外源性氮酮和薄荷醇促渗法制备酮康唑外用制剂

外源性氮酮和薄荷醇促渗法制备酮康唑外用制剂

托吡鲁酯（ketoconamose，ket）是一种常见的抗真菌药物。对浅表性细菌感染和各种急性和慢性真菌病有效。然而，长期使用会导致肝脏疾病等副作用，因此使用中有限制。然而经皮给药系统(TTS)由于具有避免肝脏的首过效应、毒副作用低、维持稳定持久的血药浓度、给药方便且减少给药次数等优点,近年来颇受研究者们的亲睐。在众多的开发思路中,选择有效的促渗剂是其中之一。所以如果能研制出渗透效果出色的酮康唑外用制剂,对疾病的治疗意义重大。因此本研究以酮康唑为模型药物,比较氮酮(azone,AZ)和薄荷醇(menthol,MT)的促渗作用,为研制渗透效果更强的外用酮康唑制剂提供理论依据。1材料和方法1.1计、电动公司财务高效液相色谱仪(美国SSI/LabAlliance公司),立式透皮扩散仪(上海锴凯科贸有限公司),电子天平、pH计(瑞士METTLER-TOLEDO公司),电动脱毛器(美国Oster公司)。酮康唑对照品(中国药品生物制品检定所),酮康唑样品(北京诺德恒信化工技术有限公司),薄荷醇、氮酮、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、氢氧化钠、乙醇(分析纯,国药集团化学试剂有限公司),色谱级甲醇(Fisher公司),成年健康试验犬(中国农业大学动物医院提供)。1.2分析的建立1.2.1流动相gc-ms流动相选择应符合色谱柱为ODS柱(250mm×4.6mm),流动相选择甲醇-水(80∶20),检测波长:239nm,柱温:25℃,流速:1mL/min,进样量:20μL。1.2.2标准品溶液标准品溶液a/l准确配置浓度为100、80、60、40、20、10、5、1、0.5、0.1、0.05μg/mL标准品溶液,以峰面积A对浓度c(μg/mL)进行回归,回归方程:A=19961c-6257.3,R2=0.9997。1.2.3外标法计算样品有效浓度准确称取相同质量的酮康唑对照品及样品,加流动相配制成10μg/mL溶液,各取20μL进样检测,利用外标法计算样品有效浓度为95.41%。1.2.4年内连续进样取含量为20μg/mL对照品溶液测定,一日之内连续进样5次,RSD为0.97%～3.11%;每天进样1次,连续3d,RSD为0.77%～2.87%。1.3皮肤扩散试验1.3.1犬皮的制备选取体重约5kg的雌性北京犬,安乐死后使用脱毛器剔除犬毛,选取背侧胸腰部皮肤,剥离皮下组织,用生理盐水将剥离的犬皮冲洗干净,吸干犬表皮中的水分后装入密封袋中,置于-20℃冰箱中保存备用。1.3.2透皮释放液的制备准确移取高浓度薄荷醇和氮酮于10mL容量瓶中,加入100mg酮康唑样品,再加无水乙醇至刻度线,即得含有不同浓度促渗剂且酮康唑浓度为10000μg/mL的透皮释放液。透皮接受液使用pH7.4的磷酸盐缓冲液。1.3.3透皮扩散模拟冷冻的离体皮肤在室温下解冻后,按照扩散池尺寸裁剪并固定,向释放池和接受池中分别加入pH7.4的磷酸盐缓冲液,置于透皮扩散实验仪中(35℃水浴,200r/min磁力搅拌)平衡30min,之后吸净释放池中液体,准备正式试验。1.3.4不同条件下药物浓度检测向释放池中加入2mL透皮释放液,35℃水浴,200r/min磁力搅拌条件下,分别在2h、4h、8h、12h、24h各取出2mL接受液进样检测药物浓度。1.4扩散池内温度变化将每次测定的浓度代入下列公式中,可计算出药物的累积渗透量Q(μg/cm2·h):Qn=Cn⋅V0+∑1=1n−1Ci⋅V1AQn=Cn⋅V0+∑1=1n-1Ci⋅V1A公式中Cn代表第n次取样点的药物浓度(μg/mL),Ci代表第i次取样点的药物浓度(μg/mL),A代表扩散池有效面积(cm2)。V0代表接受池体积(mL),V1代表取样体积(mL)。根据计算出的Q绘制出它对时间t的曲线即Q-t方程,方程中的斜率即表示此条件下酮康唑经皮渗透的稳态流速(Jss)。渗透系数(KP)是稳态流速(Jss)与释放池中药物原始浓度的比值,增渗比(ER)则是含不同浓度促渗剂组的渗透系数(KP)与对照组渗透系数(KP)的比值。2酮康唑间的渗透速率不同浓度促渗剂对酮康唑经皮渗透结果的影响根据表1、表2内容可知,3种浓度的氮酮和薄荷醇对酮康唑经皮渗透的稳态流速(Jss)、渗透系数(KP)和增渗比(ER)均有促进作用,除1%AZ组外,其余组稳态流速与对照组相比较均有极显著性差异(P<0.01),各组作用由强至弱依次为5%MT**>3%AZ**>3%MT**>5%AZ**>1%MT**>1%AZ。1%、3%、5%MT对酮康唑有较强的促渗作用,与对照组相比,渗透速率分别是其1.284倍、1.740倍、2.219倍,它们彼此间存在着显著性差异。经过分析,酮康唑的Jss在1%MT～5%MT间呈正相关,线性方程为:y=0.0618x+0.2769R2=0.9998。1%、3%、5%AZ对酮康唑的促渗作用有强有弱,与对照组相比,渗透速率分别是其1.034倍、1.967倍、1.483倍,3%组促渗作用明显强于1%和5%组,虽然彼此间存在着显著性差异,但渗透速率与浓度之间无线性关系。3薄荷醇的促渗作用氮酮是目前最常用的一类促渗剂,它是通过人工合成的,作用机理是通过增强脂质双分子层的流动性来促进药物通过表皮细胞的。但有研究表明,氮酮对水溶性药物的促渗作用强于脂溶性药物,但本试验未能证明这一点,酮康唑虽是一种脂溶性药物,结果却表明不同浓度的氮酮对其均有促渗作用。但是氮酮的促渗能力与其浓度无线性关系。薄荷醇属于萜烯类物质,是一种天然提取物,其促渗作用早就运用于中医,即“芳香走窜,引药上行”,“独行则势弱,佐使则有功”。薄荷醇促渗的机理是通过破坏角化细胞间质,造成角质层裂解剥脱,使表皮细胞间隙扩大,致使皮肤对外来药物的阻滞作用减小,从而促进药物经表皮细胞