几种植物病原真菌的拮抗作用

几种植物病原真菌的拮抗作用

由于化学农药的广泛使用，近年来，作为控制植物疾病的重要措施，病虫害防治引起了人们的高度重视。利用拮抗真菌和拮抗细菌防治植物病害,在国内外都有许多报道,特别是木霉菌(Trichodermaspp.)对多种植物病原真菌尤其是对土传植物病原真菌,如立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)、腐霉菌(Pythiumspp.)、镰刀菌(Fusariumspp.)等都有拮抗作用。立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)是菜地土壤中非常普遍的病原菌,而且具有较强的致病力,是引起蔬菜苗期立枯病的主要病原菌。我们对拮抗真菌和拮抗细菌进行了筛选,并用选出的木霉菌株F45对黄瓜苗期立枯病进行温室盆栽防治试验,现将结果报道如下。1材料和方法1.1培养基的制备拮抗菌为以往从广东省各地植物根际土壤中分离和筛选出的21个拮抗真菌菌株和32个拮抗细菌菌株。供试植物病原真菌有西瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporumf.sp.niveum)、杜鹃根腐病菌豆角和黄瓜立枯病菌(Rhizoctoniasolani)、丝瓜绵腐病菌(Pythiumaphanidermatum)及花生白绢病菌(Sclerotiumrolfsii)5种。采用的培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)和肉汁冻培养基。PDA用于真菌的培养和拮抗作用的测定,肉汁冻培养基用于细菌的培养。1.2田间接种病原菌真菌采用平板对峙法进行筛选。对于拮抗真菌,方法为:挑取生长旺盛的病原真菌菌丝块(约4mm×4mm)放在PDA平板一侧的中央,同时在相对一侧的中间放置拮抗真菌菌丝块(约4mm×4mm),两者相距约4.5cm;对于拮抗细菌,方法为:在PDA平板中央接种病原真菌,四周接种拮抗细菌(四点等距,距平板中央约3cm)。在平板中央单独接种病原真菌作对照。每种处理3次重复,在25℃的恒温室内培养,逐日观察,连续观察7～10天。然后从中筛选出抑菌谱广抑菌活性最强的拮抗真菌和拮抗细菌,将筛选出的拮抗真菌用作盆栽试验的拮抗菌。1.3抗木霉植物清风试验对黄瓜苗的枝条干燥病进行了防治和处理1.3.1防疫材料的制备在PDA培养基中活化立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani),25℃下培养3天,使菌丝长满整个培养皿,供接种用。1.3.2抗木霉丝箱s45的制备将筛选出的拮抗木霉菌株F45接种于PDA培养基中,在25℃下培养至长满整个培养皿,供拌土用。1.3.3土壤消毒试验用的土壤采自华南农业大学校园内,灭菌后供接种用。1.3.4种子处理黄瓜种子用0.1%的升汞消毒1～2分钟,再用无菌水冲洗3次,置于30℃条件下催芽,待种子萌发后再播种。1.3.5不同防治方法、不同菌量水平及耐药标准盆栽试验采用盆口直径14cm、高12cm的塑料花盆,每个花盆装灭菌土壤至离花盆口上缘约2cm的位置。试验在温室(约25℃)条件下进行,参照钟静萍等的方法,用无菌土培育已催芽的黄瓜种子,待子叶出土后移栽。试验设计了3种不同的防治处理方法:Ⅰ.立枯丝核菌与木霉菌株F45同时混入土壤中,再移栽黄瓜苗;Ⅱ.木霉菌株F45先混入土壤中,48小时后混入立枯丝核菌,然后移栽黄瓜苗;Ⅲ.立枯丝核菌先混入土壤中,48小时后混入木霉菌株F45,然后移栽黄瓜苗。上述处理方法中,立枯丝核菌菌量为1皿/盆(培养皿直径为6cm),木霉菌株F45菌量分别为1、2、3皿/盆(培养皿直径为9cm),试验设上述3种防治处理方法、3种不同菌量水平共9个处理,另设2个对照:一是空白对照,即灭菌土壤中不接菌;二是病原菌对照,即灭菌土壤中仅混入立枯丝核菌。每个处理3次重复(盆),每盆移栽10株健壮黄瓜苗。2结果与分析2.1微生物菌种筛选通过筛选试验,从供试的21个拮抗真菌和32个拮抗细菌中筛选出抑菌圈大、抑菌谱广、抑菌力强的菌株各两个,即拮抗真菌F43和F45及拮抗细菌B26和B32。2.2高效抗菌剂对病原菌真菌生长的影响平板对峙法试验结果表明,木霉菌株F45对西瓜枯萎病菌、杜鹃根腐病菌、丝瓜绵腐病菌、豆角和黄瓜立枯病菌及花生白绢病菌均有强烈的拮抗作用。拮抗作用的表现是病原真菌菌丝生长明显受到抑制,而木霉菌生长旺盛,产生大量短绒状气生菌丝和分生孢子丛,并直接在病原真菌菌落上生长,逐渐将病原真菌消解。在立枯丝核菌与木霉菌株F45的对峙培养中,当立枯丝核菌的菌丝遇到木霉菌丝后,生长速度减慢,逐渐被木霉菌丝及分生孢子丛覆盖。立枯丝核菌不能产生菌核,或只有极少量的细小菌核生成。2.3木霉菌株f5用量对防治效果的影响在温室盆栽条件下,空白对照不发病,病原菌对照发病率为100%,其他处理表现出不同的发病率,防治效果见表1。从表1可看出,不同的处理方法其防治效果不一样,以防治处理方法Ⅱ的防治效果最佳,该方法与其他2种处理方法相比,防治效果均有显著差异。在同一种处理方法中,随着木霉菌株F45用量的增加,防治效果也相应提高,但统计分析结果表明,除防治处理方法Ⅰ中2皿/盆用量与3皿/盆用量的防治效果差异显著外,其他2种防治方法的各种处理组合防治效果的差异均不显著。因此,从经济角度考虑,建议用最少的木霉菌用量。3田间防范试验筛选获得的木霉菌株F45对立枯丝核菌、腐霉菌、镰刀菌都具有较强的抑制作用,其抑制机理主要表现为重寄生和极强的竟争能力。木霉菌与病原真菌交错生长处变为黄色、紫色等现象,可能与木霉菌能分泌一些重要生理活性物质如分泌某种抗菌素或毒素有关。前人的研究结果表明,木霉菌对植物病原真菌的拮抗作用包含有多种机制,一般认为有竞争作用、产生抗菌素或毒素类物质及重寄生作用,其中重寄生作用是木霉拮抗植物病原菌的主要作用机制。温室盆栽试验表明,用木霉菌株F45处理土壤对防治黄瓜苗期立枯病有一定的效果。其中以木霉菌株F45先混入土壤48小时,然后再混入立枯丝核菌,再移栽黄瓜苗的处理效果为最佳,防治效果可达64.5%。本试验也对拮抗细菌进行了筛选,发现拮抗细菌菌株B26和B32对立枯丝核菌有很强的拮抗作用,但未进行室内防治试验,有待进一步研究。拮抗菌的筛选工作和室内盆栽试验仅仅是生物防治的初步工作还有许多内容有待进一