电针治疗心肌缺血的机制研究

电针治疗心肌缺血的机制研究

据报道，大脑可以调节血管功能，调节精细氨酸压力（avp）的合成、释放和压力感受器反射。许多神经过渡可能会通过改变自主神经活动来引起心血管反应。本研究通过观察电针手厥阴心包经络穴“内关”、手少阴心经原穴“神门”、手太阴肺经原穴“太渊”对心肌缺血模型大鼠下丘脑室旁核区单胺类递质含量的影响,探索下丘脑在针刺抗心肌缺血过程中的作用机制及其物质基础,研究经脉脏腑相关与脑联系的中枢调控机制。1材料表面1.1b美国安立默实验动物健康SD大鼠(合格证号SCXK(苏(2006-005)))80只,雌雄各半,体质量(200±20)g,由江苏省南京安立默实验动物有限公司提供。同等条件适应性饲养1周。1.2elisa试验大鼠去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)酶联免疫吸附试验(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)试剂盒(RB公司,批号08090412);大鼠多巴胺(dopamine,DA)ELISA试剂盒(RB公司,批号08080312);大鼠5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)ELISA试剂盒(RB公司,批号08101518);氨基甲酸乙酯(乌来糖)(中国上海曹杨第二中学化工厂,批号050708);实验用水均为超纯水。1.3uv重组人组织16导生理记录仪:澳大利亚AD公司;PCE-A型程控电针治疗仪:安徽天恒科技实业有限公司;ALLEGRA64R冷冻离心机:美国BECKMAN公司;ELX800UV酶标仪:美国BIOTEK公司;CM1900型切片机:德国LEICA;针灸针:苏州医疗用品厂。2动物穴位复制及模型制备按照《卫生统计学》随机数字表法从80大鼠中随机选择10只作为正常对照组,其余大鼠进行模型复制。将模型复制成功的大鼠随机分为模型组、电针“神门”组(简称“神门”组)、电针“内关”组(简称“内关”组)、电针“太渊”组(简称“太渊”组),每组10只,剩余模型大鼠同等条件下饲养,以备补充实验。存在心电图异常、实验手术或记录失败、麻醉过量死亡、功能状态不良或术中死亡者未列为实验分析对象。模型复制前记录正常心电图,心电图异常者剔除不用。参照文献的改良方法复制模型。大鼠乙醚麻醉后固定于手术台上,左胸部备皮,常规无菌操作。沿胸骨左缘剪开皮肤,用止血钳游离大鼠左侧的胸大肌,暴露左侧第2～4肋,以便清晰地观察到心脏暗影,用弯头止血钳沿胸骨左缘第3、第4肋间撑开肋骨,挤出心脏,充分暴露心脏及其表面的血管,用4/0医用缝合线在冠状动脉左前降支下1/3处快速结扎,心脏复位后立刻关闭胸腔。根据模型复制前后心电图变化情况及血清酶学指标肌酸激酶(creatinekinase,CK)和乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)活性的改变评判心肌缺血模型复制成功与否。分别无菌操作各电针组大鼠左侧“内关”、“神门”和“太渊”穴区,用不锈钢28号0.5寸毫针直刺入穴位,针柄连接PCE-A型程控电针治疗仪输出端,参考电极置于穴区沿经脉纵向近端约2mm处,接电针仪的另一输出端。电针刺激,刺激电压5V,电流强度1.1mA,频率为2Hz,波宽300ms,正负向交替方波刺激,每次刺激10min。模型复制后第3天开始电针治疗,每天1次,电针3d。穴位定位参照林文注《实验针灸学》。模型组大鼠只固定不电针。针刺治疗结束后在大鼠麻醉状态下活体取材,距第一次针刺时间50h左右。30mg/L水合氯醛腹腔麻醉,活体开颅取出完整脑组织,参照Paxinos和Watson大鼠脑解剖图谱,在冰盘上用无菌刀片切取下丘脑室旁核区2mm×2mm×2mm脑组织,称质量后立即标记置于3ml冻存管,液氮冷藏保存,每只动物取材时间不超过2min。对照组取材时间、范围和方法与针刺组相同。标本检测严格按照ELISA实验操作说明进行。连续型变量均用“ˉx±sx¯±s”表示,使用SPSS17.0forWindows统计软件进行数据分析。多组间均数比较采用单因素方差分析,组间均数两两比较采用LSD法。其中,P<0.05为差异具有显著性,P<0.01为差异具有非常显著性。3结果3.1模型中的大鼠血清活性改变与正常对照组比较,模型大鼠血清CK和LDH水平显著升高(P<0.05)。见表1。3.2组内关、神门3-ht含量的比较与正常对照组比较,模型组大鼠下丘脑室旁核区NE、DA、5-HT含量显著下降(P<0.01)。与模型组比较,“内关”组、“神门”组NE、DA、5-HT含量均显著升高(P<0.01);“太渊”组仅NE含量显著升高(P<0.05)。4心肌缺血损伤枢纽调控物质中枢单胺类递质与心血管活动有着极为密切的联系。动物实验发现,NE作用于中枢α受体可引起血压下降和心率减慢,兴奋中枢β受体则出现相反的效应,使血压升高和心率加快。刘俊岭等采用家兔急性心肌缺血模型,胸髓蛛网膜下腔微量注射NE,发现NE能明显加强电针“内关”穴促进ST段、T波恢复的作用。李伊为等实验证实NE参与电针促进急性心肌缺血的恢复,电针可能通过兴奋α受体,抑制β受体起作用。陈东风等发现电针“内关”穴能加快急性心肌缺血ST段的恢复,侧脑室注射多巴胺受体阻滞剂氟哌啶醇可增强电针“内关”促进心肌缺血的恢复,提示中枢多巴胺受体参与电针“内关”穴减轻心肌缺血损伤的作用。本研究结果显示针刺不同经穴对心肌缺血大鼠下丘脑室旁核区单胺类递质含量变化的影响不同。电针“神门”穴、“内关”穴可促进下丘脑室旁核区NE、DA、5-HT的释放。电针手少阴心经穴“神门”、手厥阴心包经穴“内关”促进下丘脑室旁核区单胺类神经递质含量的恢复作用明显优于手太阴肺经穴“太渊”。提示下丘脑室旁核区单胺类神经递质NE、DA、5-HT是电针抗心肌缺血损伤的中枢调控物质。本实验已初步证