木霉颗粒剂对大豆根腐病的田间防效

木霉颗粒剂对大豆根腐病的田间防效

大豆根腐病是严重影响大豆生长的土壤传统病。在黑龙江省那城区，发病率为75%90%，全年产量为10%20%，严重病例为50%60%。目前实际生产中多采用化学药剂多克福种衣剂拌种的方法进行防治,虽然效果较好,但其毒性高,残留量大,对发展绿色食品十分不利。随着人们对食品安全性要求的提高,以及对化学药剂可能给生态环境带来潜在危机的考虑,利用可替代化学药剂的生防制剂成为迫切需要。木霉广泛存在于土壤及其它基质材料中,生存能力强,适应性广,是一种广谱性拮抗菌,能够拮抗多种病原真菌,尤其对土传真菌有显著的拮抗效果。利用木霉防治由立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)、腐霉菌(Pythiumspp)、齐整小核菌(Sclerotiumroysii)、镰刀菌(Fusariumspp)等引起的棉花、杜仲、人参、三七等的幼苗立枯病,以及对茉莉、花生和辣椒的白绢病、番茄的猝倒病等在各种小型试验中已获得较好防效,其中一些种类已经注册为微生物杀菌剂。而大豆根腐病由多种病原真菌复合侵染造成一种土传病害,主要有镰刀菌(Fusariumspp.)、腐霉菌(Pythiumspp.)和立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)。重茬使大豆根腐病加重,使其防治更加困难。为了得到一种对环境无污染又防治大豆根腐病的纯生物制剂,对多种病原菌拮抗作用强的木霉菌(Trichodermasp.),通过室内毒力测定和采用田间试验,探讨该木霉颗粒剂对重茬大豆田间应用效果,为该生防制剂的开发提供依据。1材料和方法1.1大豆根腐病病原菌-木霉菌(Trichodermasp.)和木霉颗粒剂均由哈尔滨丰禾盛生物科技发展有限公司提供,大豆根腐病病原菌(Fusariumoxysporum)由本实验室保存,因为尖孢镰孢菌(Fusariumoxysporum)为大豆根腐病主要病原菌,故做EC50(50%尖孢镰孢菌被抑制的木霉菌浓度)测定。1.2方法1.2.1木霉对大豆根腐病的抑制作用取木霉孢子浓度分别为25mL悬浮液、250、2500L、25000和250000mL的悬浮液0.5mL,移进无菌培养皿内后,每个皿中倒入冷却至40~50℃的经过高压蒸汽灭菌的PDA培养基15mL,充分摇匀。待上述含木霉孢子的平板冷却后,在其中央接入大豆根腐病病原菌——Fusariumoxysporum直径为0.5cm的菌碟。每个处理重复5次,以未加木霉的PDA平板为对照。平皿置于28℃左右恒温培养箱中培养,72h测量各平板中病原菌菌落直径,计算抑菌率。然后将抑菌率转换成几率值,同时将木霉浓度转换成自然对数,建立毒力一元一次回归方程,最后用此方程计算出木霉孢子的抑制中浓度EC50。抑菌率=(空白对照菌落直径-处理菌落直径)/空白对照菌落直径×1001.2.2%3种衣剂大豆品种为合丰25。试验地点在中国科学院海伦农业生态试验站试验田和所园区试验田(哈尔滨市)。处理有:1)木霉颗粒剂22.5kg·hm-2;2)木霉颗粒剂30.0kg·hm-2;3)木霉颗粒剂37.5kg·hm-2;4)30%多克福种衣剂包衣(1:80),购于市场,天津精中科技开发公司生产;5)空白对照。随机区组法,每处理3次重复,田间管理同当地大田,前茬均为大豆。大豆植株生长发育期间调查大豆根腐病发病级别,计算病情指数和防治效果。收获期测产,为防止边际效应的影响,在各小区内(除边缘0.5m)取2m2用于测产。2结果与分析2.1原优势菌—木霉菌对大豆根腐病病原菌的抑制能力PDA平板培养72h后测量各处理平板中病原菌菌落直径并计算抑菌率,结果显示(表1),随着木霉菌孢子浓度的增加,大豆根腐病原优势菌——尖孢镰孢菌(Fusariumoxysporum)菌落直径逐渐减小,抑菌率逐渐增大。抑菌率转换成几率值,木霉浓度转换成自然对数,建立一元一次回归方程为Y=6.63x-25.55,相关系数r2=0.99。当y=5时(抑菌率为50%时),木霉浓度为100.3个孢子·mL-1,即EC50为100.3个孢子·mL-1。可以看出该木霉菌株对尖孢镰孢菌的抑制能力较强。2.2木霉种衣剂对大豆根腐病的防效在海伦田间试验调查结果表明(图1),总体上木霉颗粒剂不同用量在大豆不同生育期对大豆根腐病的防治效果不同,4个处理前期防效均好于生长后期。木霉颗粒剂22.5kg·hm-2对大豆根腐病的防治效果前期稍低,但田间迟效性较木霉颗粒剂其它2个用量稳定,防效为14.6%~27.6%。木霉颗粒剂30.0kg·hm-2处理对大豆根腐病的防治效果苗期前期效果最好,后期防效较低,可能该用量田间迟效期较短所致。木霉颗粒剂37.5kg·hm-2的防效总体上随生育期进程迅速下降。30%多克福种衣剂在V4和R1期防效最高,为33.6%和35.9%,R3期防效稍低,为11%。哈尔滨试验田调查结果显示(图1),V2期和R1期30%多克福种衣剂对大豆根腐病的田间防效最高,分别为76.8%和49.5%,其次是木霉颗粒剂22.5kg·hm-2和木霉颗粒剂37.5kg·hm-2,防效几乎相当,分别为23.2%~43%和22.1%~44.2%%。木霉颗粒剂30.0kg·hm-2在V2和R1期防效均较差。2.3不同木霉份粒剂的产量从测产结果可以看出(表2),海伦试验田木霉颗粒剂3个剂量产量均高于对照,增产幅度为5.7%~22.3%,其中木霉颗粒剂22.5kg·hm-2产量最高,高于化学药剂对照——30%多克福种衣剂的产量。哈尔滨试验结果显示,木霉颗粒剂22.5kg·hm-2产量也最高,增产6.0%,其次为木霉颗粒剂37.5kg·hm-2,增产3.7%。3田间防效变化该木霉菌株对大豆根腐病病原菌——尖孢镰孢菌具有很强的抑制能力。木霉颗粒剂在田间对大豆根腐病有一定的防效,不同用量其防治效果不同,并且在不同试验地点效果不同,其中木霉颗粒剂用量22.5kg·hm-2的效果较好,田间迟效性较稳定,海伦试验田和哈尔滨试验田木霉颗粒剂22.5kg·hm-2处理具有明显的增产作用。根据田间效果和应用成本,木霉颗粒剂用量应选择22.5kg·hm-2。从木霉颗粒剂在海伦和哈尔滨试验看,木霉颗粒剂随用量的增加,防效没有呈现增加的趋势,可见木霉颗粒剂的用量不宜过高,并且木霉颗粒剂在2个试验点对大豆根腐病的防治效果明显不同,可能受