普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定和计算实验w1

药理学实验报告学院班级姓名学号时间2012・04・11江苏大学实验报告学院班级姓名学号实验五普鲁卡因半数致死量（ld50）的测定和计算实验一、实验目的通过实验了解测定药物ld50的方法、步骤和计算过程。二、实验原理由于实验动物的抽样误差，药物能使动物致死的剂量大都在50%质反应的上下，成常态分布。在急性毒物实验中50%质反应即所谓半数致死量（LD50）。在这样的质反应中药物剂量和质反应间呈S型曲线，S型曲线的两端较平，而在50%质反应处的曲线斜率最大。因此，这里的药物剂量稍有变动，则动物的死或活的反应出现明显差异，所以测定半数致死量能比较准确的反映毒性的大小，ld50数字越小，毒性越大。三、实验材料实验动物：小鼠（体重17~25g）；实验器材：鼠笼，天平，ImL注射器；实验药品：2%盐酸普鲁卡因溶液，苦味酸溶液。四、实验方法和步骤1．探索剂量范围：取小鼠8~10只，以2只为一组，分成4~5组，选择剂量间距较大的一系列剂量，分别给各组腹腔注射盐酸普鲁卡因溶液，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起0%及100%死亡率剂量的所在范围（致死量约在105~150mg/kg范围内）。本步骤可由实验室预先进行。2．正式试验：在预试验所获得的0%和100%致死量的范围内，选用几个剂量（一般用5个剂量，按等比级数增减，相邻剂量之间比例为1:0.7或1:0.8），各剂量组动物数为10只，分别用苦味酸标记。动物的体重和性别要分层随机分配，完成动物分组剂量计算后按组腹腔注射给药。最好先从中剂量组开始，以便能从最初几组动物接受药物后的反应来判断两端的剂量是否合适，否则可随时进行调整，尽可能使动物的死亡率在50%上下，死亡率为0%或100%时，不能用于计算。实验以全班为一个单位，可以一个组观察一个剂量组(10只小鼠)，或每组各作每一剂量组的2只小鼠。务求用药量准确，注射方法规范，以减少操作误差，避免非药要物所致的死亡，得到较理想的结果。3．观察试验结果：给药后即观察小鼠活动改变情况和死亡数，存活者一般都在15~20五、分钟内恢复常态，故观察30分钟内的死亡率。五、鼠重g13191416141614161416给药体积mL1.31.91.41.61.41.61.41.61.41.6注射时间18:5919:0019:0319:0419:0819:0918:5919:0119:0319:09死亡时间19:2221:0319:2819:4119:1919:1919:0319:0419:1219:1330min1/22/22/22/22/2120min1/22/22/22/22/2(2)全班：1)t=30min时：剂量！lgDi死亡概率单位1权重权重D|XX2nl率%Y|系数WWXWX296111.983.9314|7.143.53010.2700613.780847.4860614.858712012.084.3214|64.285.3680.611118.5555417778436.95993150|2.184.7414|92.866.4700.271373.799188.2822118.00811187.5|L_L2.275.17卜-|14LI85.71_L6.0680.4279245.99088—13.599330.97285-1234i2.375.61r14十i10012)t=120min时剂量lgD死亡概率单位权重权重D11XX2n率%Y系数WWXWX296I1.983.931464.285.3680.611118.5555417778436.95993120!12.084.321492.866.4700.271373.799188.2822118.0081115012.184.7414100187.5[2.275375.6114100+^120mg/Kg150mg/Kg187.5mg/Kg234mg/Kg实验数据记录和整理1.实验数据：(1)本组：96mg/Kg2.方法一：

(1)图表:t=30min7二14.700X-25.453R"2(1)图表:t=30min7二14.700X-25.453R"2=0.9795lgD――概率单位Y图t=120min：lgD――概率单位Y图⑵ld50的计算：t=30min时：y=14.700x-25.453y=5代入得x1=lgLD50=2.0716•••LD50=117.9mg/Kgt=120min时：y=11.020x-16.452y=5代入得x2=lgLD50=1.9466•••LD50=88.43mg/Kg(3)LD5095%可信限的计算：1)t=30min时：工W(X-X)2=EWX2-(工WX咲W=100.79959-47・14579%212644=0-343XQ咋工W二47・145%12644二2.13075卜-X〉/(、11/(2.0716—2.13075罗_1/EW(X-X〉十％W_Z25.4532_/0.343+122.12644_=8.55054x10-5S=t'S2=v'8.55054x10-5=0.00925mmx土1.96S=2.0716土0.01813=2.05347〜2.089731m分别取反对数，取LD50的95%可信限：113.1〜123.0mg/Kg2)t=120min时：工W(X—X)2=工WX2—(工WX)2/W=54.96804-26.0606%35472=0-02443X=EWX士W=26.°6061i2.35472=2・109362EW(X—X)+%W=116.4522TOC\o"1-5"\h\z(1.9466-2.10936)^/,1=116.4522/0.02443十712.35472=0.0009326S=「S2=J0.0009326=0.03054mmx土1.96S=1.9466土0.03054=1.91606~1.977142m分别取反对数，取LD50的95%可信限：82.42~94.87mg/Kg3.方法二：t=30min1.2才2工42IgLDBOt=30min1.2才2工42IgLDBOy二14GG.Ex3-10531X2丨2£9九2017LR飞=1.0000由图可知：当死亡率为50%时，lgLD50=2.06•••LD50=114.8mg/Kg

t=120min二-2333.lx41201310at=120min二-2333.lx41201310a7-鸽2H.4El5x3^213

R"2=1.0000由图可知：当死亡率为50%时，lgLD50=1.94LD50=87.1mg/Kg六、实验讨论方法一和方法二中t=30min时的LD50均小于t=120min时的LD50，基本符合理论。方法二中t=30min和t=120min时的LD50均落在方法一中LD50的95%可信限区间内。3•两种方法计算出的LD5不完全相同，可能是由于数据的删减不同所致。4•由于小鼠的数量太少、小鼠的个体差异性、不同操作人的操作差异、对小鼠死亡的判断不完全准确等原因，会使结果出现误差。七、思考题：ED50或LD50测定原理是什么？答：LD50是通过量效关系的实验测得的。Clark证实，剂量对数值与质反应之间的量效关系为对称的S形曲线，为便于数学回归分析，需要将S形曲线转化为直线°Bliss提出了剂量对数值与死亡概率单位之间的量效关系为一直线，即可以剂量的对数值为横坐标，死亡概率单位为纵坐标作图，找出死亡50%的相应剂量；也可通过剂量对数值与死亡概率单位直线回归求出LD50测定ED50和LD50的意义是什么？答：LD50是评价化学物质急性毒性大小最重要的参数，也是对不同化学物质进行急性毒性分级的基础标准。化学物质的急性毒性越大，其LD50的数值越小。LD50越大越好，就是说浓度要很高很高才会导致半数死亡；ED50（半最大效应浓度）越小越好，意思是很少的剂量就能发挥作用。LD50常与ED50配合