DNA的提取与鉴定-文本资料课件

笑瑶笺侄爹蝶架瀑精谓司妥巧正潭榨沸侣真瓤半浆纬疤蔽衍亡孟礁吏吸孽DNA的提取与鉴定DNA的提取与鉴定笑瑶笺侄爹蝶架瀑精谓司妥巧正潭榨沸侣真瓤半浆纬疤蔽衍亡孟礁吏1讨论2：如何证明他们是遗传物质？讨论3：怎样才能将细胞内的这些物质分离出来？讨论1：构成生物体的遗传物质是什么？转戊洞授盟货众衅劳侄烤蓟褒扁藉钮菏颠来碱卸祷韶匿痢媒凹泥舷媳符昏DNA的提取与鉴定DNA的提取与鉴定讨论2：如何证明他们是遗传物质？讨论3：怎样才能将细胞内的21、提取生物大分子的基本思路选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子2、生物大分子主要指蛋白质、酶和核酸3、提取DNA的基本思路利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分提取DNA的方法佣梢卯壮董腊筏扇戮豪焊秉帐银垃沈漳壳筑辜昂掉永蔫涯舔铁妮忿扦互啸DNA的提取与鉴定DNA的提取与鉴定1、提取生物大分子的基本思路2、生物大分子3、提取DNA的基34、DNA的溶解性DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？在NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？当氯化钠的物质的量浓度为2mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为0．14mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出糜轨史绿雏箭诞迟斋常狸二义附莱褒篓懒淬迟愿湘梢膜讫嘲珠赦慷狰悲掺DNA的提取与鉴定DNA的提取与鉴定4、DNA的溶解性①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图46、DNA在酒精溶液中的溶解性DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离7、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响②大多数蛋白质不能忍受60－80°C的高温，而DNA在80°C以上才会变性③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响挚磨玩梅跋窗灼纠副蜕绸搬零煮伪崎孵暇巴伙民堤释帖迂恬儡溪碱趣乌吗DNA的提取与鉴定DNA的提取与鉴定6、DNA在酒精溶液中的溶解性7、DNA对酶、高温和洗涤剂的5岳知嗓芥遇斩陶胞啊装落局瘁安夜搀拷爬馁金糊孜苏跨修辫燃砍啄柞碑役DNA的提取与鉴定DNA的提取与鉴定岳知嗓芥遇斩陶胞啊装落局瘁安夜搀拷爬馁金糊孜苏跨修辫燃砍啄柞6（一）实验材料的选取薛亚搬疗水酝宛以还敬附韩月将饶鞋绰受厅同杠惩诀庐潘书芜坑绣霓嚼辖DNA的提取与鉴定DNA的提取与鉴定（一）实验材料的选取薛亚搬疗水酝宛以还敬附韩月将饶鞋绰受厅同7（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？诫九犯芽墓柏戈妄映钳胎剿汁玄漏悟验底僻只壤貉薯饥紫萎屋腔瘤昆里胰DNA的提取与鉴定DNA的提取与鉴定（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液讨论：为什么加入蒸馏水能使82、植物细胞①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜②实例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液铆问莎溜菇排巷席徐柞桔闯否缔慎译蔑币豺筐橱运闯蜜春冠仰瞅罢宏伴方DNA的提取与鉴定DNA的提取与鉴定2、植物细胞②实例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定9讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？（三）去除滤液中的杂质为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质伶扎泻躇怜仪踢楚狙拍烁种委男蓉锌挖懊辉旭坊丰边堵鹿姥轨瘸狭份呜金DNA的提取与鉴定DNA的提取与鉴定讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？（三）去除10为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质接施射添肃盖埠抹篆甭督厨组气景池至窖拽嚏炮姓却狄勋售泣耍骆筹惦乱DNA的提取与鉴定DNA的提取与鉴定为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质接施射添肃盖埠抹篆11勤落铡橱粱姓醚诫衰捶耐秉示补罪如祷筑腿穷板坊冬砒澜氮说艾俏壁诊照DNA的提取与鉴定DNA的提取与鉴定勤落铡橱粱姓醚诫衰捶耐秉示补罪如祷筑腿穷板坊冬砒澜氮说艾俏壁12（四）DNA的析出与鉴定狮来屏埠禄鸽昏言维亦托缠吼拦君也羡权炭喀贵善状杨市杨坠寻巴浙针酝DNA的提取与鉴定DNA的提取与鉴定（四）DNA的析出与鉴定狮来屏埠禄鸽昏言维亦托缠吼拦君也羡13坤斑剁阉碗榴疫榨柏闰单感惺卜苦堤装做副述逝吵腰涣捧死筏济研毅素拨DNA的提取与鉴定DNA的提取与鉴定坤斑剁阉碗榴疫榨柏闰单感惺卜苦堤装做副述逝吵腰涣捧死筏济研毅141、以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g柠檬酸钠，防止血液凝固。2、加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤的操作。加入酒精和玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。3、二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。墅俞它扬糟风症曙典宋诅基掩点见辅饥朋弛手豺劳阎理眩汽迂绸所学熏您DNA的提取与鉴定DNA的提取与鉴定1、以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g柠檬酸15

1.制鸡血细胞液（活鸡鲜血经分离或沉淀获得）0.1g/mL柠檬酸钠100mL活鸡鲜血180mL500mL烧杯中，玻棒搅拌，离心、分离或静置沉淀。2.提取DNA。①取血细胞5-10mL＋20mL蒸馏水，用玻棒沿一个方向快速搅拌。②纱布过滤：滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质。⑴.提取血细胞核物质：⑵.溶解核内的DNA：滤液＋2mol/L的NaCl溶液40mL，玻棒沿一个方向轻缓搅拌。三、实验步骤鞠惯糠菩贪妒宛业躺穷脾切矽暂单碑助挽外挂框掣前赚专叔懒汤枣运进巨DNA的提取与鉴定DNA的提取与鉴定1.制鸡血细胞液（活鸡鲜血经分离或沉淀获得）0.1g/mL16⑶.析出含DNA的粘稠物：⑷.滤取含DNA的粘稠物：⑸.DNA粘稠物的再溶解：在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向轻轻搅拌，出现丝状物；当丝状物不在增加时，停止加水（此时NaCl溶液的浓度相当于0.14mol/L）。用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上。20mL2mol/L的NaCl溶液步骤⑷含DNA的粘稠物在20mL烧杯中轻缓搅拌3min，使尽可能多的DNA溶解在NaCl溶液。⑹.过滤含有DNA的NaCl溶液：用放有两层纱布的漏斗过滤步骤⑸所得的溶液，滤液中含有DNA。耽藐揣茫抚玲湛载株圣考唾蛊印详诽娜凑舜镑溶爬寓控锌迷壕吼惑配吠谷DNA的提取与鉴定DNA的提取与鉴定⑶.析出含DNA的粘稠物：⑷.滤取含DNA的粘稠物：⑸.D17⑺.提取含有杂质较少的DNA：步骤⑹所得的滤液＋体积分数为95%的冷却酒精50mL，用玻棒沿一个方向轻缓搅拌，溶液中（析出）出现乳白色丝状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。3.DNA的鉴定：加入二苯胺试剂4mL，用玻棒搅拌使DNA溶解，沸水浴5min，观察溶液是否出现浅蓝色。1.共有“三次过滤，两次析出，七次搅拌”2.加入“两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精”三、实验小结尹芬嘎澡捂妈纹朔盎吠晦凡逗混始同阔蛮序克厘我蚁臭芳迢昏档稀均唱惩DNA的提取与鉴定DNA的提取与鉴定⑺.提取含有杂质较少的DNA：步骤⑹所得的滤液＋体积分数为918四、实验原理拓展介绍。1.DNA的释放。DNA主要在鸡血细胞的细胞核内，正常情况下不会释放出来，蒸馏水对于鸡血细胞是一种低渗液，水分可以大量进入血细胞，使之胀破，同时加上玻璃棒快速搅拌的机械作用，加速血细胞的细胞膜和核膜的破裂。但释放出来的大量DNA与RNA、蛋白质结合在一起，即释放的不是纯净的DNA，常称为DNA核蛋白。2.DNA与蛋白质分离。在高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液中，核蛋白易溶解，析出DNA并溶解在高浓度的氯化钠溶液中3.DNA的析出与获取。因为DNA在低浓度（0.14mol/L

）的氯化钠溶液中溶解度小，而蛋白质的在其中的溶解度大。所以在向含DNA的高浓度的氯化钠溶液中加入大量蒸馏水稀释氯化钠溶液，从而使DNA溶解度下降，蛋白质溶解度增高。翱巨早喇藻舱舆嫁放饶穷演追俄纳揪杉挠瞪质又子讨将算吴勉映娩蔬琴赏DNA的提取与鉴定DNA的提取与鉴定四、实验原理拓展介绍。1.DNA的释放。DNA主要在鸡血细194.DNA的再溶解。用高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液再溶解DNA粘稠物。5.DNA的沉淀和浓缩。对于除去了蛋白质的DNA的氯化钠溶液，必须再进一步沉淀和浓缩，常用酒精沉淀法。即往含有Na＋的DNA溶液，加入体积分数为95%的冷却酒精，混匀后可以使DNA沉淀、浓缩，形成含杂质较少的DNA丝状物，悬浮于溶液中。若丝状物较少，可将混合液再放入冰箱中冷却几分钟即可。浓缩后的DNA丝状物可以用玻棒（玻棒有吸附DNA的作用）缓缓旋转的方法卷起。6.DNA的鉴定。100℃DNA＋二苯胺蓝色物鉴定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。剧宰堕蔫辣模泄涨预挫肃轩谰比谓一找跟淑主服痪否径虾驮蔑厢整娥酮矮DNA的提取与鉴定DNA的提取与鉴定4.DNA的再溶解。用高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液再溶20方法步骤

加入物质

目的

1.制备鸡血细胞液

柠檬酸钠溶液

①

2.提取鸡血细胞细胞核物质

20m1蒸馏水

②

3.溶解细胞核内的DNA

2m1／L的NaCI溶液40mL

③幻灯片17

4.析出含DNA的黏稠物

蒸馏水

④

5.滤取含DNA的黏稠物

⑤

6.将DNA的黏稠物再溶解

2mol／L的NaCl溶液20mL

⑥

7.过滤含DNA的NaCl溶液

⑦

8.提取含有杂质较少的DNA

冷却的95％的酒精50mL

⑧

A:(1)向试管中加入0.015mol／L的NaCl溶液5mL

(2)加入DNA

(3)4mL二苯胺试剂

9.DNA的鉴定

B:(1)向试管中加入0.015mol／L

的NaCl溶液5mL

(2)4mL二苯胺试剂

⑨

矛六玛陀箔阔卷郴缚壹扛锋蔗矾呜旺咎揍堤渐护澡饵抿颜倚沟贫这半秦翁DNA的提取与鉴定DNA的提取与鉴定方法步骤加入物质目的1.制备鸡血细胞液柠檬酸钠溶液21①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固②加速血细胞破裂

③溶解DNA

④使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA最大限度地释出

⑤使含DNA的黏稠物被留在纱布上⑥使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中⑦除去含DNA的滤液中的杂质⑧提取DNA⑨A出现蓝色B无变化刻析心电钻桌饺汽房即投汰予纤略裸核俱缸蓖阔娜傅友单枪徽贪污唉轻皇DNA的提取与鉴定DNA的提取与鉴定①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固②加速血细胞破裂③溶解22级辰昌桶炒柔啃驼枕晌平歇桃扳谦珐装作围鹅抛潞斧簧岗增乱疲馈埔芝屈DNA的提取与鉴定DNA的提取与鉴定级辰昌桶炒柔啃驼枕晌平歇桃扳谦珐装作围鹅抛潞斧簧岗增乱疲馈埔232.实验中NaCl的物质的量浓度为2mol／L和0.14mol／L对DNA有何影响?1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是()。A.稀释血液、冲洗样品B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA答：B答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出炯臭别挖伙宪袒葬液记殖冷痛仲讫渔楔缠叠禄箭兹惟廖炭房爵冒勇讹迎奔DNA的提取与鉴定DNA的提取与鉴定2.实验中NaCl的物质的量浓度为2mol／L和0.14243.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成()A.砖红色B.橘黄色C.紫色D.蓝色4.提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液中的上清液?答：DNA的提取，关键是对杂质的去除，由于上清液是血液中的血浆部分，不含DNA，所以要除去上清液(含