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文档简介
质谱与功能组学平台送样指南、检测工程及技术方案一、送样指南蛋白质组留意事项:建议每个分组设置生物学重复≥5个,最少3个;收集样品后需马上分装,避开反复冻融;组织样本在冻存前需用PBS清洗,去除外表的污染物。代谢组留意事项:建议植物样品生物学重复≥8个;模式动物及微生物样品生物学重复≥10个;收集样品后需马上分装,避开反复冻融;组织样本在冻存前需用PBS清洗,去除外表的污染物。二、局部检测工程和技术方案检测工程 争论方案及具体应用定性蛋白质组学定量蛋白质组学修饰蛋白质组学蛋白全长测序蛋白药物表征分析
MALDI-TOF聚体,以及对样品纯度进展评估;Pull-down/LC-MS/MS而实现对蛋白质的鉴定;修饰蛋白定性分析:蛋白质修饰位点鉴定和蛋白质修饰谱分析;多肽质谱鉴定:对多肽序列信息进展检测,从而获得多肽的序列或翻译后修饰信息。Label-free通过LC-MS/MS技术对蛋白质酶解肽段进展质谱分析,依据质谱数据比较不同样本间相应肽段的信号强度或谱图数,从而对肽段对应的蛋白质进展相对定量;DIA离子进展扫描,从而无遗漏、无差异地获得样本中全部离子的全部碎片信息;iTRAQ/TMT样品间蛋白质的相对含量差异;PRM基于高区分、高精度质谱的离子监视技术,可实现目标肽段的靶向筛选,采集全部子离子信息,从而对目标蛋白/肽段进展相对/确定定量。白质富集方法为TiO2或IMAC乙酰化:通过抗体对乙酰化肽段进展富集,进展质谱检测,从而对乙酰化蛋白实现定性定量分析;量分析;定。对于未知序列的功能蛋白或酶进展全序列从头测序6种蛋白定,在得到碎裂肽段片段的同时,经过肽段之间的拼接完成蛋白序列的测定。抗体分子量测定〔重链及轻链分子量〕;抗体氨基酸序列分析〔序列全掩盖分析〕;抗体糖型分析〔基于分子量测定〕;抗体变构体分析〔氨基酸取代、电荷异构体〕;抗体翻译后修饰分析;抗体糖谱分析;抗体二硫键鉴定和定量;抗体高级构造及稳定性分析;抗体纯度和杂质分析;抗体宿主细胞蛋白〔HCP〕分析等。定量代谢组学基于代谢流建模的多组学技术方案
非靶向代谢组学:LC-MS/MS〔主要是相对分子量1000Da以内的内源性小分子化变化的生理机制;的生物活动机制与原理。脂质主要可分为8脂类、固醇脂类、孕烯醇酮脂类、糖脂类、多聚乙烯类;异性地检测与分析。靶向代谢组检测物质:氨基酸〔40〕、长链游离脂肪酸〔30〕、短链脂肪酸、胆汁酸、有机酸、激素、维生素、极性小分子高通量靶向脂质组学:基于LC-MS/MS技术,可以高通量模式,批量准确鉴定代谢物,靶向检测到1000+种脂质,主要包括甘油脂类、鞘脂类和固醇脂类。〔蛋白组及代谢组数据也可〕数据建立代谢流分析模型〔注:建模工的快速定量分析,重复进展模型完善和优化〕;培育细胞或细菌,通过质谱〔Q,MRM〕同时定量特定代谢途径〔TCA〕大量中间产物或终产物,进展代谢模型进一步分析,确定底物流量和代谢途径;〔工艺优化〕:在前期基因组及转录组建模的根底上,针对工程菌株最正确的发酵条件及生
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