抗菌药物的敏感试验

第四章抗菌药物的敏感性试验徐元宏纸片扩散法微量液体稀释法E-TEST法常用方法：原理：将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。纸片扩散法（Kirby-Bauer法）

操作方法：1.将在约56℃恒温的无菌M-H琼脂倾注直径为90mm的平板，其厚度4mm。2.无菌挑取孵育16～24h的血平板上4~5个菌落。3.置于无菌生理盐水中，校正其浊度于McFarlandNo0.5管。4.用无菌棉签浸入细菌悬液中，将拭子在试管上壁轻轻挤压以挤去过多的菌液。棉签在三个方向均匀抹琼脂表面（每次转60℃）使菌液均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。5.盖上平板的盖子，放置培养箱内孵育，放置3~10分钟后贴上标准抗生素纸片。6.根据选择的菌株挑选相应的抗菌纸片。肠杆菌科：氨苄西林、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、头孢噻肟、环丙沙星、亚胺培南、氨曲南、庆大霉素；铜绿假单胞菌：头孢他啶、庆大霉素、哌拉西林、阿米卡星、环丙沙星、头孢吡肟、亚胺培南；葡萄球菌属：头孢西丁、青霉素、红霉素、万古霉素、环丙沙星、庆大霉素、利福平；肠球菌属：青霉素、万古霉素、甲氧苄啶/磺胺异噁唑、庆大霉素、环丙沙星、红霉素、氨苄西林不动杆菌属：头孢他啶、亚胺培南、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、头孢吡肟、头孢曲松、环丙沙星、米诺环素；洋葱伯克霍德菌：头孢他啶、米诺环素、甲氧苄啶/磺胺异噁唑、美罗培南；嗜麦芽窄食单胞菌：甲氧苄啶/磺胺异噁唑、左氧氟沙星、米诺环素；嗜血杆菌属：氨苄西林、甲氧苄啶/磺胺异噁唑、头孢他啶、美罗培南、阿奇霉素、环丙沙星、头孢克洛；淋病奈瑟菌：头孢曲松、环丙沙星、青霉素、大观霉素、四环素；肺炎链球菌：红霉素、苯唑西林、甲氧苄啶/磺胺异噁唑、克林霉素、左氧氟沙星、四环素、万古霉素；除肺炎链球菌外的其他链球菌：红霉素、青霉素、克林霉素、万古霉素、头孢曲松、左氧氟沙星。7.用无菌镊子或纸片分配器将抗菌纸片粘贴于M-H琼脂的表面，一旦纸片贴上，不能移动；各抗菌纸片中心距离应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm。8.经过35℃16～24h孵育。9.取抑菌环直径，根据CLSI（clinicalandlaboratorystandardsinstitute）标准，报告细菌对该抗生素敏感(susceptible,S)、耐药(resistant,R)、中介(intermediate,I)。原理：聚乙烯板内含有各种稀释度的抗菌药物，实验时加入100μl浓度为105CFU/ml的菌液，盖上盖板，35℃16～20h观察结果。孔底部清晰不出现细菌沉淀的最低抗菌药物浓度即为该抗菌药物对细菌的最小抑菌浓度，通过CLSI标准判断其敏感和耐药。再取0.01ml容量接种环取肉眼观察无菌生长的液体接种于血琼脂平板作次代培养，经35℃过夜培养后观察最低抗菌药物浓度能杀死9