elisa法检测乙肝半影响因素分析

elisa法检测乙肝半影响因素分析

乙酰乙二半是诊断和治疗乙酰乙二醇的有效指标。通常的检测方法是免疫吸附试验（elisa），但影响因素大。本文对ELISA法检测乙肝两对半的影响因素和临床意义进行探讨,为临床诊疗提供参考。1试验前的影响因素1.1色剂的选择标本应避免溶血,红细胞破裂可释放过氧化物酶活性物质干扰与显色剂发生显色反应。血块完全收缩使标本中的非特异性活性物质部分或全部失活,若在血液还未开始凝固时强行离心分离血清,ELISA测定过程中可形成肉眼可见的纤维蛋白块,易造成假阳性结果。1.2试剂盒的质量指标试剂盒的质量是保证实验结果准确性的必要前提,各厂家的试剂盒灵敏度、特异性、精密度、稳定性和操作简便性有一定的差异。试剂盒保存要求在2~8℃环境,实验时将试剂盒必须放到室温平衡0.5h。1.3测定仪器及加样器的使用,学生所有半肝化试剂检验医师应掌握ELISA用于乙肝两对半测定的质控方法原理及失控处理原则,熟悉操作中易出现问题的实验环节,掌握乙肝两对半各标志物之间存在意义,正确使用测定仪器及加样器。2试验过程中的影响因素2.1加样器使用操作规程吸嘴的清洁与否和吸量的准确性直接影响检测结果,严格执行加样器使用操作规程,向反应孔加标本时应将吸头尖触及到反应孔侧壁下1/3处,决不能污染其他反应孔。放到温育箱前,必须将所加样用振荡器混匀30s以上。2.2温速率的影响标本加入板孔后,易产生边缘效应,抗原抗体结合及酶促反应因酶标板周围与内部孔升降温速率不同,造成周边与内部孔结果差异。干育容易产生周边效应,即反应板周边孔温度与中间孔温度差异,这样升温速率差会影响到结果准确性。在实验操作中应该采取水育使反应孔底部接触到恒温水,尽量保证整板温度迅速达到温度平衡,减少边缘效应造成的误差。2.3干扰去除蛋白质、血球、细菌中酶通过洗涤分离结合与未结合抗原抗体复合物及酶标记物,也可以把非特异性吸附蛋白质、血球、细菌中酶等干扰去掉。每次洗板都应使用新鲜制造的蒸馏水或去离子水稀释洗涤剂,防止洗涤液受污染影响洗板效果。2.4辣根酶催化底物合成色成体系显色是ELISA法测定乙肝两对半中最后一步温育,温育使反应孔内的酶标物质辣根酶催化底物生成有色产物。此过程受温度、时间和光线等条件影响,通常底物显色在37℃10~40min反应彻底完成,底物液受光照会自行变色,显色反应需在避光环境进行。3测定酶标仪的质量控制结果判断须在终止液加入后10min内完成,以免出现孔内结晶,影响酶标仪的测试。操作者要有高度的责任心,确保试剂的质量及有效期的同时,对于复查后的异常结果应重新采集标本再予复查,在整个实验过程中加入外部质控血清进行严格的质量控制。所有复检要有详细记录。4乙肝疫苗接种者身份,指4.1HbsAg乙肝病毒表面抗原,为已经感染病毒的标志,并不反映病毒有无复制、复制程度、传染性强弱。4.2HbsAb乙肝病毒表面抗体,为中和性抗体标志,是是否康复或是否有抵抗力的主要标志。乙肝疫苗接种者,若仅此项阳性,应视为乙肝疫苗接种后正常现象。4.3HbeAg乙肝病毒e抗原,为病毒复制标志。持续阳性3个月以上则有慢性化倾向。4.4HbeAb乙肝病毒e抗体,为病毒复制停止标志,病毒复制减少,传染性较弱,但并非完全没有传染性。4.5HbcAb乙肝病毒核心抗体,为曾经感染过或正在感染者都会出现的标志,核心抗体IGM是新近感染或病毒复制标志,核心抗体是感染后就会产生的,对于辅助两对半检查有一定意义。5elisa法的检测乙肝是当前严重危害人们身体健康的传染病之一,血清两对半检测对乙肝的诊断,病程监测,疗效观察起到了一定的作用,常用的检测方法为ELISA法。但ELISA检测中受到许多因素的影响,如标本留取与处理、加样、孵育、洗板、显色及结果判读,如不注意可能导致假阳性或假阴性的结果。具体操作中应严格按照操