离子络合紫外分光光度法测定葛根素及其制剂的含量

离子络合紫外分光光度法测定葛根素及其制剂的含量方崇波;龚燕波【摘要】目的建立葛根素及其制剂含量测定的方法.方法在一定pH值条件下，使葛根素和铝离子形成络合物，在339.8nm波长处通过测定吸收度的改变来测定含量.结果吸收度和含量之间存在线性关系,线性回归方程为C=-03.741A-5.3437,r=0.9994.线性范围为3.648~29.184pg・mL-1,平均加样回收率为99.87%,RSD=0.53%.结论该方法可用于测定葛根素及其制剂的含量.【期刊名称】《医药导报》【年(卷)，期】2005(024)003【总页数】2页(P229-230)【关键词】葛根素;络合反应;紫外分光光度法;含量测定【作者】方崇波;龚燕波【作者单位】浙江省宁波市医疗中心李惠利医院药剂科,315040;浙江省宁波市第二医院药剂科,315010【正文语种】中文［中图分类】医药卫生医药导报2005年3月第24卷第3期。229.氨酸乙二胺含量的RSD为0.28%。3讨论3.1色谱条件的优化确定笔者首次采用RP-MPIC法测定了注射用酷甘氨酸乙二胺的含量和有关物质。通过对不同浓度、pH值的磷酸盐缓冲液流动相的考察，在综合考虑保留时间、峰形、理论塔板数、拖尾因子等因素的情况下，选择pH值为2.2的磷酸二氢钠缓冲液为流动相。在此条件下，有关物质和降解产物与主成分峰分离良好，因此，有关物质和降解产物不影响含量测定。取醋甘氨酸乙二胺原料适量，用流动相溶解，进行紫外扫描(200—400nm)，在(200+1)nm处为末端吸收，故选择200nm为检测波长。3.2有关物质的限量醋甘氨酸乙二胺的剂型主要是水针剂，其质量标准收载于中华人民共和国卫生部颁标准，临床常将其以25%葡萄糖注射液20mL稀释后静脉注射或以5%葡萄糖注射液250—500mL稀释后静脉滴注，这种方法在调配过程中，药液暴露在空气之中，易出现二次污染，存在很大的安全隐患，而将其制成注射用无菌粉末则可避免药液与外界空气接触，避免二次污染。同时醋甘氨酸乙二胺原料药对光不稳定，需遮光保存，其水溶液的光稳定性问题更为突出，为提高产品稳定性有必要将醋甘氨酸乙二胺注射液改剂型为注射用冻干灭菌粉末，确保药品质量稳定、安全有效。因此，改剂型为注射用灭菌粉末时必须检查其有关物质，笔者用不加校正因子的主成分自身对照法进行降解产物测定，并规定限度应＜1.0%。［参考文献］［1］于金玲，张月梅，张成明，等，醋H‘氨酸乙二胺注射液对颅脑手术患者凝血功能的影响［J］•齐齐哈尔医学院学报，2003,24(4):364-365.离子络合紫外分光光度法测定葛根素及其制剂的含量方崇波1,龚燕波2(1.浙江省宁波市医疗中心李惠利医院药剂科，315040；2.浙江省宁波市第二医院药剂科，315010)(摘要］目的建立葛根素及其制剂含量测定的方法。方法在一定pH值条件下，使葛根素和铝离子形成络合物，在339.8nm波长处通过测定吸收度的改变来测定含量？结果吸收度和含量之间存在线性关系，线性回归方程为C=-03.741A-5.3437,,=0.9994。线性范围为3.648~29.184yg.mL",平均加样回收率为99.87%,RSD=0.53%。结论该方法可用于测定葛根素及其制剂的含量。［关键词］葛根素；络合反应；紫外分光光度法；含量测定f中图分类号］R927；R286［文献标识码］A葛根素为血管扩张药，临床常用于降低心肌耗氧量，改善微循环，抗血小板聚集。葛根素制剂的含量测定常用高效液相色谱（HPLC）法〃“，由于葛根素为异黄酮类药物，能和金属离子络合，络合后其紫外吸收改变，故笔者应用金属离子络合紫外分光光度法测定葛根素含量。l仪器与试剂UV-2401紫外分光光度计（日本岛津），PH-420T智能酸度计（宁波力特公司生产），Agilentl100高效液相色谱仪；葛根素标准品（中国药品生物制品检定所提供，批号:752-200108）.100/e三氯化铝溶液（浙江省宁波市医疗中心李惠利医院药剂科配制，18.1lg结晶三氯化铝配制成100mL溶液，过滤即得），［收稿日期］2004-02-27［修回日期］2004-03-26［作者简介］方崇波（】973-），男，浙江慈溪人，主管药师，硕士，主要从事医院药学工作。电话7122,87018814.E—mail:fchgyb@163.com。［文章编号］1004-078】（2005）03-0229-02其他试剂均为色谱纯。2方法与结果2.1吸收度测定用移液管准确量取适量的2份等量葛根素待测试液，置于50mL容量瓶中，其中一份加入10%三氯化铝溶液2.OmL,用纯化水稀释至刻度，摇匀后，以未加三氯化铝溶液的样品溶液作空白，测定溶液的吸收度（A）值。2.2测定波长的选择取葛根素标准品配制成约1mg.mL。的标准溶液，精密量取2份1.0mL标准溶液分别置于50mL容量瓶中，其中l份加入10%三氯化铝溶液2.OmL;另精密量取100/e三氯化铝溶液2.0mL置于50mL容量瓶中。并分别用纯化水将3种试液稀释至刻度，分别用纯化水作空白，在190~500nm波长范围内扫描3种溶液，所得扫描图谱见图l。由图】可见，在339.8nm波长处葛根素有一肩峰，与铝离子络合后，此波长处的4值降低，而在此波长处三氯化铝溶液没有吸收，因此选用339.8nm波长作为含量测定波长。。229.3讨论3.1色谱条件的优化确定法测定了注射用酷甘氨酸乙二胺的含量和有关物质。通过对不同浓度、pH值的磷酸盐缓冲液流动相的考察，在综合考虑保留时间、峰形、理论塔板数、拖尾因子等因素的情况下，选择pH值为2.2的磷酸二氢钠缓冲液为流动相。在此条件下，有关物质和降解产物与主成分峰分离良好，因此，有关物质和降解产物不影响含量测定。取醋甘氨酸乙二胺原料适量，用流动相溶解，进行紫外扫描(200—400nm)，在(200+1)nm处为末端吸收，故选择200nm为检测波长。3.2是水针剂，其质量标准收载于中华人民共和国卫生部颁标准，临床常将其以25%葡萄糖注射液20mL稀释后静脉注射或以5%葡萄糖注射液250—500mL稀释后静脉滴注，这种方法在调配过程中，药液暴露在空气之中，易出现二次污染，存在很大的安全隐患，而将其制成注射用无菌粉末则可避免药液与外界空气接触，避免二次污染。同时醋甘氨酸乙二胺原料药对光不稳定需遮光保存，其水溶液的光稳定性问题更为突出，为提高产品稳定性有必要将醋甘氨酸乙二胺注射液改剂型为注射用冻干灭菌粉末，确保药品质量稳定、安全有效。因此，改剂型为注射用灭菌粉末时必须检查其有关物质，笔者用不加校正因子的主成分自身对照法进行降解产物测定，并规定限度应＜1.0%。［学报，2003,24(4):364-365.离子络合紫外分光光度法测定葛根素及其制剂的含量1,龚燕波2(1.浙江省宁波市医疗中心李惠利医院药剂科，315040;2.浙江省宁波市第二医院药剂科，315010)摘要］目的建立葛根素及其制剂含量测定的方法。方法在一定pH值条件下，使葛根素和铝离子形成络合物，在339.8nm波长处通过测定吸收度的改变来测定含量？结果吸收度和含量之间存在线性关系，线性回归方程为。=-03.741A-5.3437,,=0.9994。线性范围为3.648~29.184ygmL"平均加样回收率为99.87%RSD=0.53%结论该方法可用于测定葛根素及其制剂的含量。关键词］葛根素；络合反应；紫外分光光度法；含量测定f中图分类号］R927;R286文献标识码］A葛根素为血管扩张药，临床常用于降低心肌耗氧量，改善微循环，抗血小板聚集。葛根素制剂的含量测定常用高效液相色谱（HPLC）法〃由于葛根素为异黄酮类药物，能和金属离l仪器与试剂UV-2401紫外分光光度计（日本岛津），PH-420T智能酸度计（宁波力特公司生产），Agilentl100高效液相色谱仪；葛根素标准品（中国药品生物制品检定所提供，批号:752-200108）.100/e三氯化铝溶液（浙江省宁波市医疗中心李惠利医院药剂科配制，18.1lg结晶三氯化铝配制成100mL溶液，过滤即得），修回日期］2004-03-26作者简介］方崇波（】973-），男，浙江慈溪人，主管药师，硕士，主要从事医院药学工作。电话7122,87018814.E—mail:fchgyb@163.com。文章编号］1004-078】（2005）03-0229-022方法与结果2.1吸收度测定用移液管准确量取适量的2份等量葛根素待测试液，置于50mL容量瓶中，其中一份加入10%三氯化铝溶液2.OmL,用纯化水稀释至刻度，摇匀后，以未加三氯化铝溶液的样品溶液作空白，测定溶液的吸收度（A）值。2.2测定波长的选择取葛根素标准品配制成约1mgmL的标准溶液，精密量取2份1.0mL标准溶液分别置于50mL容量瓶中，其中l份加入10%三氯化铝溶液2.OmL;另精密量取100/e三氯化铝溶液2.0mL置于50mL容量瓶中。并分别用纯化水将3种试液稀释至刻度，分别用纯化水作空白，在190-500波长范围内扫描3种溶液，所得扫描图谱见图l。由图】可见，在339.8nm波长处葛根素有一肩峰，与铝离子络合后，此波长处的4值降低，而在此波长处三氯化铝溶液没有吸收，因此选用339.8nm波长作为含量测定波长。•230.HeraldofMedicineVol.24No.3March20052.3酸度对络合反应的影响精密量取若干份葛根素标准品溶液，每份l.0mL,按“2.1”项F实验方法配制溶液，改变pH值，测量其，4值，结果见图2。由图2可知，葛根素在一定pH值条件下才能和铝离子络合，酸度太强、太弱，络合都会解离，并且碱度增加，易使溶液产生氢氧化铝沉淀而影响测定。在pH值约为4.0时，络合物稳定性最好，故本实验选用pH值为4.0。3.5002.500-:1.5000.5000.0500A/nmJ葛根素+三氯化铝溶液2.葛根紊标准溶液3.三氯化铝溶液图13种溶液的紫外扫描图谱0.40.3弋0.20.1o.o345pH值图2酸度对络合反应的影响2.4试剂用量对实验结果的影响精密量取葛根素标准品溶液若干份，每份1•OmL,参照“2.1”项下方法，改变加入三氯化铝的量，测定络合后的A值。结果表明，三氯化铝溶液用量在1.0mL时，葛根素与铝离子的络合反应基本完全。考虑试样测定的样品用量，笔者选择加入量为2.0mL。2.5反应时间对实验结果的影响液若丁份，每份I.0mL,参照“2.1”项下方法，测量不同反应时间后络合物的4值。结果表明，葛根素与铝离子的络合反应进行比较迅速，溶液配制5min后能基本络合完全。笔者在本实验中选用在溶液配制后即测定一值。2.6标准曲线的绘制分别精密量取0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2,1.4,1.6mL葛根素标准品溶液各2份，置于50mL容量瓶中，其中l份加100/e三氯化铝溶液2.0mL,均用纯化水稀释至刻度，并以含相同量葛根素标准品的未加三氯化铝的溶液作空白，测定A值。月值与浓度C线性拟合得线性回归方程：C=-103.741A-5.3437.r=0.9994，线性范围为3.648~29.184vg.mL“。2.7日内精密度和日间精密度测定按〃2.I”项下方法连续测定6次，所测得的A值保持不变，RSD=0.35%（凡=6）;样品放置12,24,36h后测定，月值基本保持不变，RSD:0.51%（凡：6）。说明样品反应比较稳定。2.8加样回收试验按“2.1”项下实验方法，在已知含量的样品中加入一定量的葛根素标准品溶液，按实验操作测定A值，根据回归方程计算样品量，结果见表1。平均回收率为99.87%,RSD=0.53%。表l加样回收试验结果肛gr T T 1I序号I已知量加入量测定量回收率/qcl卜-----+------+-------+--------+------日|1524.74J82.40707.98100.46273.60795.7999.07364.80890.75100.334456.00979.3299.69547.201069.5399.566729.601255.12100.11|L --1 1 1 1 」2.9样品含量测定用纯化水将葛根素制剂准确稀释至浓度约为lmgmL-1溶液，用移液管精密量取1.0mL稀释溶液各2份，其中1份加10%三氯化铝溶液2.OmL,按TOC\o"1-5"\h\z“2.1”项下方法测定A值，计算含量。另一份以HPLC法测定。两组比较，结果见表2。表2样品测定结果。=3「 t T- T t 1II规格葛根素II紫外分光HPLC法药物名称批号IIIII/mL含量/mg光度法/7e/L7eI卜 +- + + + 1I葛根素注射液525003081598.8799.20〕卜 + + +-- + 1III03082799.02100.0103111398.7599.86030125100.2099.98葛根素葡萄糖注射液10020003051298.96100.03030807100.2103022499.54葛根素氯化钠注射液100200030504100.32100.25030414、l99.85100.09葛根素滴眼液550030717.198.8699.89031018'2100.3499.78〕L 1 1 1 1 」3讨论在一定的pH值条件下，葛根素能和铝离子络合，并能形成稳定络合物，在339.8nm波长处出现爿值改变，并且A值的改变值在一定范围内和含量成线性关系。样品在紫外分光光度法中测定的结果与HPLc法测定的结果比较，差异无显著性(P>0.05)，且紫外分光光度法可以减少样品的色差影响。笔者在本实验中建立的方法可以为葛根素及其制剂的质量控制提供依据，具有可行性。［参考文献］［1］冉晓静，闫洪军，高效液相色谱法测定葛根素注射液中葛根素的含量［J］。药物分析杂志，1998,18(6):400-401.［2］刘新元，何永志，王倩.HPLC法测定葛根素氯化钠注射液中葛根素的含量［J］.中草药，2001,32(9):795-796.［3］李群力，蒋晓萌.HPLC法测定葛根素葡萄糖注射液中葛根素的含量［J］.中草药，2002,33(5):428.-230HeraldofMedicineVol.24No.3March2005溶液，每份l.0mL，按2.1”项F实验方法配制溶液,改变pH值，测量其，4值，结果见图2。由图2可知，葛根素在一定pH值条件下才能和铝离子络合，酸度太强、太弱，络合都会解离,并且碱度增加，易使溶液产生氢氧化铝沉淀而影响测定。在pH值约为4.0时，络合物稳定性最好，故本实验选用pH值为4.0。3.5002.500-:1.0.500-0.0500人/nmJ图l3种溶液的紫外扫描图谱0.40.3弋0.20.1o.o液若干份，每份1.OmL,参照项下方法，改变加入三氯化铝的量，测定络合后的A值。结果表明，三氯化铝溶液用量在1.0mL时，葛根素与铝离子的络合反应基本完全。考虑试样测定的样品用量，笔者选择加入量为2.0mL。液若丁份，每份I.0mL,参照项下方法，测量不同反应时间后络合物的4值。结果表明，葛根素与铝离子的络合反应进行比较迅速，溶液配制5min后能基本络合完全。笔者在本实验中选用在溶液配制后即测定一值。标准曲线的绘制分别精密量取0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2,1.4,1.6mL葛根素标准品溶液各2份，置于50mL容量瓶中，其中l份加100/e三氯化铝溶液2.0mL,均用纯化水稀释至刻度，并以含相同量葛根素标准品的未加三氯化铝的溶液作空白，测定A值。月值与浓度C线性拟合得线性回归方程：C=-103.741A-5.3437.r=0.9994，线性范围为3.648~29.184vg2.7I项下方法连续测定6次，所测得的A值保持不变,RSD=0.35%(凡=6);样品放置12,24,36h后测定，月值基本保持不变,RSD:0