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离子交换层析原理概述1基本原理2离子交换层析介质3介质的种类和性质4离子交换层析(IEC)以离子交换剂为固定相,依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法可解离性、离子的净电荷、表面电荷分布的电性差异定义:发展历史聚苯乙烯离子交换树脂进入生物化学领域发现离子交换现象1848年Thompson等人本世纪40年代50年代种类广泛的应用于各种生化物质如氨基酸、蛋白质、糖类、核苷酸等的分离纯化离子交换纤维素离子交换葡聚糖离子交换树脂基本原理主要依赖电荷间的相互作用几乎所有的生物大分子都是极性的,都可使其带电基本原理带电的溶质分子介质中可交换离子蛋白质分子中带电的氨基酸带相反电荷的介质的骨架离子交换层析介质固定相是离子交换剂是一类不溶于水的惰性高分子聚合物基质通过一定的化学反应共价结合上某种电荷基团形成的离子交换层析介质高分子聚合物基质电荷基团平衡离子电荷基团与高分子聚合物共价结合,形成一个带电的可进行离子交换的基团平衡离子是结合于电荷基团上的相反离子,它能与溶液中其它的离子基团发生可逆的交换反应离子交换层析介质在一定条件下,溶液中的某种离子基团可以把平衡离子置换出来,并通过电荷基团结合到固定相上,而平衡离子则进入流动相,这就是离子交换层析的基本置换反应。通过在不同条件下的多次置换反应,就可以对溶液中不同的离子基团进行分离。介质的种类和性质高分子聚合物基质—由多种材料制成苯乙烯系离子交换剂苯乙烯和二乙烯苯合成的具有多孔网状结构的聚苯乙烯机械强度大流速快但它与水的亲和力较小具有较强的疏水性纤维素、球状纤维素、葡聚糖、琼脂糖与水有较强的亲和力介质的种类和性质与基质共价结合的电荷基团的性质阳离子交换剂的电荷基团带负电可以交换阳离子物质电荷基团的解离度不同强酸型、中等酸型和弱酸型阳离子交换剂阴离子交换剂离子交换剂的电荷基团电荷基团介质的种类和性质平衡离子平衡离子带正电的离子交换剂能与带正电的离子基团发生交换作用,称为阳离子交换剂平衡离子带负电的离子交换剂与带负电的离子基团发生交换作用,称为阴离子交换剂实验中的离子强度、pH值等
主要影响样品中组分和离子交换剂的带电性质影响因素一般来说,离子强度增大,交换容量下降。实验中增大离子强度进行洗脱,就是要降低交换容量以将结合在离子交换剂上的样品组分洗脱下来。一般pH对弱酸和弱碱型离子交换剂影响较大,如对于弱酸型离子交换剂在pH较高时,电荷基团充分解离,交换容量大,而在较低的pH时,电荷基团不易解离,交换容量小。同时pH也影响样品组分的带电性。总结离子交换层析中,基质一般是由带有电荷的树脂或纤维素组成。带有正电荷的称之阴离子交换树脂,而带有负电荷的称之阳离子树脂。离子交换层析同样可以用于蛋白质的分离纯化,当蛋白质处于不同的pH条件下,其带电状况也不同。总结阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质,阳离子交换基质结合带有正电荷的蛋白质所以这类蛋白质被留在柱子上然后通过提高洗脱液中的盐浓度等措施,将吸附
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