基因突变和遗传重组的分子机制课件

第7章基因突变与交换GeneMutation&Crossing-Over第7章GeneMutation1变异是自然选择的基本对象变异是物种改良的基因资源变异是遗传研究的理论根基变异是自然选择的基本对象变异是遗传研究的理论根基27.1.Pointmutation的类型7.2.突变发生的机理7.3.保证遗传稳定的机制7.4.基因重组交换的分子机制7.1.Pointmutation的类型7.2.37.1.Pointmutation

7.1.Pointmutation4dNtdeletionorinsertion

=3×dNt

±nxAminoacid

≠3×dNt

Framshift

Transition(转换)

PyPy

PuPu

Transvertion(颠换)

Py

Pu

●Conversion(取代)●dNtdeletionorinsertion

dNtdeletionorinsertion=3×5---Samesensemut.

GAA(E)→GAG(E)

---Missensemut.

GAA(E)→AAA(K)

---Nonsensemut.

GAA(E)→TAA(stop)

●

突变的表达类型

获得突变型是遗传学研究的重要前提

非条件型突变；

RFLP,RAPD…红花/白花，糯/非糯…条件型突变；

突变的表现=突变基因型+诱导条件

（光，温敏感不育，Ts,su--…）

●conversioneffect

---Samesensemut.GAA(E)→G6突变的表达类型

Nullmutation：完全消除了基因功能的突变（缺失）

Loss-of-functionmutation

失去效应突变或阻止基因功能的突变

Gain-of-functionmutation突变获得新的功能

Silentmutation

没有明显表型改变的突变

突变的表达类型Nullmutation：Loss-o7

7.2.突变发生的机理

(自发突变，诱发突变)7.2.突变发生的机理87.2.1.自发突变

7.2.1.1.碱基异构式引起DNA的复制错误

a)碱基异构式

A(amino)A(imino)

C(a)C(i)

G(keto)G(enol)

orG(e,i)

T(keto)

T(enol-2’)orT(enol-4’)

7.2.1.自发突变7.2.1.1.碱基异构式引起DN9(amino)HHN(imino)

(keto)(enol)

OH碱基异构式(amino)HHN(imino)(keto)(eno10(amino)(imino)

HHN(keto)OH(enol)

碱基异构式(amino)(imino)HHN(keto)OH(e11b)碱基异构式引起DNA复制的碱基错配

(a)(k)(k)(a)碱基正常配对b)碱基异构式引起DNA复制的碱基错配(a)(k)(k)12碱基异构式的错配

(a)(i)H(k)O(e)H碱基异构式的错配(a)(i)H(k)O(e)H13碱基异构式的错配

(i)(a)H(e)H(k)碱基异构式的错配(i)(a)H(e)H(k)14碱基异构式的错配

HG(e)antiG(k)syn(i)A(a)synHA(i)anti碱基异构式的错配HG(e)antiG(k)syn(15

碱基异构式的错配

(i)A(i)antivHG(k)synG(e)antiHOA(a)syn碱基异构式的错配(i)A(i)antivHG(k)16碱基异构式引起DNA复制的碱基错配

A(a)

T(k)

G(k)C(a)

正确配对

错误配对

G(k)T(e)

A(a)

C(i)

A(i,anti)A(a,syn)A(i,anti)G(k,syn)

G(e,i,anti)G(k,syn)G(e,i,anti)A(a,syn)

A(i)

C(a)

G(e)

T(k)

碱基异构式引起DNA复制的碱基错配A(a)17A(a)

T(k)

A(a,anti)

T(k,anti)

C(i)

C(a,anti)

A(a)

A(a,anti)

碱基异构式引起DNA的错配突变

C(i)

C(a)G(k,syn)

G(k,syn)

G(k,anti)G(k)A(a)T(k)A(a,anti)T(k,187.2.1.2.增变基因（mutatorgene）

w.t.维持遗传的稳定性mut.

随机引起其他各类基因的突变

butbewronged！7.2.1.2.增变基因（mutatorgene）19增变基因类别；DNApolymerase相关基因3’

5’editingfunctionmutation

错配修复系统的基因

MCE(mismatchcorrectionenzyme)DNA

损伤修复系统基因错配修复功能丧失，突变率升高修复过程是基因

突变的重要来源增变基因类别；DNApolymerase相关基因3’20

南京大学田大成等发现遗传突变新机制

Nature，doi:10.1038/nature07175，自发突变的数量是由Indel的数量和密度所决定生物多样性最初变异来源主要是由Indel诱导产生自然选择在很大程度上是通过对Indel的选择而实现突变在进化中的作用相当巨大

南京大学田大成等发现遗传突变新机217.2.2.诱发突变

7.2.2.1.物理诱变

a)电离辐射诱变；

Co60(χ)(γ)ray

Cs137(χ)(γ)ray

H3(α)ray

P32,,S35(β)ray

卫星搭载诱变；

高真空，强辐射，微重力

(χ)(γ)ray穿透性

（外照射处理）

(α)(β)ray非穿透性

（内标记处理）

dNt电荷及结构改变

7.2.2.诱发突变7.2.2.1.物理诱变a)22聂海胜

张晓光

王亚平神舟10号

聂海胜张晓光王亚平神舟10号23利用太空创造变异（卫星搭载育种）微重力高辐射弱磁场

利用太空创造变异（卫星搭载育种）微重力24b)非电离辐射—UltraVioletlight(U.V)---pyrimidinedimer(TTdimer)isgeneratedbycovalentlinks

betweenadjacentTT

∧U.V.…CTTA…共价键b)非电离辐射—UltraVioletlight25deamination—oxidationU.V.CUA(a)U.V.U.V.H2OH++OH-C(a)

C(i)A(a)depurinationdeamination—oxidationU.V.CU267.2.2.2.生物技术定点诱变

7.2.2.2.生物技术定点诱变27基因的定点诱变

oligo-dNt介导的定点诱变

合成与靶基因区段互补并含突变位点的oligo-dNt

错配位点不能在3‘-end

renaturation

replicationtwotimesCGCCCAAGCCCAA基因的定点诱变oligo-dNt介导的定点诱变合成与28两通用引物（commonP1&commonP2）

设计两突变引物（mut.P1&mut.P2）

第一次PCR：

两种产物混合，变性，复性

第二次PCRmP1/mP2不能进行PCRcP1/cP2的PCR产物为mutant

引物重叠延伸的PCR诱变

cP1

mP1mP2cP2

cP1

mP1mP2cP2两通用引物（commonP1&commonP2）设29

DNAshuffling技术的基因诱变Mutants.Digestionligation

transformationselectionDNAshuffling技术的基因诱变Mutants30

插入突变体库的构建定向选择表型鉴定＋AIMS…定向选择表型鉴定＋gfp…转座子介导突变体库的构建Ti质粒介导突变体库的构建具有标签的植物突变体插入突变体库的构建定向选择定向选择转座子介导突变31

T-DNA-mediatedGenetrap

LB

GenetrapRB经过改造的质粒、转座子载体插入受体基因组中使靶位点基因功能丧失检测载体中报告基因的表达及载体保守序列鉴定插入位点并分离基因T-DNA-mediatedGenetra32

T-DNA-mediatedGenetrap

LB

GenetrapRB

根据结构和“陷阱效应”

增强子陷阱（enhancertrap）

启动子陷阱

(promotertrap)

基因陷阱（genetrap）T-DNA-mediatedGenetra33Ti质粒介导的基因突变ReportgeneReportgeneReportgeneTi质粒介导的基因突变ReportgeneReportg34GUSassayinriceflowerorgans(I)GUSassayinriceflowerorgan35GUSassayinriceflowerorgans(II)

GUSassayinriceflowerorgan36MutantInformation:BZ2×MuActivator

Bz2

MutantInformation:BZ2×MuAc37Ac/DsAc/Ds38大型Mu插入突变体库大型Mu插入突变体库39基因突变和遗传重组的分子机制课件40QPMQPM417.2.2.3.化学诱变a)干扰碱基合成的化学诱变剂6-Mercaltopurine干扰嘌呤合成SH5-AminoUracil干扰嘧啶合成OOH2N7.2.2.3.化学诱变a)干扰碱基合成的化学诱变剂42b)baseanologsleadsbasemispairing(5-BrU)BrBrb)baseanologsleadsbasemi435-BrU(k)

5-BrU(e)ReplicationBrU(k)BrU(e)ATGCreplicationerrorA/TG/CincorporationerrorG/C

A/T(来源：基础分子生物学(第二版)（2012），郑用琏，第313页)5-BrU(k)5-BrU(e)44A(a)T(k)5-BrU(k)G(k)5-BrU(e)C(a)mispairingmispairingT(k)A(a)5-BrU(k)G(k)C(e)5-BrU(e)A(a)G(k)G(k)A(a)ReplicationerrorIncorporationerror5-BrU(k)5-BrU(e)A(a)T(k)5-BrU(k)G(k)5-BrU(e)C(45HNO2(NitrousacidNA)

ACGInosineCUracilAXanthineCdeamination

HNO2BasemodifyingchemicalmutagenHNO2(NitrousacidNA)AInos46

BasemodifyingchemicalmutagenNH2OH(Hydroxylamine

HA羟胺

)HNHHOC(a)HAHNHHHOHNHHOC(i)A(a)

NHHOHNHHONH

HBasemodifyingchemicalmutag47d)AlkylationagentmutagensEMS(Ethylmethanesulfonate)CH3—S—O--CH2CH3OOMMS

CH3—S—O--CH3OOSM(SulfurMustardsgas硫芥子气)HSCH2CH2ClCH2CH2Cld)AlkylationagentmutagensE48e)Mutagen－insertion－framshiftAO(AcridineOrange)扁平分子EB(EthidiumBromide)-ATTTTTCG--TAAAAAGC--ATTTCG--TAAAGC-TAO

T-ATEBTTTTCG--TA分子插入AO

EB-ATTTCG--TAAAGC--ATX’TTTTCG--TAX

AAAAGC-XAAAAGC-e)Mutagen－insertion－framshi497.3.保证遗传稳定的机制

7.3.保证遗传稳定的机制50复制过程中的错配修复DNA的损伤修复基因的回复突变密码的简并致死突变多倍体……7.3.1.复制过程中的错配修复机制(ξ=10-11)DNAmismatch+-----A------

------C---DNApol(ξ=10-8)经第二次校正ξ=10-11MRSMismatchRepairSystem复制过程中的错配修复DNA的损伤修复基因的回复突变密码的简并517.3.1.1.MismatchrepairsystemDNApolymeraseligaseMCE(mismatchcorrectenzyme)3subunitsmutH,L,Sdamgenem6AmethylaseScanning新生链中错配碱基识别新生链中非

m6A

的GATC序列酶切含错配碱基的新生DNA区段7.3.1.1.Mismatchrepairsys52MCEscanningDNA中的GATC(回纹序列.m6A甲基化敏感位点

)

GATCseq.／per2kb±3’

-------C----------CTAG----------CTAG----5’

5’-----------T----------GATC----------GATC----3’

3’-------------------------------------------------------

5’少

多（m6A）新生链MCEscanningDNA中的GATC(回纹序列.53MCEscanningendonucleasePolymeraseligaseGATC

GATCCTAG

CTAGTCGATC

GATCCTAGCTAGTGATC

GATCCTAGCTAGTAMCEscanningendonucleasePolyme547.3.1.2.ungsystem(尿嘧啶-N-糖苷酶系统)---TAGC------ATCG------TAGC------A

CG---U---TAGC---ung-aseGCUAU---TAGC------ACG---Apurinase(内切酶)---TAGC------ADNApolligaseTCG---7.3.1.2.ungsystem(尿嘧啶-N-糖苷酶55phR471aa----TT--------AA--------TT--------AA--------TT--------AA--------TT--------AA----可见光激活U.V

Beforereplication&Error-free

400nmBluelight&phRgene(photo-reactivationenzyme)7.3.2.DNA的损伤修复7.3.2.1.photoreactivationphR471aa----TT--------TT---567.3.2.2.Exision—RepairBeforeReplicationError-freeUvrA,B,Cgene

EndonucleasesExonucleaseDNApolLigase

7.3.2.2.BeforeReplicationUvr57E.coli

存活%U.V计量w.t.UvrA+RecA+RecA+

uvra-reca-uvra-Rec-A.gene

以某种方式参与DNA损伤修复7.3.2.3.Recombinative—RepairE.coli存活%U.V计量w.t.UvrA+RecA58Rupp.Howard-FlandersTTTTAAAATTTTTTTTAAAATTTT变性

E.coli(Rec-A,uvr-6-)D.S.DNAS.S.DNAU.V.复制提取变性TTTTTTAAAAAAReplicationisforcedtoskippastTTdimergapleftinnewlystrand继续复制Rupp.Howard-FlandersTT59E.colik12w.t.5003200uvr-a/Rec-A

850Uvr-A/rec-a

320uvr-a/rec-a

0.21.3存活率为对照37%的U.V.计量Genotype

(尔格/mm2)

TT数量/107bp存在与重组有关的暗修复机制与Rec-A基因引起的strandtransfer有关TT未被修复，仅后代群体中

TT

浓度的稀释链的非准确转移，导致突变机率的增加E.colik12w.t.60

Recombinative—Repair(strandtransferrepair)AfterreplicationrepairError-proneRecA,DNApolymeraeligasegenesbeneeded

Recombinative—RepairAfter617.3.2.4.SOSrepair(U.V.reactivationorWreactivation)JeanWeigleE.coliE.coliE.coliλ8010100mut.95%50%10%

DamagedDNAofphageberepairedinE.coliASOSrepairinE.colihavetobeinducedbyU.V.(A&B)HighfrequencymutationbySOSrepair(Error-prone)ABC7.3.2.4.SOSrepair(U.V.rea62DNAdamaged300XsignalRecAcleavesLexA

SOSUmuCmutation---Beforeinducing.LexA-p

Rec-A,UmuC…11genesNeg.repression---U.V.damageDNASignal(S.S.DNAtailor5NtS.S.DNA)机制DNAdamaged300XsignalRecAcle63β-galactosidaseasreportgene

withaUVcellswithlacoperonundercontrolofumuDCpromoter

umuDCtranscriptionisUV-inducibleβ-galactosidaseasreportgene64RecA-P;三种功能●DNA重组●与S.S.DNA结合●少数蛋白的proteinase当DNA正常复制时（无复制受阻，无DNA损伤，无TTdimer）

RecA-p不表现

proteinase活性!RecA-P;三种功能●DNA重组●与S.S.65当DNA复制受阻/DNAdamaged能量大量消耗细胞内原少量的RecA-p与

S.S,DNA结合激活RecA-p的proteinase活性修复损伤LexA-p降解RecA-p高效表达300timesupSOSopen当DNA复制受阻/DNAdamaged能量大量消耗细胞内66当DNA复制度过难关后SOSrepair:error-prone极强的“竭尽全力，治病救人”修复机制（正常状态下，SOS是关闭的）RecA-p很快消失LexAgeneonSOSoff当DNA复制度过难关后SOSrepair:error-677.3.2.5.突变的形成DNA未经修复经过修复/校正

死亡突变率降低倾向差错修复(间接）

(重组修复，SOS）避免差错修复（直接）(光修复，切补修复)形成突变不形成突变DNAdamaged/mispairing物理诱变，化学诱变，自发突变突变是在修复过程中形成的（非准确的修复）7.3.2.5.突变的形成DNA未经修复经过修复/校正687.3.3.基因的回复突变

（backmutation/reversemutation）7.3.3.1.回复突变的概念w.t.mutant(phenotype)mutation(lowF.)backmutation(verylowF.)7.3.3.基因的回复突变7.3.3.1.回复突变697.3.3.2.回复突变的分子机制a)AGC(Ser)

ACC(Thr)

AGC(Ser)b)AGC(Ser)

AGG(Arg)

AGT(Ser)c)AGC(Ser)

AGG(Arg)

AAG(Lys)

ifSer≈Lysd)Intragenicsuppression第二位点突变引起的基因内校正密码子间两次错义突变的互补7.3.3.2.回复突变的分子机制a)AGC(Ser70e.g.trp.A---UGG174----------GGA210---(w.t.)(lys)(Gly)backmutation(Cys)

（Gly）----UGG174-----------GGA210--------UGG174----------GGA210--------UGC174-----------GAA210----无活性结构CA无活性结构

(Lys)(Glu)蛋白质构型吻合酶分子具有活性高温敏感性？！e.g.trp.A---UGG174----------71Howtodistinguishbtwbackmut.andintragenicsuppressionbygeneticassay?----UGC

174-----------GGA210--------UGG174----------GAA210--------UGC174-----------GAA210----w.t.(phenotype)Intragenicsuppression---UGG174----------GGA210---(w.t.)backmutationHowtodistinguishbtwbackmu72Intergenicsuppression—2（Su＋）NonsensesuppressorIntergenicsuppression—2（Su＋）73

MissensesuppressorIntergenicsuppression—2AGAUCUGlyArgGlyUCUUCUGGACCUGlyGlyMissenseIntergenicA74

Intergenicsuppresion-3(多聚体酶类构型的吻合)Subunit-1Subunit-2+ActiveformABB+InactiveformabBackmutActiveform+Intergenicsuppresion-3(多聚体酶757.4.基因重组交换的分子机制7.4.基因重组交换的767.4.1.自然界的DNA分子均是重组体

(recombinant)变异是生物进化的重要因素变异是自然选择的重要基础7.4.1.自然界的DNA分子均是重组体变异是生物进化的重77可遗传的变异突变（点突变，染色体变异）频率低，突变修复遗传重组交换染色体的自由组合染色单体间的交换分子克隆和转基因技术

(invitro)普遍发生自然界DNA分子均是重组体突变压改变群体的基因频率

Pn

=(1-P0)n可遗传的变异突变（点突变，染色体变异）频率低，突变修复遗传重787.4.2.遗传重组的类型a)HomologousRecombination

occurbtwHomo-chromosome/Homo-seq.sister&non-sisterchromatidstransformation,transductionconjugation,transfection…

largefragmentexchange

Recombinationsiteisinhotspotmostly

Recombinasebeneeded(RecA,BC)7.4.2.遗传重组的类型a)HomologousRe79Intermolecular（singlecrossover;doublecrossover）Intramolecular(directrepeat;invertedrepeat)Intermolecular（singlecrossov807.4.3.Homologousrecombination7.4.3.1.前期的两种假说a)Breakage—rejoining(1930Darlington)abABaBAb7.4.3.Homologousrecombinati81b)copy-choice(1931Belling)染色体的交换与复制有关！b)copy-choice(1931Belling)染82c)Breakage–rejoiningmodel的证据-1E.coligrowinginamediumofC12&N14infectedwithphageofABC

／abcABCabcC12N14ABCabc×DNA分子的交换是断裂—错接的过程ABcabCRareRecom.abcabcABCmostC13N15C12N14E.colic)Breakage–rejoiningmodel的83

Breakage–rejoiningmodel的证据-2E.coligrowinginamediumofC12&N14infectedwithphageofAB

／

abABC13N15abC13N15C12N14ABab×DNA分子的交换与复制是两个不同的过程aBAbrareABabAbaBmostE.colirareBreakage–rejoiningmodel的证据847.4.3.2.同源重组的分子模式a)Illegitimatesegregation—基因转换

(geneconversion)Neuraspora

A

xaaAAAAAaA

a

AaAAAA

a

Aa

AaAaa

A

aa

Aa

AAA

a

Aaa

A

a

AA

aaa

A

Aaa

Aaaaa

A

A

aa

Aaaaa

Aa

AA

aaaaa

A

a

AA

a5/33/52/64/4A:ameiosisaaAAaAaA7.4.3.2.同源重组的分子模式a)Illegit85Illegitimatesegregation

—

geneconversion特定基因被同源染色体上等位基因影响所发生的替代现象！Howdoesthealleleconversion?Illegitimatesegregation特定基因被86Drosophila(ry

黄嘌呤脱氢酶基因)afeww.t.ry41–

ryx–

(♀)×ryx–ryx–

(♂)w.t.allele非全同等位基因内Alleleconversion？回复突变！基因间互补！非全同等位基因内交换！

now.t.ryx–

ryx–

(♀)×ry41–

ry5–

(♂)Drosophila(ry黄嘌呤脱氢酶基因)afew87afeww.t.ry41–

ryx–

(♀)×ryx–ryx–

(♂)w.t.allelery41–

ryx–

(♀)×ryx–ryx–

(♂)♀×♂afeww.t.♀×♂afeww.t.非全同等位基因内Alleleconversion？回复突变！基因间互补！雌果蝇染色体交换！afeww.t.ry41–ryx–(♀)88now.t.雄果蝇染色体不发生交换！ryx–

ryx–

(♀)×ry41–

ry5–

(♂)非全同等位基因内Alleleconversionryx–

ryx–

(♀)×ry41–

ry5–

(♂)♀×♂butnow.t.

！now.t.雄果蝇染色体不发生交换！ryx–ry89afeww.t.非全同等位基因内交换！Drosophila(ry

黄嘌呤脱氢酶基因)ry41–

ryx–

(♀)×ryx–ryx–

(♂)w.t.allelenow.t.ryx–

ryx–

(♀)×ry41–

ry5–

(♂)afeww.t.非全同等位基因内交换！Drosop90

b)同源重组的基本特征

同源染色体的联会配对（Synapsis）

DNA分子在交换位点发生断裂和错接

S.S.DNA-end是发生交换的重要信号RecBCD;nicksmadeinhomologousDNARecA;leadstobrokenS.S.DNA

endsmove

andcross-overtopairwithcomplementin

otherduplexb)同源重组的基本特征同源染色体的联会配对（Syn91c)同源重组的分子模式1964．Holliday.R

HollidayIntermediateWhitehouse

PolaronHybridDNAmodelc)同源重组的分子模式1964．Holliday.R92

HollidayIntermediatestructureHollidayIntermediatestructu93Strandinvasion;D-loopformationScanforhomology.NickStrandexchange(RecA+SSB)RecBCDunwindsDNAandleaves3′–protrudingend,coatedwithRecA

de

fGC

DEFATSNP:

e(G/C)ChisiteSNP:E

(A/T)Strandinvasion;D-loopformat94Branchmigration(RuvA+RuvB)Crossoverresolution(RuvC)Noncrossoverresolution(RuvC)Repairgapsandsealnicks

(Hollidayjunction)Branchmigration(RuvA+RuvB)95Branchmigration(RuvA+RuvB)Crossoverresolution(RuvC)Noncrossoverresolution(RuvC)Repairgapsandsealnicks

(Hollidayjunction)de

fGA

DEFTCde

fGA

DE

F

CTBranchmigration(RuvA+RuvB)96Noncrossover(heteroduplex,orpatch)recombinants

Crossover(splice)recombinants

SNP:E(A/T)

e(G/C)DE

Fde

fAGTCDEFde

fAGTCAGCTDEFde

fNoncrossover(heteroduplex,or97CTATde

fde

fdE

fdE

fDeFDEFDEFDEFE5e3=DF4df4=GCAT

heteroduplexregionreplicationcorrectCAdefde98第二条染色单体内C/T的校正可能第一条染色单体内C/T校正可能C/T

A/TC/T

C/G

未校正C/T

A/TC/T

C/G未校正AAAAAACCAACCAACCAAACAACCTTTTTTGGTTGGTTGGTTTGTTGG(6:2)(4:4)(5:3)AACCCCCCAAACCCCCTTGGGGGGTTTGGGGG

(2:6)(3:5)AAACACCCTTTGTGGG(4:4)杂合DNA区域SNP的校正与遗传异常分离第二条染色单体内C/T的校正可能第一条染色单体C/T99

交换不是发生在1bp间的断裂—错接事件

交换涉及两条D.S.DNA之间的

hollidayintermediate,

branchmigration,

isomerization,resolution等一系列过程

交换位点两端出现

Pt:Rt=1:1正常分离比例conclusionpalaronhybridDNAmodel交换不是发生在1bp间的断裂—错接事件交换涉及两条100

交换发生在某allele内，其SNP可能因交叉移

动，而被包括在heteroduplexregion之内，

从而引起geneconversionconclusion

geneconversion的机率,随SNP位点离交换

位点（chisite）的距离增大，而表现逐渐变

小的极性梯度的效应交换发生在某allele内，其SNP可能因交叉移conc101e.g.yeastArg4

（JackSzostak

1989）7multip—alleles(非全同等位基因内的SNP)NsphI,Acc-I,R-V,Bel-I,Dra-III,Aha-II,Bgl-II在杂合二倍体中，基因转换频率从5’

3’极性递减NsphIAcc-IR-VBel-IDra-IIIAha-IIBgl-II9.6%7.46.23.42.81.50.45’3’Why?重组断点e.g.yeastArg4（JackSzostak102RecB,C,DHelicase（ATPase）tounwindDNA&exonucleaseRec-b,c,dmut.Crossingovergodown100XRecBCDcomplex300kd,produce

free

S.S.DNA-endat4-6bpdownstreamChisite,helpRecAtobindS.S.DNA-end.Strandinvasionexchanged)交换相关酶类ChisiteRecB,C,DHelicase（ATPase）toun103

RecBCDrecognition

GCTGGTGGTseq.cutS.S.DNAat4-6bpdownstreamChisiteχ(c