纸片扩散法药物敏感试验

纸片集中法药物敏感试验假设只依据是否消灭抑菌环而不考虑抑菌环的直径大小来推断细的。WHOK-B法，其目的在于技术的简洁和可重复性。本法特别他细菌，如嗜血杆菌、奈瑟菌、专性厌氧菌及酵母样菌等。的细菌，可不必做敏感试验，只有那些被认为引起感染的微生物，应先分别提纯、鉴定菌种后再做敏感试验。试验方法：一、试验材料：(一)培育基：Kirby-BauerMueller-Hinton琼脂。多年大量的有关敏感试验的方法学争论，均承受该培育基；维持细菌正常发育，绝大多数5％的脱纤维羊血，制成血平板。测嗜血杆菌及淋病奈瑟菌的敏感性时，在培育基中须参与1％血红素和2.5mg/ml辅酶IpH7.2～7.4。MH90cm4mm，允许误差为土1mm。琼脂凝固后，应测一下pH。琼47日内用完。假设当天不用，用塑料袋密封包装贮藏于冰箱℃。30-5024h或更长时间检查是否被感染。MH琼脂培育基配方(1L)：BeefExtract2.0gAcidHydrolysisofCasein17.5gStarchFinalPH7.31.5gat25℃Agar17.0g45-50℃。(二)药物纸片6.00～6.35mm20μl。承受K-B药物纸片可以购置，也可自制，用前必需做质量鉴定。用以下两个指标判定纸片的质量：1、片间差：是衡量不同纸片含药是否均一的指标。M-H6张一样的纸片。35C6个抑菌环直径，其最大和最小之1～2mm。2、准确度:判定纸片的实际含药量与标量是否全都。纸片的合理保存格外重要。药物纸片必需在有枯燥剂的容器内低温(-10℃以下)4℃备日常工作用。装纸片的容l0分钟以上才可翻开。如马上翻开，空气中的水分会冷凝在纸片上，简洁潮解。(三)质控菌株K—BATCC25923、ATCC25922ATCC27853。测定MH琼脂ATCC29212331861次。质控菌株简便保存方法：将得到的冻干菌株接种含血的M-H10支高层琼脂管，放置冰箱保存。每11M-H抗生素，以防变异。(四)菌液比浊管1.5×l08／m111／2。比浊管配法如下：0.048mol／LBaCl2 0.5ml0.18mol／LH2SO4 99.5ml将二液置冰水浴中冷却后混合，置螺口试管中，放室温暗处保存。6个月。二、操作方法制备接种菌液：临床标本中分别的细菌做药敏试验，应挑取4～5个制备菌悬液。制备菌液的方法是选择琼脂平板上、形态一样的菌落移种于M—H354环挑取菌落，悬浮于生理盐水中，振荡混匀后与标准比浊管比浊，以用于任何细菌。15min内使用。用灭菌的棉拭子蘸取菌液；在管壁上旋转挤压几次，去掉过多的菌液。60°，最终沿平板周边绕两圈，保证涂布均匀。贴纸片：须待平板上的水分被琼脂完全吸取后再贴纸片〔开盖晾—。用镊子取一张纸片，贴在琼脂平板外表，用镊尖压琼脂中。每张纸片间距不少于24mm，纸片中心距平皿边缘不少于15mm。直径为90mm6150mm的平板15张。15min35℃孵箱培育。不行放在CO2环境中。35℃孵箱，平板在孵箱内最好单独摆放，不超18～24h后，读取结果。判定结果：培育后取出平板，测量抑菌环的直径。抑菌环应为正圆形，且包括纸片直径〔测量垂直方向取平均值。抑菌环的边边缘。影响因素:临床中药物敏感性试验主要受到抗菌药物、培育基、细菌、试纸片以及培育条件等因素的影响。1、药物因素纸片法药敏试验的结果主要受到药物理化性质以及其作用特点等因素的直接影响。解性、稳定性等。药物溶解性：药物的溶解性从易溶到极微溶于水不等，微溶于水的药物制成药敏片后在培育基上很难完全溶解于培育基中果的真实性，极微溶于水的药物的抑菌环可能低于其真实抑菌效果。常用溶解度较高的药物有：氨基糖苷类药物的盐类〔硫酸阿米卡星、庆大、链霉素等、头孢霉素盐类〔头孢曲松钠、头孢氨苄、头孢噻肟钠等、青霉素盐类、喹诺酮类等；而常用的低溶解度的药物有：氟苯尼考、红霉素、杆菌肽锌、北里霉素、呋喃托因、两性霉素等。药物稳定性的影响：临床中常用的药物试纸片一般是事到其稳定性的影响。有些药物如：青霉素类、红霉素以及局部头孢菌PHPH值都会造成药物效价PH6时红霉素会很快分解，导致药间等多种因素的影响而导致抗菌效价降低。药物作用特点PH值、药物有效部位以及各种离子的影响也是不行无视的因素。药物抗菌作用机理：临床中的抗菌药物可以简洁的分成生的抑菌环〔带的边沿是不一样的。杀菌药物产生的抑菌环边沿一〔或者使细菌形成L型，在边沿处细菌的不同形态形成了模糊的过渡带。所以在药〔带大小很难确定，并且随着培育时间的延长和药物的失效，抑菌药物抑菌环〔带〕边沿未被杀死的细菌有可能又恢复生长，从而导致抑菌环〔带〕的进一步临床中常用的抑菌药物有：青霉素类、头孢类、磺胺类、红霉素类、〔锌〔〔氟苯尼考〔、喹诺酮类〔氧氟沙星、恩诺沙星等〕等。PHPHPH值的转变而加强或减PH值。固然这类药物的试纸片PH<3>在弱碱状况下下杀菌作用强〔PH5PH8100倍、800倍。药物有效部位：有些药物的抗菌作用是不能通过体外药〔穿心莲内酯等，内进一步分解〔或转化〕后才能表现出抗菌作用，所以检测这类药物连素、金荞麦等。离子的影响：常用的很多药物可以受到各种离子的影响而导致抗菌作用降低甚至丧失。如：喹诺酮类药物、氨基糖苷类、土Ca2+、Mg2+、Al3+等阳离子的作用下〔一般是形成不溶性络合物〕抗菌作用降低或丧失；很多重金属离子〔铜、锌、汞〕等可以破坏青霉素钠(或钾)的活性，可以直接导致以上药物的抑菌环〔带〕减小甚至消逝，所以在进展药物敏感性试验时应中选用无离子水和高质量的养分琼脂。其他因素：药物自身性质影响因素还包括药物蛋白结合蛋白质的结合必定降低药物的抑菌环〔带〕的大小。同样，培育温度也在确定程度上影响着药物敏感性试验的结果推断。2、培育基药敏试验的结果在很大程度上也受到培育基厚度、用水的质量、PH值以及培育基成分的影响。培育基厚度：纸片法药物敏感性试验主要是利用药物集中原5mm左右，而在培育基厚度越大药物的抑菌环越小。用水的质量：制作药物敏感性试验的培育基用水在很大程度上也影响着药敏试验的结果。用水的影响主要是矿物质离子的影响，如Ca2+、Mg2+、Al3+等离子，它们对药物的影响机理参见与本文的1.3.4节。PHPH值也是影响药敏试验结果的重要因素之一。PHPH值对药物稳定性和活性的影1.3.2节。培育基成分：培育基的配制、养分成分以及杂质的种类等都青霉素≧50%、盐酸多西环素≧75%〔犬、红霉素≧70%；而氨基糖苷类药物结合率却很低〔20%左右。培育基中的杂质的种类也可能在某些方面影响药敏试验的结果。3、细菌因素〔或涂菌的多少和细菌生长的特性是影响药敏生长时会发生移动〔鞭毛运动，当药物失效或培育时间太长，这类4、试纸片因素药敏试纸片中药物含量多少和试纸片材质是影响药敏试验的主要因素。药物含量的多少：试纸片上药物含量的多少应当是影响药敏细菌对不同药物的敏感性是不严谨的。试纸片材质：试纸材质对药敏试