浅析痛清颗粒中芍药苷与葛根素的提取工艺研究

浅析痛清颗粒中芍药苷与葛根素的提取工艺研究【摘要】目的优选痛清颗粒中芍药苷与葛根素的提取工艺。方法采用4因素3水平的正交试验设计法,以芍药苷、葛根素转移率综合评分为考核指标,筛选影响提取工艺的因素。结果实验设计三因素没有显着性影响。结合生产实际需要,痛清颗粒中芍药苷与葛根素的最佳提取条件是：加入22倍量水提取3次(12,5,5),提取2h(,,)。结论此条件为痛清颗粒中芍药苷和葛根素的最佳提取工艺。

【关键词】痛清颗粒；芍药苷；葛根素；正交试验；提取工艺

Abstract：ObjectiveTooptimizethetechnologyofextractingPaeoniflorinandPuerarinfromTongqingGranules.MethodsTheexperimentusedtheorthogonalexperimentaldesign(4factorsand3levels)withtheshift-rateofPaeoniflorinandPuerarinasexperimentalcriterioninscreeningthefactorsaffectingthetechnologyofextractingTongqingGranules.ResultsAllthe3factorsdesignedintheorthogonalexperimentnon-signifantlyaffectedtheextractingtechnology.Inconsiderationoftheindustrialpractice,thebestconditionofextractingtheconstituentsfromTongqingGranuleswasdecided：waterextractionfor3times,extractingwith12foldwaterfor1hoursforthefirsttime,with5foldwaterforhoursforthesecondtime,andwith5foldwaterforhourforthethirdtime.ConclusionTheconditionistheoptimizedtechnologyofextractingPaeoniflorinandPuerarinfromTongqingGranules.

Keywords：Paeoniflorin；Puerarin；orthogonalexperiment；extractingtechnology

痛清颗粒是由白芍、葛根等中药精制而成的中药复方制剂,临床用于治疗头痛。白芍是毛茛科植物芍药(PaeonialactifloraPall.)的干燥根,性微寒,味苦、酸,具有养血柔肝、缓中止痛、敛阴收汗之功效[1]。葛根是豆科植物野葛Puerarialobata(Willd.)Ohwi的干燥根,性凉,味甘、辛,具有解肌退热、生津、透疹、升阳止泻的功效[1]。本试验对其提取工艺进行了研究,以芍药苷、葛根素转移率为考核指标,采用综合评分的方法获得了最佳提取工艺。现报道如下。

1仪器与试药

Waters高效液相色谱仪(美国)；16G-型高速离心机；SB5200型超声清洗机(上海Branson公司)；AEL-40SM型电子天平(日本岛津)。甲醇、乙腈为色谱纯,乙醇为分析纯,水为重蒸水。白芍、葛根等药材经鉴定,符合2005版《中华人民共和国药典》标准。芍药苷、葛根素对照品购自中国药品生物制品检定所,批号110736-200525、110752-200209。

2方法与结果

正交设计

在查阅大量文献以及预实验的基础上,发现用水作为提取溶剂时均能较好提取芍药苷、葛根素等。我们选用L9(34)正交表,对加水量(A)、提取时间(B)、提取次数(C)三因素进行了考察,以芍药苷、葛根素转移率为考察指标,综合评分,优选最佳提取工艺。因素水平见表1。表1正交试验因素水平表

含量测定

芍药苷

色谱条件：LichrospherC18色谱柱(mm×250mm,5μm),Waters515高效液相色谱仪；2487双波长紫外检测器；检测波长λ=230nm；流动相为乙腈-%磷酸溶液(14∶86)；流速为mL/min；AUFS；柱温30℃；进样量为5μL。分别配制不同浓度的芍药苷对照品溶液,在上述色谱条件下进行测定,以芍药苷进样量(X)对峰面积(Y)进行线性拟合,回归方程为：Y=6486000X+32,r=7,结果在～μg范围内线性关系良好。

葛根素

色谱条件：LichrospherC18色谱柱(mm×250mm,5μm),Waters515高效液相色谱仪；2487双波长紫外检测器；检测波长λ=250nm；流动相为甲醇-水(25∶75)；流速为mL/min；AUFS；柱温30℃；进样量为5μL。分别配制不同浓度的葛根素对照品溶液,在上述色谱条件下进行测定,以葛根素进样量(X)对峰面积(Y)进行线性拟合,回归方程为：Y=22670000X+15,r=9,结果在～μg范围内线性关系良好。

水提样品处理与测定

取水提正交设计所得样品,分别用测定芍药苷和葛根素的流动相稀释不同的倍数,充分振摇,高速离心处理,上清液用μm的微孔滤膜过滤,所得样品分别在上述测定芍药苷和葛根素的色谱条件下进行测定。

数据分析及实验结果

对正交试验测定的数据进行极差和方差分析,结果见表2、表3。表2痛清颗粒的正交试验数据极差分析表注：综合评分(%)=芍药苷转移率×50%+葛根素转移率×50%。表3痛清颗粒的正交试验数据方差分析表注：F(2,2)=。

从表2极差分析结果可知,因素影响CBA,但3因素3个水平之间均无显着性差异(由表3可知)。由极差分析得出的最佳工艺组合是A3B1C3,即加水量为药材用量26倍,提取3次,第1次h,第2、3次每次各h,3次的加水量分别为14、6和6。而表2中最佳的实验组合是A2B2C3,芍药苷和葛根素的转移率均在90%以上,即加水量为22倍量,提取3次,分别提取、、h。对A3B1C3和A2B2C3进行重复实验,结果表明,两种有效成分的转移率均在85%以上,考虑到生产实际,选择最佳的提取工艺条件是A2B1C3。

3小结

提取时间是影响中成药生产中中药药效成分浸出的一个重要因素,一般认为长时间加热会破坏有效成分。本实验发现,多次短时间连续提取对芍药苷、葛根素的浸出有利,时