五叶草莓对小鼠胃溃疡的抑制作用及其机制

五叶草莓对小鼠胃溃疡的抑制作用及其机制

五叶草（又名泡沫和芽泡）属于蔷薇科草科多年生草本植物。这是福建省秦岭山区的野生植物。当地人收集大量白色成熟果实，吃实验用。当地人的草用中药汤剂治疗上腹部疼痛。我们根据民间应用经验,将其全草经过浸泡煎煮后得到其煎液,在前期毒理实验的基础上对其进行抗溃疡作用的研究,为进一步开发应用五叶草莓提供依据。1实验材料1.1催化剂、试剂盒五叶草莓全草采购自陕西秦岭山区,将五叶草莓提取物浓缩成浓度为5g/ml。无水乙醇(分析纯),西安三浦精细化工厂,批号050908;NO试剂盒(硝酸还原酶法),由南京建成生物工程研究所提供,批号20051122;吗丁啉,西安杨森制药有限公司出品,批号050823136。1.2动物ICR小鼠,体重18～22g,雌雄各半,购自陕西省中医医院实验动物中心。常规喂养。(合格证号:医动字第08-24)。1.3热电升温水浴箱721分光光度计,上海市第三光学仪器厂生产;电热恒温水浴箱,由北京西城区医疗器械厂生产(型号:DR2HW22);LD5-2A低速离心机(北京医用离心机厂)。1.4统计处理计量资料以x¯±sx¯±s表示,采用t检验。2实验方法2.1药渣、药渣、药渣的制备取五叶草莓全草1000g,水煎60min后滤出药渣,药渣加水再煎60min,合并两次煎液浓缩至200ml,(即5g/ml),置4℃冰箱中保存备用。2.2电泳模型组5.9,3.440只小鼠随机分成溃疡模型组、五叶草莓提取物低浓度治疗组五叶草莓提取物高浓度治疗组及甲氰咪胍组(0.2g/kg体重)每组各10只。按参考文献制定给药方法。各组动物按照实验设计要求给予灌胃(模型组:蒸馏水;五叶草莓组:低,高浓度分别为0.9,3.6g/kg,相当于临床用量的3和12倍。;甲氰咪胍组:甲氰咪胍)每组均连续给药14d。于末次给药后以1ml无水乙醇灌胃,4h后脱颈处死,将小鼠的胃沿胃大弯处剪开,翻转后用清水洗去内容物,在生理盐水中浸泡10min后展平于玻片上,在装有物镜测微尺的显微镜下观察溃疡发生情况,按照文献的方法,测定溃疡总长度的平均值作为溃疡指数,并计算溃疡抑制率:胃溃疡抑制率=(胃溃疡模型组溃疡指数-剂量组溃疡指数)/胃溃疡模型组溃疡指数×100%用1%甲醛溶液固定胃标本。参考文献方法评定溃疡数。0级:没有病变;1级:有出血、糜烂或发生溃疡点(<1mm);2级:1～5个小溃疡(>1mm,<3mm);3级:6个上小溃疡或1个大溃疡(>3mm);4级:2个以上大溃疡及穿孔性溃疡。2.3动物分组及剂量小鼠开腹后,以直径1.5mm的烙铁烙伤胃腺部4s,缝合,消毒。手术成功后将动物随机分为4组,分别为模型组、盐酸雷尼替丁阳性﹑损伤模型组、五叶草莓高﹑低剂量组,另设10只未造模小鼠为正常组。术后正常饲养,第2天开始灌胃给药,每日灌胃一次,连续14d。动物分组及剂量。血清一氧化氮(NO)微量测定采用比色法测定,测定步骤严格按照试剂盒说明进行。2.4碳素墨水推进试验小鼠40只,雌雄兼用,体重18～22g,分为4组,禁食24h,第一组灌胃给吗丁啉,第2,3组分别灌胃给五叶草莓提取物,0.1ml/10g体重,生理盐水组给同体积生理盐水,给药60min后灌以碳素墨水0.1ml/只,20min后处死动物,迅速取出肠管,量取碳素墨水运行距离和小肠的全长,计算碳素墨水在小肠中的推进率。3mds-b模型小鼠腐烂指数的变化如表1所示,五叶草莓煎液在低,高浓度均可显著降低小鼠胃溃疡的溃疡指数,与模型组相比有显著性差异。如表3所示,五叶草莓煎液在低浓度时可显著提高小鼠小肠推进功能,与模型组相比显著性差异;而高浓度时对小鼠肠推进运动无显著性影响,与模型组相比无显著性差异。4对胃粘膜的保护作用本文探讨了五叶草莓提取物在抑制小鼠实验性胃溃疡上的活性。口服不同剂量提取物的小鼠,溃疡的发生率明显的降低。胃溃疡的发病过程复杂,与很多因素有关。发病机制主要是胃黏膜防御因子与攻击因子平衡失调。只有二者处于平衡状态时,才能保持胃黏膜屏障的完整性,发挥正常功能保护胃黏膜。其中NO是重要的胃粘膜保护性因子,而胃肠蠕动能力决定毒素在胃肠道的停留时间和对黏膜的刺激程度。本实验采用五叶草莓煎液灌胃治疗的小鼠,溃疡面积明显缩小,说明五叶草莓有促进溃疡愈合的作用。模型组在胃溃疡发生时伴随着溃疡指数的增加,与空自对照组相比.有显著性差异(P<0.01)。在另一组实验中,胃溃疡形成后可见损伤模型组血清NO含量大幅度降低,而五叶草莓煎液灌胃治疗的小鼠均可见血清中NO含量显著提高(P<0.05,P<0.01)。显示出应激状态的机体可能产生适量的N0来调节胃部血管平滑肌舒缩。增加血流量。以保护局部胃粘膜,从而加速溃疡愈合。本实验说明五叶草莓具有较强的胃粘膜保护作用。这种保护作用的机理还有待研究。同时胃肠推进蠕动增强有利于胃刺激因子排除,减少其对胃肠粘膜的侵害。在体小肠推进运动试验中,五叶草莓提取液低浓度时具有明显的促进胃肠动力作用(P<0.01),而在高级剂