气相色谱法测定蛋白油中樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯的含量

气相色谱法测定蛋白油中樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯的含量

杏仁是姜科豆科植物阳春沙的干燥成熟果实。具有除湿、益气、止咳、健脾、消食、安胎的功效。现代研究表明砂仁有促进胃肠机能、促进消化液分泌、抗炎镇痛、抑制血小板集聚、利胆及抗氧化等作用,其主要有效成分是挥发油,其中樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯等含量较高。砂仁中所含挥发性主要成分的生物活性研究在国内外多有报道,因此,常将砂仁中挥发性成分的含量作为评价砂仁药材质量的指标。本文采用顶空气相色谱法测定了砂仁中挥发性成分的含量,现报道如下。1仪器和试剂盒1.1色谱站和自动顶空进样器岛津-2010气相色谱仪,配有FID检测器,GC-solutionversion2.30色谱工作站;自动顶空进样器(AutoHS,成都科林);SARTORIUSAGBP211D十万分之一型电子天平(赛多利斯);100μL微量进样器(迪马公司)。1.2-乙酸龙脑酯对照品樟脑对照品(批号:747-200106),龙脑对照品(批号:110881-200504),乙酸龙脑酯对照品(批号:110759-200303)均由中国药品生物制品检定所提供;砂仁购于广州济和堂药业有限公司,经笔者鉴定为姜科豆蒄属植物阳春砂AmomumvillosumLour.的干燥成熟果实;其余试剂均为分析纯。2方法和结果2.1色谱条件及色谱条件色谱柱:RTX-5毛细管柱(30m×0.53mm×0.25μm);载气:高纯氮气,流速:30mL/min,H2流速:40mL/min,Air流速:400mL/min;温度:进样口:250℃,色谱柱:80℃,检测器:260℃;分流比:1∶1;顶空条件:炉温110℃,进样针温度:120℃,传输线温度:120℃,样品平衡时间:37min,加压时间:15s,放空时间:20s,进样时间:1min,进样量:0.7g。色谱图见图1。2.2溶液的制备2.2.1内标溶液精密量取水杨酸甲酯0.10mL,置10mL容量瓶中,以甲醇稀释并定容,作为内标溶液。2.2.2对照品溶液的制备分别精密称取樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯对照品适量,以甲醇溶解并稀释,制成樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯浓度分别为2.609mg/mL、1.228mg/mL和3.612mg/mL的混合溶液,作为混合对照品溶液。2.2.3标准溶液的配制取砂仁药材粉末0.7g,精密称取,置顶空瓶中,精密量取混合对照品溶液100μL,加入内标溶液50μL,加盖密封,作为标准溶液。2.2.4试验溶液取砂仁药材粉末0.7g,精密称取,置顶空瓶中,加入内标溶液50μL,加盖密封,作为供试品溶液。2.3标准曲线的绘制取0.7g砂仁粉末6份,精密称取,置顶空瓶中,精密量取混合对照品溶液50、100、150、200、250、300μL于上述顶空瓶中,分别加入内标溶液50μL,加盖密封,按测定方法测定,以标准品与内标物的峰面积之比Ai/As为纵坐标,标准品质量m为横坐标,绘制标准曲线,结果见表1。2.4标准物质回收率试验根据“2.3”项下6份试样的测定结果,以实测量与加入量的峰面积比分别计算龙脑、樟脑及乙酸龙脑酯的加样回收率,结果见表2。2.5检测限的确定精密吸取“2.2”项下制备的标准储备溶液适量,置顶空瓶中,测定信噪比,确定信噪比约为3时的检测量作为检测限,结果樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯的检测限分别为0.6、1.0、0.5μg/mL。2.6标准加入法测定樟脑、龙脑及乙酸龙脑酯含量照“2.2”项下方法配制标准溶液和6份供试品溶液,顶空进样并记录峰面积,采用标准加入法的计算方法,得樟脑、龙脑及乙酸龙脑酯的含量分别为0.058%、0.024%、0.066%,RSD分别为2.7%、3.1%、2.1%。2.7供试品溶液制备内标溶液:精密移取水杨酸甲酯200μL,置2mL容量瓶中,以甲醇稀释并定容,作为内标溶液。标准溶液:精密移取“2.2”项下混合对照品溶液2mL,置5mL容量瓶中,甲醇定容,加入内标溶液100μL,摇匀,作为标准溶液。供试品溶液:取6份砂仁粉末150mg,精密称取,分别置10mL容量瓶中,精密加入甲醇5mL,摇匀,称重,超声10min,放置24h后再超声10min,用甲醇补回原重,加入内标溶液100μL摇匀,静置,取上清液作为供试品溶液。以“2.1”项下色谱条件测定,进样量1.0μL,测定樟脑、龙脑及乙酸龙脑酯的含量分别为0.059%、0.025%、0.068%,与顶空气相色谱法的测定结果基本一致。3讨论3.1赤字条件的选择3.1.1顶空瓶氮气平衡温度考察了80、90、100、110℃不同平衡温度下各待测组分的峰面积,温度升高各待测各组分的峰面积显著增大,由于实验中所使用的顶空瓶气垫最高耐受温度为110℃,故选用110℃为平衡温度。3.1.2峰面积的确定考察了25、30、35、40、45min不同平衡温度下各待测组分的峰面积,在25min到35min,各待测组分的峰面积随平衡时间的延长而增大,35min后峰面积已无明显变化,说明已达到动态平衡,故选用37min。3.1.3样品量的确定考察了0.5、0.7、0.85、1g不同进样量下各待测组分的峰面积,样品量大于0.7g后,各待测组分的单位质量峰面积逐渐减小,说明进样量较多时,样品挥发不完全,故选用0.7g。3.2挥发性成分的检测尝试在样品中加水作溶剂,结果表明,挥发性成分的分析灵敏度下降,可能是由于砂仁中的挥发性成分在水中溶解性不好。也考察了在样品中加有机溶剂二甲基亚砜,结果表明,挥发性成分含量更低,原因可能是高温下的有机溶剂在体系中分压增大,严重抑制了待测组分的挥发。还通过改变水和二甲基亚砜的比例作为混合溶剂,综合考察发现,样品直接加热进行顶空分析灵敏度最高。3.3龙脑及其他两组分rsd实验样品为药材粉末,标准品需配制为溶液,为了消除基质不同给测定带来的影响,故选用标准加入法。单独使用标准加入法测定,结果相关系数r在0.992~0.998之间,龙脑的RSD为3.8%,其他两组分RSD均为2.8%。实验发现,在标准溶液和供试品中加入内标溶液,可以避免由于进样的不一致性及样品歧视效应导致的误差,从而得到更理想的线性关系和精密度,因此,本实验选用标准加入法和内标法结合进行定量分析。3.4仁粉末在静置前后的超声测定砂仁样品中樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯的平均含量分别为0.052%、0.023%、0.062%。实验中发现,砂仁粉末在静置前超声10min和