苯乙酸（4），苯甲酸甘油-1-（5）YangjinhualineA（6）（±）2-羟基戊二酸二甲酯（7）（8）（9）

LH-202（16g）。76g经D101大孔吸附树脂柱层析，用乙醇/水梯度洗脱，分为4（-1-n-4）。经过反复硅胶柱层析、反相柱层析、MCIgelCHP20P柱层析和SephadexLH-20柱层析，从n-2分得化合物3（2g）从n-3分得化合物（30m）和（16m）。浓缩水相部分得浸膏740g，取其一半370g进行分离，经硅胶柱层析（氯仿∶甲醇15∶0~4∶1梯度洗脱），分为3部分EQ-1-EQ-3，经过反复MCIgelCHP20P柱层析、SephadexLH-20柱层析、反相柱层析及HLC纯化，从EQ1部分得到化合物（7m）和（1），从EQ2部分得到化合物8（9mg）3部分得到化合物（3mg）（2）。Oxiran-2-ylmethano（l10），以上化合物均为首次 1核磁共振波谱用BrukerAM-400、BrukerDRX-500和BrukerAvance-600核磁共振仪测定，TMS作为内标；ESIMS用APIQSTAR飞行时间质谱仪测定；比旋光度用HoribaSEPA-300旋光仪测定；高效液相色谱仪型号为Agilent1200；薄层层析硅胶GF254和柱层析硅胶（200-300目）均为青岛海洋化工厂产品；大孔吸附树脂为天津海光化工有限公司D101树脂；SephadexLH-20为Pharmacia公司产品；反相硅胶RP-18和MCIgelCHP20P分别为Daiso公司和三菱2蛴螬（18kg）2009年7月购自安徽省亳州药材交易中心，经湖南中医药大学中药鉴定教研室周小江（Holotrichia醇冷浸提取3次，每次3d，减压回收溶剂得浸膏255g经硅胶柱层析（600g，氯仿∶甲醇10∶0~1∶1）4部分EA-1-EA-4。经过反复硅胶柱层析、反相柱层析和SephadexLH-20柱层MCIgelCHP20P柱层析、反相柱层析和Sephadex2

反-1，2-环己二醇（1）：白色固体；1HNMR（500MHz，CD3OD）：δH3.30（2H，m，H-1，2），1.91（2H，m，H-3a，6a），1.68（2H，m，H-3b，6b），1.27（4H，m，H-4，5）13CNMR（125MHz，CD3OD）δC76.1（d，C1，2），34.0（t，C-3，6），25.3（t，C-4，5）。以上数据与文献数值相符〔11〕。甘油醇-1-单油酸酯（2）：白色固体；C21H40O4，ESI+MSm/z：357M+H〕+，379M+Na〕+；1HNMR（400MHz，CD3OD）：δH5.27（2H，m，H-9，10），4.07（1H，dd，J=11.4，4.3Hz，H-1′），3.98（1H，dd，J=11.4，6.3Hz，H-1′），3.76（1H，m，H-3′），3.59（1H，m，H-2′）3.47（1H，m，H-3′），2.28（2H，t，J=7.4Hz，H-2）1.95（4H，m，H-8，11），1.54（2H，m，H-3），1.23（24H，t，J=6.8Hz，H-18）；13CNMR（100MHz，CD3OD）71.1（d，C-2′），66.5（d，C-1′），64.0（d，C-3′）30.0，28.1，26.0，23.8，14.5。以上数值与文献数值相符〔12。（3）1HNMR（500MHz，C5D5N）δH7.76（1H，d，J7.3Hz，H-6）7.63（1H，d，J7.3Hz，H-3）7.25（1H，t，J=7.3Hz，H-4）7.10（1H，t，J=7.3Hz，H-5），5.33（1H，d，J=总第105 第11Hz，H-7a），5.10（1H，d，J=13.2Hz，H-7b）（1H，d，J=5.4Hz，H-1′），4.54（1H，d，J=12.2Hz，H-6′a），4.40（1H，dd，J=12.2Hz，4.9Hz，H-6′b），3.5-4.3（4H，m，H-2′，3′，4′，5′）；13CNMR（125MHz，6），128.7（d，C-4），122.9（d，C-5），116.5（d，C-3）103.7（d，C-1′），79.0（d，C-3′），78.6（d，C-5′）（d，C-2′），71.3（d，C-4′），62.4（t，C-6′），60.5（t，C-7）〔13。对甲氧基苯乙酸（4）：白色固体；1HNMR（400MHz，CD3OD）δH7.08（2H，dd，J=8.5，1.5Hz，H-3′，5′）6.74（2H，dd，J=8.5，1.5Hz，H2，6′）3.67（3H，s，OCH3），3.54（2H，s，H-2）；13CNMR（100MHz，CD3OD）：δC174.6（s，C-1），157.6（s，C-4′），131.3（d，C-2′，6′），126.3（s，C-1′），116.2（d，C-3′，5′），50.4（q，OCH3），40.9（t，C-2）。以上数值与文献数值相符〔14。苯甲酸甘油-1-（5）：白色粉末；1HNMR（400MHz，CDCl3）δH8.04（2H，d，J=7.6Hz，H-3′，7′）7.58（1H，t，J=7.6Hz，H-5′），7.45（2H，d，J=7.6Hz，H-4′，6′），4.42（2H，m，H-3），4.07（1H，m，H-2），3.77（1H，dd，J=11.5，3.4Hz，H-1a），3.68（1H，dd，J=8.5，5.7Hz，H-1b）；13CNMR（100MHz，CDCl3）：δC167.0（s，C-1′），133.4（d，C-5′），129.7（d，C-2′，7′），129.5（s，C-2′），128.4（d，C-4′，6′），70.3（d，C-2），65.7（t，C-1），63.3（t，C-3）。以上数值与文献数值相符〔15。YangjinhualineA（6）：黄色粉末；1HNMR（600MHz，CD3OD）δH7.58（2H，d，J=8.2Hz，H-2′，6′）2.10（3H，s，H-6）；13CNMR（150MHz，CD3OD）：δC175.4（s，C-2），160.7（s，C-4′），156.8（s，C-4），116.7（d，C-3′，5′），99.1（d，C-5），10.5（q，C-6）。以上数值与文献数值相符〔16。0（c0.77，CHCl3）；1HNMR（400MHz，CDCl3）4.24（1H，dd，J=7.2，3.8Hz，H-2），3.80（

OCH31）3.68（3H，s，OCH35）2.95（1H，brs，OHm，H-3b）13CNMR（100MHz，CDCl3）δC175.0（s，C-1），173.6（s，C-5），69.4（d，C-2），52.7（q，OCH3-上NMR数值与文献数值相符〔17，但比旋光度为零，即该物质为外消旋体。邻羟基苯甲醇（8）：无色油状物；1HNMR（400MHz，CD3OD）δH7.49（1H，d，J=8.0Hz，H-6）7.44（1H，d，J=8.0Hz，H-3），7.29（1H，t，J=8.0Hz，H-4），7.22（1H，d，J=8.0Hz，H-5），3.33（2H，brs，H-134.2（s，C-1），128.2（d，C-4），127.7（d，C-6）文献数值相符〔18〕。对羟基苯乙酸（9）：无色针晶；1HNMR（600MHz，D2O）δH7.01（2H，d，J=8.5Hz，H-2′，6′）3′，5′）40.7（t，C-2）18。Oxiran-2-ylmethanol（10）：无色油状物；1HNMR（600MHz，D2O）δH3.60（1H，m，H2）3.47（2H，dd，J=11.8，4.4Hz，H-1），3.38（2H，dd，J11.8，6.5Hz，H-3）以上数值与文献数值相符〔18［参考文献1〕国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部〔S〕.北京：中国医药科技出版社，2010.〔2〕杨仓良，齐杰英.动物本草〔M〕.北京：中医古籍出版社，〔3〕阳长明，侯世祥，罗杰英，等.蛴螬滴眼液的工艺研究〔J〕中成药，2001，23（4）235〔4〕董庆峰，张崇禧，张书锋，等.蛴螬的化学成分及药理作用〔5〕李香丹，孙抒，宋莲莲，等.蛴螬粗提物对人宫颈癌Hela细J〕.肿瘤防治研究，2008，35（7）：4916OhWYPyoSLeeKRetal.EffectofHolotrichia3总第105期医 大理学院学报constituentsofthepetroleumetherextractofHolotrichia798DongQFWangJLZhangSFetal.ThefatsolubleconstituentsofHolotrichiadiomphalialarvaeJ〕.Chemof〔9〕阳长明，侯世祥，王新春，等.蛴螬与蛴螬滴眼液的成分研〔10〕王玉亮，董庆峰，张磊，等.蛴螬化学成分的