cyp3a4选择性抑制剂对奥美啦唑体外对肠道首过效应的影响

cyp3a4选择性抑制剂对奥美啦唑体外对肠道首过效应的影响

传统观点认为肝脏是第一个副作用的器官，但越来越多的研究表明，口腔药物在吸收过程中可以代谢，产生肠道副作用（对于某些药物，肠道是主要的代谢器官，但关于初始副作用的研究中存在的主要问题是肝脏和肠道不能量化药物的代谢作用。本研究采用经十二指肠(id)、门脉(ipv)以及外周静脉(iv)置管方法,建立了肠道-血管通路(intestinalandvascularaccess-port,IVAP)模型并以奥美啦唑(omeprazole,OME)作为工具药,探讨了id、ipv及iv途径下药物体内代谢动力学特点,定量评价肝脏和肠道首过效应对药物生物利用度作用程度。另一方面,CYP酶系统被认为是参与药物肠道代谢的主要酶系,其中CYP3A4含量及活性最高,是人小肠最主要的I相代谢酶,占小肠CYP总量70%以上,且临床所用药物60%~70%为CYP3A4底物。本研究采用CYP3A4选择性抑制剂酮康唑(ketoconazole,Ket)预先抑制肠道CYP3A4活性,探讨了酮康唑对OME静脉及口服药动学过程的影响,以进一步研究肠道CYP3A4在药物肠道首过效应中的作用。1模型建立及数据采集1.1药品与试剂奥美拉唑(试验药物)、奥美拉唑对照品由扬州奥赛康药业公司提供;酮康唑为西安杨森公司产品。1.2实验动物♂新西兰兔[许可证号:SCXK(皖)2007-001],平均体重2.80±0.39kg,由安徽长临河公司提供。1.3实验设计与样本采集1.3.1IVAP动物模型的建立动物试验前禁食12h,自由饮水。静脉麻醉后,暴露胃右静脉并置管,以避免门脉内直接置管对其血流的影响。继而进行十二指肠置管并缝合固定。术毕,两导管末端均接肝素帽,皮下移行至背部。id和ipv导管分别给予5%高渗糖和125IU·ml-1肝素生理盐水冲洗。耳动脉置管用于取动脉血样。动物术后给予2wk恢复期,该IVAP动物模型经历2wk清洗期后可进行下轮实验。1.3.2IVAP模型定量评价OME肠道首过效应6只IVAP模型兔,分别经id(3.0mg·kg-1)、ipv(1.5mg·kg-1)及iv(1.5mg·kg-1)给予OME,于给药前及给药后2h内取耳动脉2ml。离心(4000r·min-1×10min)后取上清液-80℃冻存,HPLC测定血药浓度。以上各给药途径间均经历2wk清洗期。1.3.3肠道CYP3A4在OME肠道首过效应中作用研究采取自身交叉实验方法,6只经id、iv置管的新西兰兔,经id给予酮康唑60mg·kg-1,30min后经再id给予OME3.0mg·kg-1;经历2wk清洗期后,经id给予酮康唑60mg·kg-1,30min后再经iv给予OME1.5mg·kg-1。其取血方法同“1.3.2”项。1.4数据处理血浆药物浓度-时间曲线(C-t)下面积(AUC)、半衰期(T12)(Τ12)、清除率(CL)等参数采用DAS2.0药动学软件分析,达峰时间(Tmax)、峰浓度(Cmax)等采用实测值。绝对生物利用度(bioavailability,BA)、肝脏摄取率(hepaticextractionratio,Eh)、肠道摄取率(intestinalextractionratio,Ei)等由以下公式计算:BA=(AUCid/Doseid)/(AUCiv/Doseiv);Eh=1-AUCipv/AUCiv;Ei=1-AUCid/AUCipv.所有数据以x¯±sx¯±s表示,采用SPSS11.0统计软件进行统计分析,采用t检验及单因素方差分析考察组间的差别。2结果2.1血药浓度检测id、ipv及iv给予OME后,其药动学参数见Tab1。id给予3mg·kg-1OME,血药浓度在15min以内达到峰浓度,提示OME在兔肠道内能快速吸收,但其AUC值显著低于ipv1.5mg·kg-1和iv1.5mg·kg-1的AUC值(P<0.05)。ipv给予1.5mg·kg-1OME后,其AUC值显著低于经iv给予同剂量OME的AUC值。2.2根据计算公式，omeba、eh和ei分别为22.61%3.51%和35.71%71%4.38%和64.81%±3.85%。2.3id途径omeiii药动学参数酮康唑id预处理后,OMEC药动学参数见Tab1。酮康唑id预处理后,能明显增加id途径OME血药浓度,AUC和Cmax分别增加约4.8倍和5.4倍,CL/F明显下降(P<0.05),由对照组15.32±1.12L·h-1·kg-1下降为3.25±0.29L·h-1·kg-1,而对OMEiv药动学参数影响差异无显著性。3iiiap兔模型有报道认为,肝移植患者无肝期,采取经十二指肠给药、门脉取血样本的方法可以在人体内直接预测药物肠道首过效应,但该项技术难以大量推广。门静脉置管则可以测定吸收到门静脉的药物浓度,并可以定量分析肝脏和肠道摄取率,是一种量化肠道首过效应的重要方法。已有大鼠、狗及猴模型研究药物肠道首过效应的文献报道,但大鼠模型存活时间短以及狗和猴模型费用高等原因,使得这些模型的广泛应用受到限制。兔肠道生理学特点、通透性及肠道代谢酶与人类相似,被广泛用于临床前药物肠道通透性研究,且其费用低廉。为此,本研究建立了IVAP兔模型,该模型能够进行自身交叉对照,避免药物代谢酶多态性影响,且能够反复使用、降低实验成本。本研究中,我们应用IVAP模型对OME肠道首过效应进行定量分析。结果发现,id给予OME,其血药浓度在15min以内达到峰浓度,表明OME在兔体内能快速吸收,但其生物利用度只有22.61%,提示OME在兔体内存在首过效应。id途径AUC值明显低于ipv相应剂量AUC值,表明OME经肠道进入门脉前药物量明显减少,即发生肠道首过效应。并且根据肝脏和肠道萃取率分析,OME在兔体内经历了肝脏和肠道代谢作用。本研究中,当肠道给予酮康唑预先抑制CYP3A4活性后,能增加id途径下OME血药浓度,药动学参数AUC升高及清除率降低,但药物浓度时间曲线的斜率未发现明显改变,而酮康唑预处理过程对OME静脉药动学参数未产生明显影响,提示肝脏CYP3A4活性未受