hiv抗体初筛试验假阳性的原因及处理

hiv抗体初筛试验假阳性的原因及处理

目前，中国的疫情形势越来越严峻。通过监测、诊断和血液采集进行血液采集和筛查。作为山东省艾滋病监测网络初筛实验室之一,虽然我们严格质量控制,但由于各种原因,HIV初筛实验中还会出现假阳性反应,实验室在2005年1月至2008年3月的检测中HIV抗体初筛试验阳性率为1.25%(70/5616),报省确认实验室7份,确认为HIV阳性6份,占初筛阳性的8.57%(6/70),假阳性率为1.12%(63/5616)。现就HIV抗体初筛试验假阳性的原因及处理方法探讨总结如下。1试验中虚假阳性的原因1.1血清标本结果多年来研究者已发现像患有血液恶性病变、自身免疫性疾病、多发性胆汁型肝硬化、酒精性肝炎、多发性骨髓瘤、肾移植或慢性肾衰竭、疟疾或丝虫病等的受检者或疫苗接种(流感,乙肝)者,血清标本都易出现假阳性结果。这可能由于患者自身免疫应答反应,产生能与HIV抗体发生交叉或非特异性反应原所致。在7份需确认的标本中,其中一份为征兵查体的学生,他的血清标本ELISA法(丽珠/万泰)初筛均呈弱阳性反应,胶体硒呈阴性;4个月后复检,初筛结果同第一次相近(S/CO=2.773)。省确认实验室第一次报:结果不确定,4个月后省确认实验室再次复核结果是:ELISA阴性反应;PA弱阳性反应;WB带型P24,报HIV-1阴性。分析原因这与个体免疫差异有关,目前的诊断试剂易出现这种假阳性结果。1.2实验室操作的原因1.2.1样品的原因由于个别受检者(如吸毒者)静脉采血困难,造成标本量不足;出现溶血标本等。1.2.2样本增加的原因血清标本分离不好即进行加样,血清中混有纤维原蛋白或红细胞成份;手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长。1.2.3洗板不畅,洗板不畅采用洗板机洗板时,由于血液中纤维蛋白,造成洗板针堵塞,抽吸不完全,造成洗板不畅,导致洗板效果差,直接影响本底;反应板过多,不能保证及时洗板,造成洗板等待时间过长,影响结果。1.2.4蒸发成盐液温箱孵育时封片贴得不密实,使标本或稀释液蒸发较多,吸附于孔壁,难于清洗彻底;孵育时间人为延长,导致非特异性结合,难以清洗彻底。1.3elisa法的敏感性和阳性目前,国际上有些国家和地区已将线性免疫酶测定(第四代ELISA试剂)用于血源筛查,但国内外血源筛查仍主要使用第三代ELISA(双抗原夹心法)试剂。第三代产品为使用合成多肽抗原,我们实验室主要用的是珠海丽珠生物试剂有限公司和北京万泰生物药业有限公司生产的HIV(1+2型)抗体诊断试剂盒(双抗原夹心酶联免疫法),快速法用的是美国雅培公司出品的斑点免疫胶体硒试剂条。抛去受检者自身和实验室操作的原因,2005年1月至2008年3月间ELISA法初筛阳性标本共70份,胶体硒复检阳性6份,确认试验阳性6份,ELISA法初筛假阳性率为1.12%,胶体硒在本实验室的假阳性率0%。表1(山东CDC艾防中心提供)是2007年HIV抗体诊断试剂质量评估(ELISA)结果报告,其中丽珠和万泰两家试剂的敏感性均为100%,特异性为95.65%,功效率为97%,即由于试剂的原因可造成3%的假阳性结果。表2(山东CDC艾防中心提供)ELISA和雅培测定对比中可见,ELISA检测阳性最低靶值为0.51,而雅培最低靶值为2.67,说明ELISA的敏感性较雅培胶体硒法敏感性高。胶体硒实验时不需要任何设备,迅速、简便、特异性较好,敏感性约相当于中度敏感的ELISA,适用于应急监测、门诊急诊个体检测。所以,对于我们HIV抗体初筛实验室来讲,要尽量使用ELISA法来筛查。筛选实验设计的宗旨是要尽可能检出所有的阳性标本,也就是敏感性要高。尽管这可能出现一些假阳性反应,但为了不漏掉一个感染者,筛选实验都力图在敏感性上达到其理想的设计水平。2初始筛选虚假阳性的处理原则和方法2.1种试剂复测的注意事项对初筛试验呈阳性反应的样品用原有试剂和不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阳性反应,或一阴一阳,需送艾滋病确认实验室确认。因此,试验中要严格操作规范,对待初筛阳性的标本要认真复查,以控制上级实验室不必要的浪费和工作。严格保密制度,以免加重受检者心理负担和恐慌。2.2敏感性和特异性高的试剂筛查试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、批批检、在有效期内的试剂,推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。我们试验使用的丽珠、万泰和雅培试剂都是临床质量评估很好的产品。实验中关键一步就是要严格按说明书操作,以降低由试剂的原因造成假阳性结果的比率。2.3初筛结果的判定一、要保证实验室所有设备和各种仪器的及时校正和正常使用。二、采血时尽量达到足够血量,避免溶血并将血清分离好,在加样时避免加进纤维蛋白。三、机器洗板时,要时刻观察吸(加)液针是否顺畅,以免洗板过程中被纤维蛋白等杂质堵塞。四、温箱孵育时封片要贴密实,定时准确。五、显色后,若发现一孔内色泽不均匀,只在孔底一点或孔壁一侧显色,基本上可断定该孔是洗板不净造成的,应判为假阳性。六、酶标仪读板时要保证板底部清洁无水雾,初筛结果若S/CO值在2点几,对该标本进行复检基本上全是阴性。当然,在排除一切可能的操作失误和试剂原因后,对受检者还应根据咨询情况3个月后复查,以避免漏掉可疑感染者。总之,就目前而言,虽然HIV抗体初筛假阳性不可避免,但作为基层实验室的试验人员,不断加