大学课程 组织学与胚胎学PPT 01-组织学绪论

第1章组织学绪论IntroductionofHistology一、组织学的研究内容和意义组织学（histology）是研究机体微细结构及其相关功能的科学。只有学好组织学，认识人体的微细结构及其相关功能，才能全面掌握人体的形态结构，探索生命现象的物质基础。也只有认识了人体的正常结构，才能更好地分析和理解人体的生理过程和病理过程，才能学好生理学、病理学及其他医学基础课程和临床课程。三、组织学的研究方法和技术

（一）普通光镜标本的制备和光镜观察应用普通光镜观察组织切片是组织学研究的主要技术，可获得有关组织细胞结构与功能的许多信息。光镜的放大作用由其光学部分实现，后者主要由聚光镜、物镜和目镜组成。（一）普通光镜标本的制备和光镜观察生物组织和器官不能直接在光镜下观察，制备能使光线透过、微细结构清晰可辨的组织切片是组织学研究的基本方法，主要包括固定、切片、染色等步骤，常用石蜡切片、HE染色。石蜡切片组织块必须有一定的硬度方可切成薄片。首先用酒精和二甲苯将固定后的组织块脱水(dehydration)和透明(clearing)，再用熔化的石蜡浸透、包埋(embedding)，制成有一定硬度的组织蜡块，然后用切片机(microtome)将其切成5～10µm厚的组织切片(tissuesection)，贴于载玻片上

。上述方法称石蜡切片(paraffinsectioning)，是组织学中的常规切片方法。HE染色组织学中最常用的染色方法是苏木精（hematoxylin）和伊红（eosin）染色法，简称HE染色法（HEstaining）。苏木精使细胞核和细胞质中的核糖体等酸性物质染成紫蓝色，伊红使细胞质和细胞外基质中的碱性成分染成淡红色。与碱性染料亲和力强、易被染色的特性称嗜碱性（basophilia）；与酸性染料亲和力强、易被染色的特性称嗜酸性（acidophilia）；若与两种染料的亲和力都不强，则称中性（neutrophilia）。（三）电子显微镜术电镜（ElectronMicroscopy）不同于光镜之处是用电子束代替可见光，用电磁场代替玻璃透镜。电镜又分为透射电镜术和扫描电镜术。各种显微镜的分辨率与人眼的比较分辨率人眼0.2mm普通光镜0.2µm透射电镜0.1~0.2nm扫描电镜2.5nml．透射电镜术透射电镜术（Transmissionelectronmicroscopy）用电子束穿透标本，经过电磁透镜的会聚、放大后，在荧光屏上成像，直接观察，或将影像投射到照相底片，制成电镜照片进行观察。透射电镜的分辨率可达0.1～0.2nm，放大倍数从几千倍到几十万倍。由于电子束穿透力弱，电镜标本需制成50～80nm的超薄切片。2．扫描电镜术扫描电镜术（Scanningelectronmicroscopy）用于观察细胞、组织和器官表面的立体微细结构。将小块组织（直径约0.3cm）经固定和临界点脱水干燥后，在其表面喷镀薄层碳膜和金属膜。扫描电镜发射的细电子束在样品表面按顺序逐点移动扫描，使样品表面金属膜发射出电子（称二次电子），二次电子信号被探测器收集，经过放大，在荧光屏上成像。扫描电镜的景深长，图像清晰，富有立体感。（四）组织化学和细胞化学技术组织化学（histochemistry）和细胞化学（cytochemistry）技术是应用化学反应原理检测组织和细胞的化学成分并进行定位和定量的技术。组织细胞中的糖类、脂类、蛋白质、核酸、酶等均可与相应试剂反应，最后形成有色反应终产物或电子致密物，应用光镜或电镜进行观察。糖类物质常用过碘酸-Schiff反应(PAS反应)显示。脂类常用苏丹染料、油红O、尼罗蓝等脂溶性染料染色。PAS反应示肝细胞内的糖原颗粒（箭头）苏木精复染高倍（五）免疫组织化学免疫组织化学是根据免疫学原理，应用带有可见标记的特异性抗原-抗体反应，检测组织、细胞中多肽和蛋白质等大分子物质的一种技术。进行免疫组织化学染色时，首先要获得被检多肽或蛋白质等大分子物质的抗体。其次，要对抗体进行标记。常用的标记物有荧光染料，如异硫氰酸荧光素(FITC)、得克萨斯红(Texasred)；酶类，如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等；重金属，如胶体金、铁蛋白等。最后，应用标记抗体孵育标本，标记抗体即与组织细胞中的相应抗原发生特异性结合，可分别在荧光显微镜、普通光镜和电镜下观察。免疫细胞化学的方法免疫细胞化学技术主要有直接法和间接法）。直接法是标记某抗原的特异性抗体（又称第一抗体），用标记的第一抗体孵育标本以检测其中的抗原成分。在间接法中，第一抗体不标记；以第一抗体作为抗原免疫另一动物，制备抗第一抗体的抗体，即第二抗体，并标记第二抗体。染色时，先后以第一抗体和标记的第二抗体处理标本，在抗原存在部位形成抗原-第一抗体-标记第二抗体复合物，以达到检测该抗原的目的。为了在一张组织切片上同时显示两种抗原物质，以发现其定位、形态、甚至功能上的相互关系，可使用免疫细胞化学双重染色（doublestaining）。电镜免疫细胞化学常用胶体金标记技术。（六）原位杂交原位杂交是一种在组织细胞原位进行的核酸分子杂交技术，敏感度高，特异性强，是当前分子生物学研究的重要手段。原位杂交的原理是两条单核苷酸链通过碱基互补原则紧密结合，形成稳定的杂交体。根据这一原理，用一条碱基序列已知、