丹莪妇康煎膏对大鼠子宫内膜异位症的治疗作用

丹莪妇康煎膏对大鼠子宫内膜异位症的治疗作用

子宫内膜综合征（iu）是一种常见的女性疾病。经过几十年的不断试验，明确的疾病机制尚未确定。中医认为本病与血瘀有关,临床多以活血化瘀法治疗,取得了良好的疗效。丹莪妇康煎膏(DFD),为临床治疗EMS的常用中成药,作用机制不明。为探究丹莪妇康煎膏对EMS的防治作用及作用机制,本实验采用子宫内膜自体移植法建立大鼠EMS模型,并分别以孕三烯酮及丹莪妇康煎膏进行治疗,观察并比较各组大鼠异位子宫内膜组织形态学改变、腹腔液白介素-8、血清雌二醇、孕酮、超氧化物歧化酶及丙二醛的含量变化,探讨中、西药物在EMS的防治作用及作用机理上的差异,为临床应用提供参考及依据。1材料和方法1.1孕三烯酮、庆大霉素丹莪妇康煎膏,昆明滇虹药业有限公司,批号100404;孕三烯酮,北京紫竹药业,批号53110101;庆大霉素,石家庄制药集团有限公司,批号068100905;苯甲酸雌二醇,上海通用药业股份有限公司,批号009004。1.2实验动物使用许可证Wistar大鼠,清洁级,雌性,体重180～200g,由河北省实验动物中心提供,实验动物使用许可证SYXK(冀)2006-0047,动物合格证号1009075。饲养于温度20～23℃,湿度45～60%,过氧乙酸溶液消毒环境。1.3白介素-8-3免疫试验雌二醇放射免疫分析药盒,天津九鼎生物工程有限公司;孕酮放射免疫分析药盒,天津九鼎生物工程有限公司;白介素-8放射免疫分析药盒,北京普尔伟业生物科技有限公司;超氧化物歧化酶测定试剂盒,南京建成生物工程研究所;丙二醛测定试剂盒,南京建成生物工程研究所。1.4紫外-可见分光光度计超净工作台,苏州净化设备有限公司;756MC型紫外-可见分光光度计,上海精密科学仪器有限公司;全自动γ放免分析仪,北京金泉水科技有限公司等。1.5模型的制备与分组采用自体移植法建立EMS大鼠模型。造模前2天,大鼠每日肌肉注射苯甲酸雌二醇0.1mg/kg体重促情,假手术组肌肉注射等容量生理盐水。手术时,大鼠腹腔注射2%戊巴比妥钠0.2ml/100g体重,待麻醉后固定于操作板上。开腹找到子宫,暴露左侧子宫,在离卵巢约1cm处,分离附着于子宫肌壁的脂肪和结缔组织,两端分别用手术线结扎,剪取中间约1cm长子宫组织,纵向剖开宫腔,暴露子宫内膜,切取5mm×5mm的子宫壁块。在腹壁切口右侧的腹肌与皮下筋膜层之间打隧道,以正好能置入子宫壁块为宜,将子宫壁块平整的置入右侧隧道底部,使内膜面紧贴腹肌,常规关闭腹腔。假手术组按上述方法切取子宫组织,丢弃,关腹,其余操作同上。术后各鼠腹腔注射庆大霉素0.4万U/只,连续5天。术后次日,各鼠肌肉注射苯甲酸雌二醇0.1mg/kg体重,每隔4天1次,共3次,以促进移植内膜的生长,假手术组肌肉注射等容量生理盐水。术后每周触摸包块2次,观察是否出现包块及包块的体积变化。术后第21天,将大鼠麻醉后固定,开腹,观察异位内膜形态学变化。以游标卡尺测量异位内膜组织体积,若体积增大≥8mm3,并出现液体积聚,隆起呈透明小囊状,则为造模成功。取造模成功的大鼠40只,随机分为模型组,丹莪妇康煎膏高剂量组(6g/kg)、低剂量组(3g/kg)、孕三烯酮组(0.5mg/kg),每组10只,并设假手术组大鼠10只。各组大鼠每日灌胃给药(或蒸馏水)一次,给药容量为10ml/kg体重,连续30天。末次给药后禁食12小时,麻醉,开腹,用3ml生理盐水冲洗腹腔,收集腹腔液。腹主动脉取血,离心分离血清。快速剪取异位子宫内膜组织,以10%甲醛液固定。1.5.1组织社会学的观察取异位子宫内膜组织,常规石蜡包埋,作4μm连续切片,HE染色,观察子宫内膜组织形态学变化。1.5.2生化指标的检测采用放免法测定血清雌二醇(E2)、孕酮(P)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量及腹腔液白介素-8(IL-8)含量。1.6spss的分析统计结果用(x¯±s)(x¯±s)表示,采用SPSS11.5进行分析。所有数据先行正态性和方差齐性检验,各组间比较采用单因素方差分析,样本均数间的两两比较采用LSD-t检验。2结果2.1不同模型大鼠的原位组织学观察模型组大鼠可见腹腔内有广泛粘连,移植物体积增大,被结缔组织覆盖并有血管形成,呈透明囊状,内有清亮液体积聚。经药物治疗后,腹腔内粘连明显减少,移植物体积缩小且部分萎缩,其内囊性液体较少或基本消失。对异位病灶进行形态学观察可见:模型组大鼠的异位腺体完整,异位内膜生长良好(图1A)。采用孕三烯酮治疗后,异位腺体明显缩小(图1B)。以丹莪妇康煎膏治疗后,可见异位腺体减小,并有部分呈萎缩状(图1C、D)。2.2对大鼠血清民法p含量的影响(E2)、孕酮(P)含量的影响从表1结果可见,与假手术组相比,模型组大鼠血清E2含量显著升高(P<0.01);高剂量丹莪妇康煎膏可使大鼠血清E2含量较模型组显著降低(P<0.01),其作用与孕三烯酮相当,而低剂量组与模型组相比则无明显差异。与假手术组相比,模型组大鼠血清P含量有升高趋势(P>0.05);低剂量丹莪妇康煎膏可使大鼠血清P含量较模型组降低,但无明显差异(P>0.05),而高剂量可使大鼠血清P含量显著降低(P<0.01),其作用优于孕三烯酮。2.3il-8含量-8(IL-8)含量的影响从表2结果可见,与假手术组相比,模型组大鼠腹腔液IL-8含量显著升高(P<0.01);低剂量丹莪妇康煎膏可使大鼠腹腔液IL-8含量较模型组出现降低,但无显著性差异(P>0.05),而高剂量可使IL-8含量显著降低(P<0.01),其作用与孕三烯酮相当。2.4各组大鼠血清sod、mda的比较(SOD)、丙二醛(MDA)的影响从表3结果可见,与假手术组比,模型组大鼠血清SOD含量显著降低(P<0.01);各剂量丹莪妇康煎膏均可使大鼠血清SOD含量较模型组显著升高(P<0.01),其作用优于孕三烯酮。与假手术组相比,模型组大鼠血清MDA含量出现升高,但无显著性差异(P>0.05);各剂量丹莪妇康煎膏均可使大鼠血清MDA含量均较模型组显著降低(P<0.01),其作用与孕三烯酮相当。3丹不同药代动力学研究子宫内膜异位症(EMS)是一种危害妇女健康的常见病、多发病,虽为良性疾病,但因具有增生、浸润、转移及复发等恶性生物学行为,现已成为妇科研究的热点问题。由于EMS的病因和发病机理不明,目前尚无理想的治疗方案和药物。近年来,中医药治疗越来越受到专业人士的密切关注。中医认为本病与血瘀有关,属于痛经、癥瘕、不育等范畴,常用活血化瘀,软坚散结法治疗,取得了较好的治疗效果。丹莪妇康煎膏为临床治疗EMS的常用中成药,具有活血化瘀,疏肝理气,调经止痛,软坚化积功效。本实验研究发现,经丹莪妇康煎膏治疗后,EMS大鼠腹腔内粘连明显减少,移植物体积缩小,其内囊性液体较少或基本消失;病检可见异位腺体减小,并有部分呈萎缩状,证实丹莪妇康煎膏对实验性EMS治疗效果良好。本实验又进一步对丹莪妇康煎膏治疗EMS作用机制进行研究。EMS的发病机理虽多经研究,但仍众说纷纭,没有定论。其中,子宫内膜种植学说是EMS发病的主导理论,认为脱落的子宫内膜碎片由输卵管流入腹腔,种植在盆腔脏器表层并继续增长,在卵巢分泌的雌、孕激素的直接作用下,发生周期性的变化。临床研究发现,EMS患者血清E2、P水平均高于正常。本实验结果显示,模型组大鼠E2、P含量均较假手术组明显升高,与临床报道一致。本研究发现,丹莪妇康煎膏的作用与临床常用西药孕三烯酮相似,能显著降低大鼠血清E2、P水平,从而抑制异位子宫内膜组织的生长,这可能是其防治EMS的机理之一。现代研究发现,脱落的子宫内膜组织进入腹腔后,会引起机体的免疫炎症反应,并进一步造成免疫系统调节功能的失控,免疫监视、免疫清除功能降低,众多被激活的免疫细胞分泌一系列的细胞因子,进一步促进了异位子宫内膜组织的增殖、生长。其中,IL-8是一种调节内膜功能的细胞因子,间接参与了异位子宫内膜细胞的迁移、定位和粘附过程。在中、重度EMS患者腹腔液中,IL-8明显升高。本实验结果显示,EMS模型大鼠腹腔液中IL-8含量显著升高,与临床报道吻合。用丹莪妇康煎膏治疗后,可见IL-8含量显著降低,从而促进异位内膜细胞凋亡,其效果与孕三烯酮相似。SOD是生命体内重要的抗氧化酶,能清除超氧阴离子自由基,平衡机体的氧化和抗氧化平衡,保护细胞免受损伤。MDA则是氧自由基与生物膜多聚不饱和脂肪酸发生脂质过氧化的分解产物,其含量可反映机体内氧自由基的水平,间接反映出组织的氧化损伤程度。现已