微生物实验室质量控制

微生物试验室质量控制

微生物试验室存在的主要问题微生物检验人员配置不足；硬件很好，软实力较差送检率不高，标本合格率低对特殊耐药表型关注度不够，不能及时复核仪器药敏折点不能及时更新，药敏措施单一微生物LIS系统建设存在缺陷；专业人员较少使WHONET软件统计数据；与临床沟通较差，较少参加临床会诊；临床医生对微生物检验认识不足，缺乏信任；质量控制是精确检验成果的确保全方面质量控制：检验前检验中检验后检验前途序申请单应涉及标本起源和诊疗感染类型和/或目的微生物宜提供抗菌药物使用信息微生物采集及运送指南微生物采集及运送指南应涉及：不同部位采集措施例如血培养：消毒技术、合适标本量、诊疗成人不明原因发烧、血流细菌感染宜不同部位2套、每套2瓶（需、厌氧各一瓶）检验前--不合格标本检验单与标本容器上的信息不符：如姓名不符、标本种类不符、检测目的不符等；痰、环境样本、皮肤、中段尿等样本申请厌氧培养；未用无菌容器；标本量太少；检验前途序标本接受制定接受原则（如：肉眼可见渗漏，标本类/量，正确保存，预防拭子干燥，合适运送培基等）评估合格性，反馈成果不合格痰处理尽快告知医护（病房），及时告知患者（门诊）以便重新采集。检验中质量确保人员试剂培养基设备检验过程：措施确实认SOP生物参照区间测量精确性内部质量控制体系标本质量评估人员基本要求上岗前辨色力有关教育背景专业技术及知识培训（至少每年一次）熟悉微生物SOP、消毒灭菌、生物安全人员数量满足服务要求《临床微生物学试验室建设基本要求教授共识》要求三级医院微生物室至少有固定人员6～8人，提议10人以上；二级医院微生物室至少有固定人员2～3人，提议5人以上。《临床微生物学试验室建设基本要求教授共识》三级医院微生物室面积不低于160m2，二级医院不低于60m2。人员的培训及考核培训：制定各级人员计划；内容：质量确保及管理，专业知识，生物安全、检验活动涉及的所有文件考核：能力评估新入职人员：最初6个月应进行至少2次能力评估；每人每6个月岗位胜任考核，未经过者再培训再考核；当职责变更时，或离职6个月以上再上岗时，应再培训考核；政策、技术、程序有变更时，应再培训考核人员比对：显微镜检验、分离鉴定、药敏、试验成果判断、报告等内容的一致性质控菌株微生物室检验人员正确保管、使用菌株，并确保试验室生物安全。全部菌株应由微生物主管及其委派责任人保管，采用双人双锁保管制度。起源：ATCC原则菌株、CAP质控菌株、卫生部临检中心质控菌株、山东省临床检验中心质控菌株质控菌株使用复苏：原则菌株送到试验室后，应严格按照阐明书操作。保存：将原则菌株以无菌技术接种于菌株保存管中，置-70℃低温冰箱保存。原则菌株复苏后，传代最多不得超出5代，如超出5代将不再作为原则菌株使用。原则菌株保存管一经解冻使用后，不得再次冻存。每年取出1支菌株保存管，接种相应平板，培养18～24h取得纯菌落。再挑取纯菌落接种于20支菌株保存管，置于—70℃低温冰箱保存。这20支菌株保存管可每月取出1支供临床使用。每月使用时，须从-70℃低温冰箱中拿出每月使用的菌株保存管，接种平板，孵育培养取得纯菌落。平板上生长的纯菌落能够在2-8℃冰箱中保存一种月用以当月的质控菌株传代。

质控菌株种类

鉴定用质控菌株培养基用质控菌株药敏试验用质控菌株染色试验用质控菌株质控菌株原则菌株（药敏用）种类及数量满足工作要求统计起源，传代菌株性能证明满足要求的证据及统计ATCC25922,25923，27853,29212，29213等。冷冻保存质控原代培养物,2~8℃储存传代培养物每七天制备新的传代培养物每月制备新的原代培养物试剂涉及染液（每七天一次）、化学试剂、培养基、药敏纸片等质量控制：直接分析质控物、新旧批号平行试验等。质控频率：每一批号或每一货次常用试剂及生化反应培养基质量控制

培养基（购置）保存制造商提供的质量文件①标识明确②生产日期③保质期④其他信息（配方，质控，储存条件等）外观良好、水分合适、合适的颜色和厚度、无污染、无冷冻等。无菌试验、性能验证（生长试验、克制试验、生化反应）、平行试验启封后，变化了效期及储存条件，宜统计新使用期。储存条件依从厂商。商品化培养基的验收要点外观检验外观是否完好，有无裂开、溶血、冰冻、不均衡填充，过量气泡以及明显污染的情况。标识培养基上是否有明确标识，涉及：培养基种类、生产日期（批号)、保质期、储存条件等。质量控制外观无明显不合格的培养基要进行质量控制试验，合格后方可使用。培养基（自制）名称和类型分装体积寄存条件：一般2-8℃冰箱保存1-2周配制时间和配制人员质量控制培养基配置注意要点－质量控制无菌试验：将制好的培养基再35℃孵育过夜，鉴定是否灭菌合格，若发觉有细菌生长，不能继续使用；效果检验：按不同的培养要求，接种相应的菌种，观察细菌的发育、菌落形态、色素、溶血等特征，判断培养基是否符合要求。纸片扩散法药物敏感试验质量控制频率质控菌株成果判读纸片扩散法操作规程

培养基：MH(反复性好，低克制剂，营养好)厚度：4mmPH：7.2~7.4pH低时，氨基糖甙,大环内酯↓pH高时，青霉素类的活性↑若当日不使用，储存于2-8°C，七天内使用。药敏纸片可靠供给商的纸片，纸片应同步至少有一种分析阐明的纸片批号和浓度的证书，并能提供用推荐的质控细菌进行质控的数据。－14°C如下冷冻至使用前。β内酰胺类应密封包装并冷冻，某些不稳定的药物（如IPM、头孢克罗、克拉维酸复合药）应冷冻保存直至使用。装有纸片的容器应于使用前1-2小时移出冰箱，平衡至室温才干打开。以预防纸片上冷凝水产生。当指示剂变色时，应更换干燥剂以预防过于潮湿。药敏试验失控的原因分析失控成果出现的原因可能涉及但不限于：QC菌株QC菌株使用不正确不合理储存维护不足（例如，使用同一种培养物超出1个月）污染无法生存微生物内部发生的变化（如，突变，质粒丢失）测试用具不合理的储存或运送条件污染KB法中使用有缺陷的琼脂平板（过厚或过薄，PH过高或过低），MIC法中使用的管或孔中的肉汤量不足使用损坏的平板（如有裂隙）、卡片、管使用过期的材料测试程序没有正确使用孵育的温度或环境条件没有正确地制备或者调整接种悬液从孵育时间不正确的平板上制备接种物从具有抗生素或其他生长克制复合物的鉴别培养基或选择培养基中制备接种物使用错误的纸片、辅助用具纸片放置不当（例如，没有充分接触琼脂）没有正确判读或解释试验成果测量错误录入错误仪器功能不正常或超出校准范围（例如比浊仪、移液管、游标卡尺等）检验程序应制定常规药敏试验措施（纸片扩散法、琼脂稀释法、微量肉汤稀释法、E试验或其他）的操作程序（含各类病原体和/或标本的检测药物、质控原则、成果解释等）；抗菌药物敏感性试验措施涉及纸片扩散法、稀释法（琼脂稀释法、肉汤稀释法）、浓度梯度扩散法（E试验）或自动化仪器检测；抗菌药物敏感性试验措施及成果判断至少应遵照上一年的原则。检验后程序成果报告应与检验的内容一致，如粪便沙门、志贺菌培养，报告“未检出沙门、志贺菌”。血培养阴性成果报告应注明培养时间。当某些对患者处理具有主要意义的试验成果达成危急值时，立即告知临床医生或有关人员。危急值至少应涉及血培养阳性成果、脑脊液显微镜检验及培养阳性成果、国家要求立即上报的法定传染病等。血液、脑脊液标本的培养鉴定应及时发送分级报告，如标本直接涂片或湿片直接镜检、培养皿的判读等。无菌部位起源标本宜报告直接涂片镜检的阳性成果。应在收到标本二十四小时内报告分枝杆菌抗酸或荧光染色成果。某种细菌耐药率异常增高或符合院感暴发的定义时应报告院感部门。对药敏成果按要求进行审核。应参加全国或地域耐药监测网。CLSI要求的药敏审核方案确保药敏试验的成果和细菌鉴定的可反复性；检验是否誊录错误，污染或使用了有缺陷的板条，平板或药敏卡；检验该患者此前的报告，以拟定以往是否分离到一样的菌株，其成果是否确认过；为确保试验反复性，使用与首次相同措施反复鉴定菌株和药敏试验。在试验室内部或参比试验室用第二种措施确认菌株鉴定及药敏；临床微生物试验室信息系统