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第四章除草剂生物测定技术

除草剂生物测定意义除草剂生物测定基本原理除草剂生物测定技术程序和标准除草剂生物测定方法介绍除草剂田间药效试验1/49一、除草剂生物测定意义生物测定是除草剂研究种不可缺乏伎俩某种化合物是否含有杀草活性为特定杂草筛选一个除草剂除草剂作用方式研究2/49

二、除草剂生物测定基本原理

试验均在同一控制条件下必须设对照，每一处理重复3－4次试材应该健壮、整齐、随机排列测定结果应进行统计学分析在一定范围内，生物试材与除草剂浓度成百分比伤害反应3/49三、除草剂生物测定技术程序和标准

（－）生物测定材料选择试材选择应兼备对药剂较感性高和含有一定可测范围以及大量易得均一材料。4/49（二）测定参数选择试材对除草剂反应能够经过各种参数来评价。除草剂对植物影响普通为非专一性，所以，各种器官均能作为某一除草剂活力指标。5/49种子发芽率许多除草剂可抑制敏感种子发芽及胚根和芽鞘生长、所以，能够利用观察种子萌发率来测定某种药剂存在是否。

植株生长量在生物测定中，试材重量测定是最惯用。主要测定参数6/49生理生化指标在肉眼可见反应出现之前，试材生理生化改变往往能够测定出来。植物呼吸和光合作用以及所含成份或新陈代谢物质改变等都能够作为测定指标。7/49症状有些除草剂可引发试材经典症状，所以，能够利用此种反应来判定除草剂。特殊技术Parker以青萍为试材，以百草枯和脲类除草剂拮抗作用来测青萍浓度；若以愈伤组织为试材，则测愈伤组织生长量。

8/49测定结果表示方法正确地评价某一药剂生物测定结果是很主要。惯用地上部鲜重降低50％（ED50）、地上部干重降低50％〔CR50〕、株高降低50％（LD50。或ED50）及覆盖面积降低50％（EC50）所需要除草剂量来表示这一类试验结果。Y=a+bx9/49

0级——同对照1级——抑剂生长25％以下2级——抑制生长50％以下3级——抑制生长75％以下4级——抑制生长75％以上5级——死亡目测分级标准10/49四、除草剂惯用生物测定方法

黄瓜幼苗法小杯法小球藻法去胚乳小麦幼苗法浮萍法11/49种子发芽测定法是一个惯用除草剂活性测定方法，种子发芽率、根与茎生长量或作长度在一定范围内与药剂剂量呈相关性，所以可用作除草剂定量测定，有较高灵敏度。种子发芽测定法12/49

1．发芽率

调查对照处理和药剂处理种子发芽数量，然后计算发芽率。药剂处理发芽数发芽率（％）＝一一――――――――X100对照处理发芽数

调查项目13/492．生长抑制率

测定发芽以后芽或根长度，或者是测量鲜重或干重（较少）。对照处理一药剂处理生长抑制率（%）＝－－－―――――――X100对照处理14/491.黄瓜幼苗形态法。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。1234CK15/4957%2,4D丁酯乳油对黄瓜种苗抑制作用100mg/L10mg/L1mg/L1mg/L0.01mg/LCK16/49

本方法是测定激素类除草剂及其它植物生长调整剂活性惯用方法，含有反应灵敏、测定范围大（0.1~1000ppm），操作简便等优点。

17/492.小杯法45CK12318/49该法是上海植物生理研究所于1972年建立。能够测定二苯醚类，酰胺类和氨基甲酸酯类、氯代脂肪酸类等除草剂活性，但对抑制植物光合作用除草剂则几乎不能采取。该法含有操作简便，测定周期短、范围较广优点。19/49

试材选取小麦、油菜、水稻、稗草等。以直径3.5cm，高5.0cm玻璃杯为容器（亦可用50ml小烧杯代替）。杯底放一张圆滤纸片，吸收一定量有机溶剂溶解待测药液倒入杯内，挥发干溶剂。若以水稻、稗草等水生杂草种子为试材，则在小烧杯中加入2ml蒸馏水；3d后分别记载株高或测定鲜重。计算抑制生长50％所需要浓度（LC50）。20/49

若以小麦、油菜种子为试材、则在滤纸片下放一层直径约为0.5cm大小玻璃珠（短玻棒也可）再加入3ml蒸馏水。选择刚萌动种子10粒，排放到滤纸片上，置28℃恒温箱培养，白天给予日光灯照。培养期间天天加入一定量蒸馏水来补充挥发掉水份。21/49

0级——同对照1级——抑制生长25％以下2级——抑制生长50％以下3级——抑制生长75％以下4级——抑制生长75％以上

药效分级标准为22/49然后计算每一浓度处理抑制指数：

Σ（级别X各级代表株数）抑制指数＝――――――――――――X100总株数X最高级别

将抑制指数（抑制百分数）转换为机率值，浓度（剂量）以对数值表示，求出EC50。23/49

本法是Parker于1966年首先报道，后经改进，缩短测定时间。高粱法适宜于测定非光合作用抑制剂，它含有操作简便，培养期间不用管理、周期短，测定范围广等优点。还可改用燕麦、黄瓜等为材料来扩大测试范围。3.高梁法介绍24/49。…。…。。…。.…….…。……。…。…。…。培养皿黄砂＋除草剂高梁种子25/49

上海植生所方法是：用直径9cm培养皿，装满干燥黄砂并刮平，每皿加人30ml药液，恰好使全皿黄砂浸透，然后用有十个齿齿板在皿适当位置压孔（或用细玻棒均匀压10个孔）方便每皿能排10位根长1－2mm（根尖还未长出根鞘）萌发高粱种子（普通于试验前一天在25℃温箱内催芽）。为了缩短测试时间，在排种培养前一天，将上述培养好培养皿、置于34℃恒温箱中过夜，以提升砂温（室温低时尤为主要），排种工作在恒温室中进行，然后放在34℃恒温箱内培养，隔8小时左右，就可划道标识每一株根尖位置起点，过14－16h，对照根长30mm左右，即可测量，求出抑制生长50％除草剂浓度。26/49

此法对高粱种子要求严格，杂交高粱种子因生长势不整齐不适于作试材，农家品种生长势整齐。可采取。另外，培养皿内装砂量要适合，少了会使植物材料与药剂接触不良，砂多则使植物生长受妨碍，这都会影响到测定结果准确性27/49本方法是在Jaworski黑麦草测定法启发下，由沈阳化工研究院除草剂组建立。它适宜于测定α一氯代乙酰胺类除草剂，敏感度达0.01PPm；亦可测除草醚、五氯酚钠等除草剂，但敏感度较低。测定原理是利用稗草中胚轴（从种子到芽鞘节处长度）在黑暗中伸长特点，以药剂抑制中胚轴长度来测定药剂活性。

4.稗草胚轴中胚轴法

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将一系列浓度敌草胺药液或待测液50ml注入50ml小烧杯中。每杯投入10颗刚才露白稗草籽。为了防止在测定中可能有个别幼芽浮起，能够在种子周围撒一些石英砂，使种子固定。放入恒温箱中，在28－30℃下黑暗培养，经4天后测定中胚轴长度。29/49建立时间：1964年由上海植生所建立适用范围：用于测定光合作用抑制剂类除草剂优点：与其它测定光合作用抑制剂方法相比，含有操作简便、测定周期短、专一性好等优点。5.去胚乳小麦幼苗法30/49（1）选择饱满度一致小麦种子，浸种2h后，排列在铺有滤纸或纱布搪瓷盘中，在室温20℃左右进行催芽，3~4d后苗高达2~3cm。(2)精选高度一致幼苗，轻轻取出；省得伤害根部，然后用镊子摘除胚乳，再用水漂洗掉附在上面胚乳成份，准备种植。去胚乳小麦幼苗法31/49（3）在直径4.5cm高5.0cm小玻璃杯注入不一样浓度供试药液3ml和稀释10倍培养液6ml，每杯播入上述去胚乳小麦幼苗10株。（4）在温度21~26℃左右和光照下培养6~7d后观察药效。注意天天应该给每个小杯称重，补足损失水分。32/4912345CK33/49测量全部小麦苗生长量，即从芽鞘到最长叶尖距离，并按下式求出生长抑制率，继而求出EC50

对照生长量一处理生长量

生长抑制率（％）＝－－－－－－－－－－－X100

对照生长量结果检验与计算34/49本法是由南开大学元素所谭惠芳等建立。对测定触杀型除草剂较敏感，如百草枯、杀草快、除草醚、敌稗等。另外，对经过干扰体内含氮化合物代谢而杀草除草剂也很敏感，如杀草强、杀草胺，2，4－D，2，4，5－T、二氯丁酸等。

6.萝卜子叶法35/49将洗净水萝卜种子播种在垫有二层滤纸大培养皿内，加入适量蒸馏水，加盖后置27℃恒温箱黑暗培养约30h后，从幼苗上切下子叶，选择大小一致10片放于垫有一层滤纸培养皿内（皿直径5cm），皿内盛有2mm磷酸缓冲液配制一系列不一样浓度除草剂溶液5ml，加盖置于25土l℃恒温室内培养，给予—3000lx萤光灯连续光照3d后，称子叶鲜重，求出抑制叶片生长50％除草剂浓度，也可测定叶绿素含量。36/49

该法是由沈阳化工研究院建立，适合用于脲类及均三氮苯类光合作用抑制剂生物测定方法。对绿麦隆、利谷隆敏感度可达0.025ppm。

7.番茄水培法37/49

首先用盆栽法培养番茄苗，待二片真叶时，作水培试材用。取30ml试管编号。将供试药剂用培养液稀释成一系列浓度溶液，每只试管加入10ml。挑选生长健壮，大小高度一致番茄苗，将主根及子叶剪掉后插入试管，每管插苗4株（播前称重，使各管苗重相等）。在光照下25℃培养2周左右（反应速度与光照及温度相关），测定苗鲜重。培养期间应天天补加蒸发掉水分。以生长抑制率来评价活性，亦可求出EC50。38/49

和番茄水培法相同还有燕麦法将土壤和供试药剂混合，在大玻璃管内装入200g土壤（以干土计），播入挑选燕麦种子，土壤水分保持在50％左右，自然光下培养2周后，测量地上部分鲜重。

菜豆叶片法土壤内混入一定量药剂，然后播入菜豆种子，土壤含水量60％左右，自然光下培养，当第一片三重复叶长全，第二片又刚才出现时，测量其叶面积。39/49

Taylor和Loader，1984年建立了该种方法，目标是筛选防治野燕麦除草剂混剂，该法快速、简便。8.叶鞘滴注法40/49详细方法是：当正常生长燕麦长至1个半叶（即1叶1心）时，在第一片叶张开叶鞘里，滴加10ul供试一定浓度药液。24-28h后，切下根，取上部约2cm长一段，插入清水洋菜培养基上。再经24h，取出测量每一剂量处理叶片延伸长度，并以此评判除草剂活性。41/49

本法是Suwunnamek设计，用来测定内吸传导性且作用迟缓除草剂，如草甘膦等。该法既可反应药剂传导性能，又能反应药剂对地下部分再生能力抑制程度。9.再生苗测重法42/49

用盆栽法种植香附子，等长成苗后，叶面喷洒一定浓度草甘膦药液，一周后剪除香附子苗（离土表1cm），再经过一个月左右测再生苗鲜重。43/49沈阳化工研究院改进了此方法，利用玉米做试材。详细方法：将6粒已催芽玉米种子种在花盆内，在3叶期时喷施草甘膦，24h后，从第一片玉米叶基部剪去顶端。经一定时间后，测量再生苗鲜重或高度。也可在喷药后不一样时期剪去苗地上部，测其是否再生或再生后地上部分鲜重。44/49五、除草剂田间药效试验45/49调查除草剂效果或调查除草剂增产情况都要坚持随机取样，随机取样方法有五点法，对角线法、棋盘式取样法等。生育期施用除草剂，应在施药前1～3天先调查一次杂草基数，作物播前或播后苗前施用除草剂则不进行用药前杂草基数调查。施药后调查除草效果应依据除草剂作用快慢决定调查时间，还要依据除草剂持效长短作第二次甚至第三次调查，每两次调查之间相隔7～15天。调查点数量应由小区面