白芍总苷抗自身免疫反应的研究进展

白芍总苷抗自身免疫反应的研究进展

白芍是牡丹科植物的干燥生根。中医认为，它具有活血化瘀、益气、止泻药、通络等功效。这是治疗风湿性疾病、自身免疫病、肝炎和肝硬化的重要方剂之一，引起了医学领域的广泛关注。国内外学者经过多年的研究,已提取白芍的药效成分单体,主要为一组糖苷类物质,包括芍药苷、羟基芍药苷、芍药花苷、芍药内酯苷,苯甲酰芍药苷,统称为白芍总苷(totalglucosidesofpeony,TGP),其中芍药苷占总苷量的90%以上,是白芍的主要有效成分。白芍总苷的药理及临床研究发现,白芍总苷具有多途径抑制自身免疫反应,以及抗炎、止痛、保肝的作用,对类风湿性关节炎(RA)有确切疗效,并显示出在自身免疫疾病治疗的良好应用前景。因此,本文就近10a来白芍总苷的药理作用,以及在自身免疫疾病应用的研究予以综述。药理作用1免疫调节网络近年的研究发现自身免疫疾病的免疫应答是一个免疫调节网络,当抗原被提呈后,T细胞激活发生增殖和分化,不同的T细胞亚群及单核细胞分泌不同的细胞因子,这些细胞因子环境、以及抗原接触情况和人类白细胞抗原(HLA)基因表型共同调节T细胞的分化,B细胞的成熟和抗体合成,抗原抗体反应以及细胞免疫的抗独特应答。这些细胞分泌的正性调节细胞因子和炎性介质,以及自身抗体使自身组织受到攻击,产生自身免疫炎症。这个免疫调节网络极为复杂,有多个调节通路,单纯干预某一个环节的治疗策略往往难以取得良好效果,因此联合用药是合理的选择。近年对白芍总苷的药理学研究发现,它对自身免疫过程中的多个环节都存在调节作用,这可能与它的多种有效成分分别起着不同的药理作用有关。1.1白砂糖总苷对小鼠免疫反应的调节在自身免疫病的免疫调节中,辅助性T细胞的亚群Th1/Th2的平衡是至关重要的,Th1细胞分泌的正性调节细胞因子白细胞介素2(IL-2),γ干扰素(IFNγ),与Th2分泌的负性调节细胞因子白细胞介素4,白细胞介素10(IL-4,IL-10),转化生长因子β(TGFβ)等相互制衡,调节着自身免疫炎症的发生发展。王兴旺等的研究发现,腹腔注射白芍总苷可使异常增强的小鼠细胞免疫恢复正常,在另一个研究中,二硝基氟苯(DNFB)免疫的小鼠,腹腔注射环磷酰胺,杀伤T细胞,然后给白芍总苷,腹腔注射,5mg·kg-1,连续8d,发现可显著促进抑制性Th2细胞的增生,这可能是白芍总苷抑制自身免疫反应的途径之一。同时还发现白芍总苷对小鼠细胞免疫功能的调节具有浓度依赖特性,在低浓度(0.05~0.4mg·L-1)促进细胞免疫功能,高浓度(0.4~1.6mg·L-1)时则呈抑制作用,这可能是由于某一药物成分浓度达到一定阈值,启动另外的调节通路,其确切的作用机制尚不完全清楚。1.2白砂糖总苷对模拟小鼠b细胞增殖的影响在类风湿关节炎及实验性关节炎(如佐剂性关节炎、胶原性关节炎)的发病机制中,自身抗体与病情的严重程度和预后有密切关系,因此抑制B细胞的分化增殖和自身抗体生成应该也是治疗策略之一。王斌等观察了白芍总苷对佐剂性关节炎(AA)大鼠脾淋巴细胞增殖的影响。发现体外培养中加入白芍总苷,在0.4~1.6mg·L-1浓度范围内,可显著抑制脾B淋巴细胞的增殖。在李俊等研究中,用脂多糖(LPS)诱导小鼠B细胞增生,加入单核巨噬细胞和不同浓度的白芍总苷(0.0016~5mg·L-1),当白芍总苷浓度上升至0.04mg·L-1时,细胞生长曲线呈下降趋势。提示白芍总苷对B细胞的生长有逆向调节作用。1.3白砂糖总苷对lps诱导il-2细胞毒性的作用单核巨噬细胞分泌的肿瘤坏死因子(TNFα)及白细胞介素1(IL-1)等细胞因子在类风湿关节炎的病理过程中是主要的炎症因子,可直接产生细胞杀伤作用,以及诱导T细胞分化,炎症细胞趋化作用。王斌等的研究发现白芍总苷以12.5~250mg·L-1的浓度加入大鼠腹腔单核细胞的培养体系,TNFα的活性随白芍总苷的浓度增加而降低,而前列腺素E2(PGE2)浓度随白芍总苷浓度的升高而上升,提示白芍总苷对TNFα的下调作用,可能于PGE2有关。进一步的研究发现高浓度PGE2可能通过阻断单核巨噬细胞(Mϕ)TNF-αmRNA的转录而抑制TNFα的产生。李俊等检测白芍总苷对LPS诱导大鼠腹腔Mϕ产生IL-1的作用发现,浓度范围12.5~312.5μg·L-1的白芍总苷可使IL-1分泌量降低,同时也观察到这一浓度区段PGE2的浓度与加入的白芍总苷浓度呈正相关,推测白芍总苷对IL-1的抑制也和PGE2有关。IL-2是Th1细胞分泌的主要正性调节细胞因子,对于诱导T细胞亚群的分化有重要作用。魏伟等的研究发现白芍总苷(0.5~62.5mg·L-1)对刀豆蛋白A(ConA)诱导的大鼠脾细胞产生的IL-2有明显影响,0.5~12.5mg·L-1的浓度剂量可使IL-2分泌量增加,而12.5~62.5mg·L-1的剂量范围可使IL-2分泌减少。白芍总苷的这种浓度依赖性调节功能的机制是否与触发旁路调节途径有关目前尚不清楚。2白砂糖总苷对aa大鼠血清pge2及自由基的影响有研究发现白芍总苷(50mg·kg-1)灌胃对角叉菜胶诱导的大鼠急性炎症有抑制作用,进一步研究发现,松果腺切除大鼠角叉菜胶致炎前5d,每日给予白芍总苷50mg·kg-1可以显著抑制松果腺切除引起的大鼠足爪的过度肿胀,且与褪黑素有协调作用,其作用机制可能与白芍总苷抑制炎症局部致炎因子,如PGE2,白三烯(LTB)的合成有关。2.1对PGE2,LTB4的影响李俊等的研究发现,给AA大鼠白芍总苷50mg·kg-1,连续10d可使血清PGE2水平下降。白芍总苷在0.01~100mg·L-1浓度范围内其腹腔巨噬细胞分泌的PGE2呈浓度依赖性变化,有低浓度促进和高浓度抑制的特点。应用Fura-2/AM荧光法观察Mϕ内Ca2+浓度变化,发现白芍总苷在10mg·L-1以下使细胞Ca2+内流减少。大剂量对PGE2分泌的抑制作用可能与此有关。在李俊等的另一个研究中发现白芍总苷对A23187诱导的大鼠腹腔巨噬细胞产生LTB4有明显抑制作用。白芍总苷对LTB4的抑制作用也可能参与白芍总苷的抗炎机制。2.2自由基高本波等通过检测AA大鼠血浆丙二醛(MDA)含量、红细胞超氧化物歧化酶(SOD)和全血谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,观察白芍总苷对AA大鼠体内自由基的影响。发现关节炎出现后2wk连续给白芍总苷(50mg·kg-1)灌胃,可以显著降低血浆MDA,并升高SOD和GSH-Px的水平。2.3NO在另一项研究中发现AA大鼠脾细胞对ConA的增殖反应降低,同时发现白芍总苷可以下调其Mϕ产生过量的NO。白芍总苷对NO分泌的抑制作用可能与其抗炎机制有关。3白砂糖总苷对小鼠扭体和癫叫的抑制作用王永祥等利用大鼠热板反应和扭体反应检测白芍总苷对痛觉的影响,发现白芍总苷(5,10,20,40mg·kg-1,im)和白芍总苷(20,25,30mg·kg-1,ip)分别呈剂量依赖性抑制小鼠扭体和嘶叫;白芍总苷(5,10,20,40mg·kg-1,im)能剂量依赖性延长小鼠舔足潜伏期。并发现白芍总苷对鼠扭体和嘶叫的抑制作用不能被纳洛酮阻断,提示其镇痛作用可能与吗啡受体无关。而白芍总苷对PGE2的抑制作用,可能参与其镇痛机制。4小鼠实验性肝炎动物模型观察白芍是肝炎及肝硬化中医治疗的重要组方之一,祖国医学认为其养血、通络作用可能有助于改善肝功能。戴俐明等应用四氯化碳诱导的小鼠实验性肝炎动物模型,观察白芍总苷对实验性肝炎的保护作用。结果发现白芍总苷(20mg·kg-1)连续7d,腹腔注射的预防给药可显著改善小鼠肝损伤后的血清丙氨酸转氨酶升高,血清清蛋白下降及肝糖原含量降低,并使形态学上的肝细胞变性和坏死得到明显的改善和恢复。同时超微结构上肝细胞内线粒体的肿胀、内浆网的空泡变性,溶酶体的脱落也得到明显改善。5对大鼠情绪的影响有研究发现白芍总苷可抑制重度应激大鼠(4℃游泳或24h束缚)的下丘脑-垂体-肾上腺轴反应,可以降低过高的血浆皮质酮(CS)、促肾上腺皮质激素(ACTH)和β-内啡肽的含量,从而增强大鼠的应激能力。在其他的一些研究中还发现,白芍总苷能延长大鼠慢波睡眠时相,改善大鼠的睡眠状态,延长小鼠减压缺氧存活时间,降低小鼠整体耗氧量,对红细胞氧化溶血有保护作用。以上药理作用可能对于改善慢性病人的机体功能状态,提高生活质量有一定的意义。白芍总糖对自身免疫疾病的影响1白砂糖总苷对aa大鼠足部损伤的影响大鼠佐剂性关节炎(AA)是研究类风湿关节炎常用的动物模型之一。国内多位学者均证明了白芍总苷对AA自身免疫反应的影响,他们分别用Wistar或SD大鼠诱导AA,白芍总苷(50mg·kg-1·d-1)灌胃治疗7~14d,均可有效的消除大鼠的足爪关节肿胀,并发现白芍总苷可以显著降低大鼠滑膜细胞、脾淋巴细胞及腹腔巨噬细胞的PGE2,NO,TNFα,IL-1及IL-2的分泌。以上结果均说明白芍总苷可能通过下调炎性介质和炎性细胞因子的分泌来抑制AA大鼠的自身免疫性炎症。2临床研究2.1白砂糖总苷对湿地病患者cd+4阳性t细胞表达的影响王志坚等在1994年观察了29例类风湿关节炎病人,应用白芍总苷治疗后临床表现、实验室指标的改变。发现连续服用白芍总苷8wk(1.2~1.8g·d-1),病人的关节压痛指数,关节肿胀指数、双手平均握力、25m步行时间、晨僵、血沉、类风湿因子(RF)滴度等指标较治疗前有显著改善。取病人外周血单个核细胞培养,发现IL-1和IL-2水平以及CD+4阳性T细胞与CD+8T细胞的比值均明显降低。作者同时还与甲氨蝶呤(MTX)进行平行对照(5~15mg·wk-1),发现白芍总苷组与MTX组的上述临床及实验室指标无显著差异。而病人的白细胞下降,肝功能异常的发生率,在白芍总苷组显著低于MTX组。1993年在上海仁济医院及光华医院等5家医院对白勺总苷目前唯一制剂白芍总苷胶囊(三九药业公司生产)进行了双盲、多中心平行的Ⅱ期临床研究,总共纳入450例病人,对照组为甲氨蝶呤(MTX)。观察对类风湿关节炎病人关节压痛数、晨僵时间、握力、血沉、C反应蛋白及RF滴度等指标,以及不良反应的发生情况。发现治疗12wk后,白芍总苷组有效率为71.67%,与MTX组(有效率75%)无显著差异;治疗0.5a白芍总苷有效率达79.37%,MTX组为81.67%,2组无显著差异。而不良反应的比较中,MTX的不良反应率为56%,而白芍总苷组仅为13.33%,多为腹泻、恶心,无肝、肾及血液系统的不良反应。1997年又在国内20家医院进行了总例数为1016人的白芍总苷胶囊Ⅲ期临床试验,结果与Ⅱ期临床试验的结果相似,证明了白芍总苷对类风湿关节炎的确切疗效和良好的耐受性。2.2治疗前后白砂糖总苷的情况2000年安徽医科大学进行了白芍总苷对系统性红斑狼疮(SLE)的临床研究,共入选70例病人,进行安慰剂双盲对照研究,实验组和对照组使用激素及免疫抑制剂等其他治疗无显著差异,治疗3mo后白芍总苷组的SLEDAI积分以及血沉(ESR),C反应蛋白(CRP)的情况显著好于对照组。2.3治疗自身免疫疾病在其他自身免疫病治疗方面,张铭瑞等将白芍总苷试用于内因性葡萄膜炎的治疗,发现白芍总苷可以改善其细胞及体液免疫异常,并有一定的治疗作用。目前国内多家医院正在进行白芍总苷对干燥综合征、白塞病、以及未分化结缔组织病的临床研究,但尚无结果发表。白芍总苷作用机制的研究发现,其可以在多个环节影响自身免疫疾病的细胞免疫、体液免疫以及炎症过程,可以减轻自身免疫性炎症,并有镇痛作用。临床研究发现,白芍总苷对于类风湿关节炎和系统性红斑狼疮有确切的治疗作用,且不良反应小,