生物化学课件：第四节 蛋白质的性质

第四节蛋白质的重要性质一.胶体性质蛋白质的分子量1万~100万之间，其分子直径1~100nm之间，在胶体颗粒的范围。所以蛋白质具有胶体性质，如布朗运动、光散射、电泳、不能透过半透膜及具有吸附能力等。二.相对分子量测定方法：超速离心法凝胶过滤法聚丙烯酰胺电泳等三.

两性解离及等电点蛋白质分子上有许多可解离的基团，如所以蛋白质具有两性性质1.两性解离肽链末端的氨基肽链末端的羧基酸性aa残基的侧链碱性aa残基的侧链三.

两性解离及等电点2.蛋白质的带电情况蛋白质的带电情况与溶液的pH有关+-0NetChargeofaProtein34567891011EnvironmentalpH三.

两性解离及等电点3.蛋白质的等电点+-0NetChargeofaProtein34567891011EnvironmentalpH当蛋白质在一定的pH的溶液中，所带的正负电荷相等，它在电场中既不向阳极也不向阴极移动，此时溶液的pH值叫做该蛋白质的等电点(pI)。等电点(pI)三.

两性解离及等电点3.应

用电泳分离纯化蛋白质蛋白质受到某些理化因素的影响，其空间结构发生改变，蛋白质的理化性质和生物学功能随之改变或丧失，但未导致蛋白质一级结构的改变，这种现象叫变性作用（denaturation）。

1、蛋白质变性的概念四.蛋白质的变性2、蛋白质变性的因素物理因素：加热、紫外线、超声波、高压等；化学因素：强酸、强碱、脲、盐酸胍、去垢剂、重金属盐等；四.蛋白质的变性生物活性丧失（酶）；溶解度降低，粘度增大，扩散系数变小（蛋清）；基团位置改变；对蛋白酶敏感性增大。3、蛋白质变性后的表现四.蛋白质的变性4、蛋白的复性蛋白质的变性作用若不过于剧烈，则是一种可逆过程。高级结构松散了的变性蛋白质通常在除去变性因素后，可缓慢地重新自发折叠形成原来的构象，恢复原有的理化性质和生物活性，这种现象称为复性(renaturation)。四.蛋白质的变性大多蛋白质变性后，很难复性。五、蛋白质的沉淀加入适当的试剂使蛋白质分子处于等电点状态或失去水化层，蛋白质的胶体溶液就不在稳定并将产生沉淀。能使蛋白质沉淀的试剂有：

1）高浓度中性盐

（NH4)2SO4、Na2SO4、NaCl

（中和蛋白质的电荷）这种加入盐使蛋白质沉淀析出的现象称为盐析，用于蛋白质分离制备。2）有机溶剂

丙酮、乙醇

(破坏蛋白质水膜)五、蛋白质的沉淀加入适当的试剂使蛋白质分子处于等电点状态或失去水化层，蛋白质的胶体溶液就不在稳定并将产生沉淀。能使蛋白质沉淀的试剂有：3）重金属盐

Hg2+、Ag+、Pb+

（与蛋白质中带负电基团形成不易溶解的盐）

4）生物碱试剂

苦味酸、三氯乙酸、目酸、钨酸等（与蛋白质中带正电荷的基团生成不溶性盐）

六.

紫外吸收和颜色反应1.紫外吸收

由于蛋白质中的Tyr、Trp

和Phe

残基在紫外区有光吸收，所以蛋白质在280nm

的光波长处有最大光吸收这一特性可用于蛋白质的检测2.颜色反应

反应名称试剂颜色参与反应的基团有此反应的蛋白质或aa双缩脲反应NaOH溶液

+少量稀CuSO4溶液紫红至蓝紫2个以上相邻的肽键所有蛋白质米伦反应HgNO3+Hg(NO2)2

+HNO3+HNO2红色酚Tyr黄色反应浓硝酸+氨黄色至橙色苯Phe、Tyr乙醛酸反应乙醛酸试剂+浓硫酸紫色吲哚Trp茚三酮反应茚三酮蓝色游离氨基a-氨基Folin-酚反应碱性CuSO4

+磷钼酸-磷钨酸蓝色酚Ty