荧光光度法测定维生素b1

荧光光度法测定维生素b1

维生素b1是维持人体代谢平衡的重要药物。如果缺乏，可能会导致脚气病和多发神经炎等疾病。b1存在于水稻、母系、谷物、肝脏、鱼类、豆类等动植物组织中。用于测定维生素b1的方法包括重量法、滴注法、荧光法、电位法和示波法。在-190km和-1浩亚色光刻显微镜下（vs.sce）中，维生素b1具有两个缓冲液ph值为10-610-4mol/l的敏感二次还原峰。峰电流值和维生素b1的浓度在10-610-4mol/l范围内呈线性。它可以用作定量分析的基础。1实验部分1.1参比电极的制备JP-303型微机极谱仪(成都仪器厂);PAR-270电化学系统(美国);三电极体系(工作电极:滴汞电极;参比电极:饱和甘汞电极;辅助电极:铂电极).维生素B1标准溶液:称取0.3372g维生素B1,配成100mL维生素B1贮备液(0.0100mol/L),用时按需稀释.HAc～NaAc缓冲溶液:称取50g无水NaAc溶解,加入20mL冰醋酸,稀释至1000mL(pH为5.00).实验所用试剂均为分析纯,用水为重蒸水.1.2hacnaac缓冲溶液极谱峰形取适量维生素B1溶液于25mL容量瓶中,加入10mLHAc～NaAc缓冲溶液,定容.在谱仪上测其二阶导数峰,峰电位在-1390mV(vs.SCE),极谱峰形见图1(原电位-500mV).2结果与讨论2.1扫描速度的确定底液:维生素B1易溶于水,水溶液呈酸性.维生素B1在酸性介质中稳定,在碱性介质中将导致其噻唑环打开而失效,故底液pH应低于7.试验考察了维生素B1在氨基乙酸、磷酸盐、Britton-Robinson广泛缓冲溶液、HAc～NaAc等缓冲溶液中的氧化还原行为,发现在HAc～NaAc底液中,维生素B1在-1390mV(vs.SCE)附近有一个灵敏的还原峰,此峰电流和峰电位与底液pH有关,当pH=5.00,缓冲溶液总浓度在0.22～0.40mol/L范围内时,维生素B1的还原峰稳定,对称性好.扫描速度:扫描速度对峰电流的影响见表1,由此可以绘制ip～V1/2图(本文略去),表明在一定扫速范围的峰电流(ip)与扫描速度(V)的1/2次方成正比,符合Randles-Sevcik方程ip=KV1/2(其他条件一定),即扫速越大,峰电流越大.显然,可通过增大扫描速度来提高分析方法的灵敏度,但由于扫速增大,充电电流也会相应增大,甚至会比峰电流增大得更快,所以扫描速度过大反而对方法灵敏度产生不利影响,此外,还使扫描稳定性降低.本实验选择扫描速度为250mV/s.同时发现,随扫描速度增大,ip～V1/2曲线逐渐偏离Randles-Sevcik方程向上弯,表明维生素B1在汞表面有吸附.除氧:由于单扫描极谱法扫速快,与经典极谱法相比,氧的影响较小;又氧为不可逆波,经二次微分后,其影响更小;且在本实验中,氧的峰电位与维生素B1的峰电位相距甚远,因此,本实验所有溶液均不必除氧.起扫电位:起扫电位的变化对峰电流有一定影响,对峰电位无影响,本实验选择起扫电位为-500mV.2.2个阳离子对维生素b汞表面的吸附pH与峰电位:实验表明溶液酸度对峰电位有显著影响,这说明有质子参与电极反应,又pH每增大一个单位,出峰电位大约平移负105mV.由公式m=ΔV/59(mV)ΔpH(m为参与反应的质子数)可知,有2个质子参与了维生素B1汞表面的电极反应.pH与峰电位曲线见图2.图3为维生素B1在汞膜电极上的循环伏安图.由图可知,此电极反应为一准可逆过程.电毛细管曲线见图4,曲线2(维生素B1)明显低于曲线1(缓冲溶液),说明维生素B1在电极上有吸附.电子转移数:取1.0mL0.1mol/L的维生素溶液,用100mLpH为5.00的HAc～NaAc缓冲溶液稀释,以铂电极为阳极,汞池为阴极,在-1390mV(vs.SCE)下电解,利用氢氧库仑计测得电量为19.29C,根据公式:n=Q/n(B1)F(Q为电量;F为法拉弟常数;n(B1)为维生素B1的物质的量),求得电极反应电子转移数n=2.2.3测定实验结果峰电流与维生素B1浓度在10-6～10-4mol/L范围内呈线性,按实验数据求得的回归方程为ip(μA)=0.2250+2.419c(10-5mol/L),相关系数r=0.999.实验证明,浓度10倍于维生素B1的维生素C,B2,B6在给定实验条件下均不影响测定.2.4试样测定结果药片:取10克维生素B1药片准确称量,水溶于烧杯中,过滤,滤液移至1000mL容量瓶中,定容.取1.00mL按实验方法测定.大豆:取新鲜大豆用水洗净,自然凉干.准确称取20g于研钵中,加入2%的盐酸10mL及少量石英砂一起研磨,放置,过滤提取液,滤液移入100mL容量瓶中,每次用5.0mL,2%的盐酸洗涤提取试样,过滤,滤液移入量瓶中,共3～5次,最后用2%的盐酸定容.取1.00mL试液测定.米糠:准确称取米糠10g,放入烧杯中,加入20mL2mol/L的H2SO4溶液,在沸水浴上加热10min,冷却后过滤提取液,